XRCC1 Arg399Gln基因多态性与进展期胃癌术后行腹腔热灌注化疗效果的相关性研究

崔海滨，白希永，葛怀娥，张 维

(河北省沧州市中心医院,河北 沧州 061001)

XRCC1 Arg399Gln基因多态性与进展期胃癌术后行腹腔热灌注化疗效果的相关性研究

崔海滨，白希永，葛怀娥，张 维

(河北省沧州市中心医院,河北 沧州 061001)

目的 探讨DNA修复基因X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross-complemtary protein 1, XRCC1)Arg399Gln多态性与进展期胃癌患者术后行奥沙利铂化疗为主的腹腔热灌注化疗疗效的关系。方法 选取病理证实的进展期胃癌患者49例，根治性手术后行以奥沙利铂为主的腹腔热灌注联合全身化疗。化疗前采集外周血，采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术检测XRCC1 Arg399Gln的基因多态性。结果 49例进展期胃癌患者中，28例(57%)携带XRCC1 Arg399Arg(GG)基因型，15例(31%)携带XRCC1 Arg399Gln(GA)基因型，6例(12%)携带XRCC1 Gln399Gln(AA)基因型。GG、GA和AA基因型不良反应发生率比较差异无统计学意义(P均>0.05)。其中携带GG基因型的患者术后复发率低于携带GA+AA基因型患者，但差异无统计学意义(P>0.05)；携带GG基因型的患者术后总生存率显著高于携带GA+AA基因型患者(P<0.05)。结论 XRCC1 Arg399Gln基因多态性与进展期胃癌患者术后行以奥沙利铂化疗为主的腹腔热灌注化疗的预后有关。

进展期胃癌；X射线损伤交叉互补蛋白1；奥沙利铂；腹腔热灌注化疗;基因多态性

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其病死率一直居高不下。由于胃癌发展的隐匿性，大部分患者在诊断时已经属于进展期(Ⅲ、Ⅳ期)。根治性手术是目前胃癌的主要治疗手段，其5年生存率仅为40%左右，其中腹腔内转移是进展期胃癌最常见的转移方式和致死原因[1]。目前研究发现根治性手术后早期应用奥沙利铂循环式腹腔热灌注化疗再联合全身化疗，可有效防治腹腔内肿瘤转移和复发，提高患者的生存时间[2]。然而相同化疗方案下的不同个体会产生不同的临床疗效，基因多态性是决定药物反应个体化差异的重要因素[3]。DNA修复酶X射线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross-complementary protein-1, XRCC1) Arg399Gln多态性与胃癌对铂类的化疗敏感性及预后密切相关，但研究结论不尽相同。黄朝晖等[4]研究发现，携带Arg399Gln(GG)基因型的胃癌患者具有较高的无复发生存期和总生存期；但石会勇等[5]研究发现，携带Gln399Gln(AA)基因型的胃癌患者对化疗更敏感。本研究运用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(Polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术分析XRCC1 Arg399Gln基因多态性与根治性手术后早期应用奥沙利铂循环式腹腔热灌注化疗的进展期胃癌患者的毒副反应、复发以及生存情况之间的关系，为进展期胃癌患者选择个性化的化疗药物提供一定的参考依据。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2010年5月—2012年4月在本院肿瘤外科行胃癌根治术的进展期胃癌患者49例，均经病理证实，术前无肝、肺、骨等远处转移，无手术及化疗禁忌证。其中男21例，女28例；年龄38～70(57.5±10.4)岁；ⅢA期29例，ⅢB期20例；高、中分化腺癌16例，低、未分化腺癌27例，黏液腺癌6例。

1.2 化疗方案 根据患者术后恢复情况，第1～2天开始行循环式腹腔热灌注化疗，每次90 min，1次/d，连续4 d，第1天和第4天采用奥沙利铂和氯化钠配置的腹腔热灌注液，第2天和第3天采用氟尿嘧啶和氯化钠配置的腹腔热灌注液。具体方法详见参考文献[2]。所有患者术后1个月开始全身化疗，化疗方案为紫杉醇135 mg/m2+顺铂20 mg/m2+替加氟0.8～1 g。4周为1个化疗周期，共化疗4～6个周期。

