情志护理联合补肾中药对SD大鼠PTSD胎损的母子两代行为遗传学研究

张 辉，张先庚，曹 冰，刘祥敏，龙芋君，曹 俊，谢汶倚，刘 爽

(成都中医药大学，四川 成都 611137)

论 著

情志护理联合补肾中药对SD大鼠PTSD胎损的母子两代行为遗传学研究

张 辉，张先庚，曹 冰，刘祥敏，龙芋君，曹 俊，谢汶倚，刘 爽

(成都中医药大学，四川 成都 611137)

目的 研究中医调护干预创伤后压力心理障碍症(PTSD)孕鼠对子鼠生长发育、行为的宏观表征影响。方法 按照随机数字表法将12只受孕SD母鼠分为空白对照组、PTSD组、情志中药组。采用单一长期应激(SPS)法造成PTSD模型；情志中药组造模后给予金匮肾气丸混合饲料补肾，同时放在优裕环境鼠笼构造情志护理；重复观测各组存活子鼠的体质量、身长、尾长、旷场试验(OFT)表现及糖水消耗情况。结果 PTSD组子鼠体质量增长最慢，而中药情志组体质量增长较快，且优于空白对照组(P<0.05)。PTSD组旷场试验得分低于空白对照组和情志中药组(P均<0.05), 而空白对照组与中药情志组相比差异无统计学意义。PTSD组糖水消耗量小于空白对照组和情志中药组(P均<0.05), 而空白对照组与中药情志组相比差异无统计学意义。结论 母鼠孕期PTSD可以遗传到子代,延缓子代的生长发育；金匮肾气丸联合优裕环境情志护理可纠正母鼠PTSD导致的子鼠发育迟缓,且可促进生长发育,为进一步揭示PTSD胎损的遗传和调护机制奠定了基础。

PTSD；SPS；胎损；情志护理；补肾中药；金匮肾气丸

创伤后压力心理障碍症(post-traumatic stress disorder，PTSD)指人在遭遇或对抗重大压力后，其心理状态产生失调之后遗症，这些压力包括生命遭到威胁、严重物理性伤害、身体或心灵上的胁迫[1]。PTSD作为一种精神创伤性事件后高发的、后果严重的精神疾病,在战争、社会暴力事件、重大交通事故和自然灾害等创伤意外事件中有着很高的发生率[2]。PTSD患者多伴有失业、家庭不稳定、健康等问题，具有严重的社会危害性，已引起了全社会的关注，而防治PTSD消耗着巨大的医疗资源和社会资源，成为一个迫切需要解决的科学与社会问题。中医调护方法已经广泛运用于PTSD的治疗，如魏品康等[3]研究显示中药白龙解郁颗粒可改善5.12地震后救援军人PTSD引起的躯体障碍；陈赟等[4]临床研究显示中药清心解郁汤联合西药、心理疗法等综合疗法治疗创伤后应激障碍疗效确切。本课题选择具有鲜明中医特色的中医调护措施(情志、中药)设计了随机对照研究，以期获得中医调护改善PTSD胎损的实验室证据，继承和发展中医药的经典理论和丰富的实践经验。

1 实验资料

1.1实验动物 选取初次受孕、体质量224.5～260.5g的SD雌性大鼠12只，由成都达硕生物科技有限公司提供，动物合格证号：SCXK(川)2008-24。

1.2 仪器 标准大鼠盒2套(60cm×60cm×60cm)，为塑料边框。盒底和盒盖为不锈钢丝网，盒下有塑料托盘；优裕环境情志护理鼠笼1套(100cm×100cm×100cm)，配有有洞假房、滑绳、云梯、供孕鼠啃咬的木头等，电子天平1台，直尺1把。

1.3 实验方法

1.3.1 实验分组 采用随机数字表法将12只受孕母鼠随机分为空白对照组、PTSD组以及中药情志组，每组4只，各组孕鼠体质量差异无统计学意义。

1.3.2 动物造模及干预 3组孕鼠放进标准鼠笼中饲养，每天给予足够的饲料和饮水。PTSD组及中药情志组从孕7d开始，采用通行的单一长期应激(SPS)法进行PTSD造模，即大鼠禁锢2h后,立即强迫游泳20min(水深40cm，水温25℃)，反复进行。SPS大鼠模型能够很好地模拟人类PTSD行为学与病理生理学改变，为国际公认的PTSD大鼠造模方式。造模成功后中药情志组孕鼠给予混有金匮肾气丸(北京同仁堂，研粉，0.5～0.6g/d)的饲料[5]，放置于宽敞(100cm×100cm×100cm)的鼠笼中饲养，笼中摆放大鼠喜居的窝穴、通路、洞穴、云梯、滑绳、秋千、滚球、线团、录音机和供孕鼠啃咬的木头。每天给予足够的饲料和水分以及老鼠喜好的花生和葵瓜籽，每天8：00和18：00播放胎教音乐各1h，鼠笼周保持环境温度18～20℃，空气湿度55%～75%，直至生产。保持空气流通，自然光线照明，每天12h∶12h进行明暗交替，昼夜循环[6]。PTSD组每天给予足够的饲料和饮水。