1.3 基因多态性检测 所有患者术前或化疗前抽取静脉血2 mL于EDTA试管内，置-50 ℃冰箱保存。采用北京天根生化有限公司的全血基因组DNA抽提试剂盒进行DNA提取。探针和引物均由北京赛百盛公司提供和合成。PCR扩增上游引物为5’-TTGTGCTTTCTCTGTCTCCA-3’,下游引物为5’-TCCTCCAGCCTTTCTGATA-3’。PCR反应体系及条件参考文献[4]。PCR-RFLP检测XRCC1第399号位点基因多态性。PCR扩增产物由限制性内切酶MspⅠ进行酶切。PCR产物10 μL，Buffer 1 μL，内切酶0.5 μL，去离子水4 μL，总酶切体系为15.5 μL。酶切产物经过消化后采用凝胶成像系统分析电泳结果。

1.4 随访 所有患者采用电话和复诊方式进行随访，每6个月进行随访1次，随访截止日期为2014年2月。随访时间为7～48个月，失访3例，随访率为93.9%。

1.5 疗效评价 ①毒副作用:主要记录患者发生骨髓抑制和消化道不良反应情况。②复发及生存率:复查患者胸腹CT和胃镜，了解患者术后复发情况及术后生存情况。

1.6 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件进行分析。XRCC1 Arg399Gln基因分布情况采用Hardy-Weinberg遗传平衡定律进行检验；不同基因型的毒副作用的比较采用卡方检验或Fisher精确概率法检验；不同基因型的无复发生存时间和总生存时间采用Kaplan-Meier法进行计算，差异性检验采用Log-rank检验法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 XRCC1 Arg399Gln基因分布情况 49例患者共检测出野生型(GG)28例(57%)，杂合型(GA)15例(31%)，突变型(AA)6例(12%)。基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡(2=2.66，P=0.26),提示该样本来自同一群体，达到了遗传平衡。

2.2 XRCC1 Arg399Gln基因多态性与胃癌毒副作用的关系 GG、GA和AA基因型发生骨髓抑制、恶心呕吐情况比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 XRCC1 Arg399Gln不同基因型毒副作用发生情况比较 例(%)

注：①采用Fisher精确概率法进行检验。

2.3 XRCC1 Arg399Gln基因多态性与胃癌术后复发的关系 截止2014年2月，胃癌根治术后行腹腔热灌注化疗的患者复发18例，其中携带GG基因型患者9例，无复发生存率为68%(19/28)；携带GA+AA基因型患者共9例，无复发生存率为57%(12/21)。GG基因型无复发生存率略高于GA+AA基因型，但差异无统计学意义(2=1.34，P=0.25)。这两种基因型患者的无复发生存率的Kaplan-Meier曲线见图1。

图1 XRCC1 Arg399Gln基因多态性与胃癌患者术后无复发生存时间的关系

2.4 XRCC1 Arg399Gln基因多态性与胃癌术后死亡的关系 截止2014年2月，胃癌根治术后行腹腔热灌注化疗的患者死亡22例，其中携带GG基因型患者7例，总生存率为75%(21/28)；携带GA+AA基因型患者15例，总生存率为29%(6/21)。GG基因型术后总生存率显著高于GA+AA基因型(2=5.75，P=0.02)。这两种基因型患者的总生存率的Kaplan-Meier曲线见图2。

图2 XRCC1Arg399Gln基因多态性与胃癌患者术后生存的关系

3 讨 论

胃癌的发生常常由于癌基因的激活、抑癌基因失活以及DNA修复基因功能的失调所导致。进展期胃癌根治术后常发生腹腔转移，而术后进行腹腔热灌注化疗可以清除腹腔游离的癌细胞，有助于控制胃癌腹腔转移和复发[6]。黄一唯等[7]研究也证实术中及术后行腹腔热灌注化疗，可提高胃癌患者术后的无复发生存率及总生存率。奥沙利铂是一类细胞周期非特异性药物，通过产生烷化结合物从而损伤DNA，阻断肿瘤细胞的复制和转录，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖[8]，损伤后的DNA若能及时修复，就会产生耐药，从而影响临床疗效。