1.4 宏观表征与行为学观察

1.4.1 身长、体质量、尾长的测量 子代大鼠出生后第1，5，10，15，20，25，30天分别测量子鼠身长、体质量和尾长。用电子天平称取体质量，以g计数。将子鼠平放桌上，背面向上，使身体伸直，用尺子量取鼠头部至鼠尾根部的长度为大鼠的身长，长度单位以cm计算。使子鼠尾部伸直，贴于桌面，用直尺量取鼠尾根部至鼠尾尖部的长度，单位以cm计算。

1.4.2 旷场测试 空格测试指在120cm×120cm木板上画出正方形(15cm×15cm)，将10d、20d、30d龄的子鼠分别逐个置于纸板中央，用秒表计算2min内爬行的格数；以4只脚进入一格计算1分。

1.4.3 糖水试验 取30d龄子鼠，将子鼠禁水24h，然后给予1%蔗糖水溶液，同时禁食，24h后称量蔗糖水瓶的质量，计算子鼠在24h内蔗糖水的消耗量。

1.5 统计学方法 使用SPSS 19.0统计软件包进行统计学处理。正态分布资料采用单因素方差分析和多因素方差分析，重复测量数据采用一般线性模型(GLM)中的重复度量模块与广义线性模型(GEE)中的广义估计方程模块分析。

2 结 果

2.13组不同测量时间点体质量、身长、尾长比较 在对子鼠体质量、身长和尾长测量数据中Mauchly的球形度检验W值分别为0.002，0.143，0.07，P均<0.05,资料不满足Sphericity假设，需要自由度进行校正，且选取Greenhouse-Geisser2校正[7]，见表1。天数(体质量、身长、尾长)以及天数×体质量、天数×身长、天数×尾长的P均<0.05，说明时间因素以及时间因素和分组的交互作用具有有统计学意义，即体质量、身长、尾长随时间变化的趋势随分组不同而不同，见表2。PTSD组体质量增长最慢，而中药情志组体质量增长较快，且优于空白对照组(P<0.05)，见图1。PTSD组身长与尾长均增长最慢，而中药情志组身长与尾长均增长较快，且优于空白对照组(P均<0.05)，见图2及图3。

2.2 旷场试验结果 经广义线性模型中的广义估计方程分析可知重复观测时间点综合分析[8],空白对照组及中药情志组的旷场试验得分均优于PTSD组，中药情志组与空白对照组比较差异无统计学意义(Wald2=2.182,df=1,P=0.140>0.05)。3组旷场试验得分比较见图4及表3。

表1 体质量、身长、尾长Mauchly的球形度检验

2.3 糖水试验 PTSD组糖水消耗量为(20.7535±15.7973)g，空白对照组为(32.3816±11.2534)g，中药情志组为(28.6556±10.4965)g。经ANOVA分析可知,空白对照组糖水消耗量多于PTSD组(P=0.043<0.05);中药情志组糖水消耗量亦多于PTSD组(P=0.035<0.05);而空白对照组与中药情志组相比差异无统计学意义(P=0.497>0.05)。

表2 主体内效应的检验

图1 3组不同时间观测点体质量增长图

图2 3组不同时间观测点身长增长图

图3 3组不同时间观测点尾长增长图

图4 3组旷场试验得分比较

表3 旷场试验得分广义估计方程分析

3 讨 论

中医认为胎儿与孕母有着直接和密切的关系，“母病及子”，故母亲的任何有关气血变化都会波及胎儿的正常发育，导致胎儿损伤如出生后疾病、出生缺陷，甚至堕胎等[9]。中医“母病及子”观点表明母子作为一个整体，气血息息相通，精神因素对母体的作用会间接地影响到胎儿。当前PTSD治疗主要以西药中的精神类药物为主，但均有不同程度的不良反应，尤其对PTSD孕妇引起的不良反应就更明显。中医特色调护神志疾病已有悠久历史，疗效确切,价格低廉，且无毒副作用。中医认为PTSD的发生是内外因共同作用的结果，外因主要为来自外界的灾难性的刺激,大惊大恐比如地震；内因主要是指素体禀赋不足所导致的脏腑功能失调，主要病机为肝气郁结与肾阳不足,治疗上应内外兼治[3，10]。