XRCC1是一种重要的碱基切除修复基因，位于19号染色体的长臂(ql3.2—13.3)，全长33 kb。研究发现，XRCC1基因第10号外显子上399位密码子编码的氨基酸Arg(G)→Gln(A)的改变，改变了对DNA损伤修复的效能，同时由于XRCC1基因的变异，会影响基因编码的mRNA和蛋白水平，导致与其他功能性SNPs的连锁不平衡，从而影响奥沙利铂化疗的效果[9]。研究已证实XRCC1 Arg399Gln基因多态性与肺癌[10]、卵巢癌[11]、大肠癌[12]等对铂类为基础的化疗敏感性及预后密切相关，但在胃癌患者中，XRCC1 Arg399Gln基因多态性与铂类化疗及预后的敏感性尚存在争议。石会勇等[5]对36例中晚期胃癌患者行新辅助化疗，发现携带AA基因型的患者肿瘤细胞坏死率明显高于AG和GG基因型，提示中晚期胃癌新辅助化疗组XRCC1基因399位点AA多态性与肿瘤细胞坏死率存在相关性。但Liu等[13]对62例晚期胃癌患者观察发现，采用奥沙利铂为基础的化疗，携带AA基因型的患者存活时间长于携带GG型患者。高长明等[14]对91例晚期胃癌患者研究发现，XRCC1基因多态性与胃癌化疗敏感性没有相关性。

本研究结果显示，进展期胃癌患者术后采用腹腔热灌注联合全身化疗能提高患者的无复发生存时间和总生存期。主要毒副作用为骨髓抑制、胃肠道反应，患者均能耐受，且不同基因分型间毒副作用发生情况比较差异无统计学意义。研究还发现携带GG基因型的患者无复发生存时间长于携带GA+AA基因型患者，但生存曲线比较差异无统计学意义；携带GG基因型的患者总生存时间显著高于携带GA+AA基因型患者。这与大部分研究结果是一致的。黄朝晖等[4]研究发现携带GG基因型的胃癌患者复发率和病死率均显著低于携带GA或AA基因型患者。Huang等[15]研究发现携带GG基因型的胃癌患者无复发生存期和总生存期均显著优于携带GA和AA基因型患者。邱东明等[16]研究提示，晚期胃癌Arg/Arg基因型患者对铂类化疗药物有效率显著高于Arg/Gln+Gln/Gln基因型患者，且疾病进展时间为10个月，显著长于Arg/Gln+Gln/Gln基因型患者的7.5个月。最新发表的一项Meta分析[17]结果也提示，携带Gln/Gln基因型的患者对铂类药物化疗更敏感。

总之，XRCC1 Arg399Gln的基因多态性与进展期胃癌患者术后行奥沙利铂腹腔内热灌注化疗的预后有关，可用于指导该类药物的个体化使用，有助于提高临床治疗的针对性和可预见性。

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Study on the correlation between the gene polymorphism of XRCC1 Arg399Gln and the effect of postoperative intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy on advanced gastric cancer

CUI Haibin, BAI Xiyong, GE Huaie, ZHANG Wei

(The Centre Hospital of Cangzhou City, Cangzhou 061001, Hebei, China)

Objective It is to approach the correlation between the gene polymorphism of X-ray repair cross-complemtary protein-1(XRCC1) Arg399Gln and the effect of intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy of oxaliplatin-based on postoperative patients of advanced gastric cancer. Methods A total of 49 patients with advanced gastric cancer confirmed by pathological examination were selected, and received early cyclic intraperitoneal hyperthermic perfusion of oxaliplatin combined with intravenous chemotherapy after surgery. The gene polymorphisms of XRCC1 Arg399Gln were observed by polymerase chain reaction-Restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results Of the 49 patients with advanced gastric cancer, the frequencies of XRCC1 genotype of Arg399Arg (GG), Arg399Gln (GA), Gln399Gln (AA) were 57% (28/49), 31% (15/49) and 12% (6/49) respectively. There were no significant differences in incidence of side effect between genotype of GG, GA and AA (allP>0.05). The recurrence rate of patients with GG genotype after operation was lower than that of the patients with the GA and AA genotypes, but there was no significant difference (P>0.05). The postoperative survival rate of patients with GG genotype was significantly higher than that of patients with GA and AA genotype (allP<0.05). Conclusion The gene polymorphism of XRCC1 Arg399Gln is correlated with the prognosis of advanced gastric cancer patients treated with early cyclic intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy of oxaliplatin-based.

advanced gastric cancer; X-ray repair cross-complemtary protein-1; oxaliplatin; intraperitoneal hyperthermic perfusion chemotherapy; gene polymorphism

崔海滨，男，主治医师，主要从事胃肠肿瘤及乳腺肿瘤的研究及治疗工作。

白希永，E-mail：chess_bxy@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.12.004

R735.2

A

1008-8849(2015)12-1264-04

2014-06-15