本实验结果显示，PTSD组的体质量、身长、尾长增加最为缓慢，说明母鼠孕期PTSD干预可阻碍子鼠生长发育，而补肾中药联合情志护理可促进体质量、身长、尾长的发育。旷场试验是公认的反映子鼠行为症状的基本指标，其得分大小可反映大鼠的探索能力，故而这些指标一起则可以用来评价子鼠生长发育的情况[11]。本研究发现SPS法母鼠PTSD造模后子鼠出生第10，20，30天连续旷场试验得分低于空白对照组，说明母鼠PTSD可导致子鼠的行为表现变差，降低子鼠的活动能力。该结果正好印证了“肾者，做强之官，伎巧出焉”的理论[12]。本试验主要采用糖水摄入量,即对糖水的偏嗜程度来反映大鼠对食物愉快感的变化。结果PTSD组子鼠糖水摄入量明显少于空白对照组,表现出了对糖水奖赏刺激的低敏感,类似于人类抑郁症的快感缺失[13]。而中药情志组干预后糖水摄入量增加,接近空白对照组,与PTSD组相比差异有统计学意义,与文献[14]报道结果类似,提示补肾中药联合情志护理可增加大鼠对食物奖赏刺激的敏感性, 改善大鼠的快感缺失。大量研究表明，金匮肾气丸是一个经典的补肾方剂，有利于恢复恐惧导致肾虚的生理和行为紊乱[7-8，15]。

体质量、身长、尾长是反映子鼠生理变化的基本指标，而旷场试验、糖水试验则是反映子鼠行为症状的基本指标[5]。以往研究表明孕鼠若遭到压力情境，子鼠可表现出回应母代压力的遗传学变化[8],其内在机制可能与母鼠PTSD的不良影响通过表观遗传因素作用于子代有关[1]。研究表明表观遗传在PTSD发生、行为遗传与神经生物学改变中扮演“桥接”的关键角色，也是“恐伤肾”“肾主生长发育”“母病及子”的经典论述的具体体现[1，16]。

本实验不足之处在于未将补肾中药与情志护理分别作为干预因素研究，但是结合临床，对PTSD的治疗和护理往往不是采用某一措施，需要药物、心理等多手段调护。为了更好地说明对PTSD的干预效果，课题组将进一步细化研究。

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[2] Chapman C,Mills K,Slade T,et al.Remission from post-traumatic stress disorder in the general population[J].Psychological Medicine,2012,42(8):1695-1703

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Study on the effect of TCM nursing combined with tonifying kidney Chinese medicine on behavioral genetics of maternal SD rats with PTSD and their offspring

ZHANG Hui, ZHANG Xiangeng, CAO Bing, LIU Xiangmin, LONG Yujun, CAO Jun, XIE Wenyi, LIU Shuang

Chengdu University of TCM, Chengdu 611137, Sichuan, China)

Objective It is to find out the influence of TCM nursing combined with tonifying kidney Chinese medicine on behavioral genetics of maternal SD rats with post-traumatic stress disorder (PTSD) and their offspring with fetus injury.Methods 12pregnant rats were randomly divided into 3groups: blank control group, PTSD group, and emotion-medicine group.PTSD models were established by single prolonged stress (SPS).After the models were established, the rats in emotion-medicine group were given Jin Kui Shenqi Wan mixed into conventional feed to supple their kidney and given emotional nursing through enriched environmental cage.Repeat measurements included body weight, body length, tail length, open-field test (OFT) performance, and saccharose water consumption were performed on.Results The body weight increase of the offsprings in PTSD group were slowest, and the increase was faster in emotion-medicine group which was better than that in the control group (P<0.05).In OFT, PTSD group showed the lowest score (P<0.05) while there was no statistical difference between the control group and emotion-medicine group (P>0.05).In saccharose water consumption tests, the consumption of sugar water in PTSD group was the least compared with the other two groups (P<0.05), while there was no statistical difference between the control group and emotion-medicine group (P>0.05).Conclusion The negative influence derived from maternal PTSD could be handed down to the offsprings resulting in growth and development retardation.Kidney-supplementing remedy and emotional nursing could recover the retardation and even promote growth and development.Our findings might lay a foundation for further study on the genetic mechanism and treatment and prevention facing PTSD fetus injury.

PTSD; SPS; fetus injury; emotional nursing; Kidney-supplementing remedy; Jin Kui Shen Qi Pill

张辉，男,讲师，硕士研究生，主要从事中医心理学与中医护理学研究。

张先庚，E-mail:xiangengzhang666@sina.com

国家自然科学基金资助项目(81373710)；成都中医药大学科技发展基金项目(ZRMS201348)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.17.001

R-332

A

1008-8849(2015)17-1825-04

2014-11-30