温阳通痹丸质量标准研究

谢强 王志梅 邬伟魁

（梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514071）

温阳通痹丸质量标准研究

谢强 王志梅 邬伟魁

（梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514071）

目的：建立温阳通痹丸的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）鉴别温阳通痹丸中的赤芍和麻黄，采用高效液相色谱法（HPLC）测定赤芍中芍药苷的含量。色谱条件：色谱柱为岛津SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-水（18∶82），流速1.0 m L/m in，柱温30℃，检测波长为230 nm。结果：TLC的斑点清晰，阴性对照无干扰；芍药苷在10.22～ 204.40μg/m L（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均回收率为98.45%，RSD为0.7%（n=6）。结论：所建标准可用于温阳通痹丸的质量控制。

温阳通痹丸；芍药苷；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法

温阳通痹丸为梅州市人民医院的制剂，临床疗效良好，需求较大。该制剂主要由赤芍、麻黄、黄芪、红参、乳香等药味组成；具有益气养阴，活血祛瘀，温阳通痹的作用。用于糖尿病四肢麻木、凉、痛、烂及全身疼痛等症。赤芍为方中君药，可清热凉血，散瘀止痛，用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，癥瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡[1]。药理研究表明，赤芍具有抗炎、抗凝血、免疫调节等作用[2]。麻黄性温，可温经通阳，为方中臣药。赤芍和麻黄的主要化学成分分别为芍药苷和盐酸麻黄碱。原标准已不能有效控制制剂质量，本文参考现行药典收载方法及文献报道[3-5]，研究建立了赤芍、麻黄的薄层色谱法（TCL）鉴别和高效液相色谱法（HPLC）测定芍药苷含量的方法。该方法简便、快速、准确、重复性好，可更好地控制温阳通痹丸的质量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Agilent 1100；色谱柱：SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm），SN：8022538；电子分析天平：AB204-N，NO：1202410309；超声仪：KQ250DE；硅胶G（青岛海洋化工集团公司，批号：0120213，自制薄层板规格为10 ×20 cm，厚0.5 mm）；乙腈为色谱纯；水为超纯水（自制）；其他试剂均为分析纯。芍药苷对照品（批号：110736-201136），盐酸麻黄碱对照品（批号：171241-200506）均由中国药品生物制品检定所提供；温阳通痹丸（梅州市人民医院提供，批号：20130502，20130715，20131007）。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 赤芍取本品粉末5 g，加乙醇20 m L，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 m L使溶解，滤过，滤液用乙醚振摇提取2次，每次15 m L，弃乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15 m L，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加乙醇1 m L使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 m L含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另按处方配比及制法制备缺赤芍的阴性样品，同上述供试品溶液制备法制备阴性对照溶液。照TLC（附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。见图1。

2.1.2 麻黄取本品粉末5 g，加乙醚20 m L与浓氨试液1 m L，密塞，放置2小时，时时振摇，滤过。药渣用乙醚15 m L分3次洗涤，滤过，合并滤液，加盐酸乙醇溶液（1→20）1 m L，摇匀，蒸干，残渣加甲醇2 m L使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1 m L含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另按处方配比及制法制备缺麻黄的阴性样品，同上述供试品溶液制备法制备阴性对照溶液。照TLC（附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40∶7∶1）为展开剂，展开，取出晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图2。

图1 赤芍TLC图

图2 麻黄TLC图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱：岛津 SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-水（18∶82）；流速：1.0 m L/m in；柱温：30℃；检测波长为230 nm；进样量为10μL。

2.2.2 溶液的制备①对照品溶液：取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 m L含40μg的溶液。②供试品溶液：取本品粉末约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 m L，密塞，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 m in，取出，放冷，称定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。③阴性对照溶液：按处方比例及工艺，制成不含赤芍的阴性样品，并按上述供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.3 专属性考察吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，分别按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果阴性对照色谱在与对照品色谱相应位置上无干扰峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无影响。芍药苷的保留时间约为6 m in，分离度大于1.5，理论板数按芍药苷峰计算不低于5 000。见图3。

图3 芍药苷HPLC图

2.2.4 标准曲线的制定分别精密吸取芍药苷对照溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0 m L置 10 m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取 10μL注入液相色谱仪中，测定芍药苷的含量，以进样浓度（X）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程为

Y=13.757 3X－0.593 7。

r=0.999 9，结果表明，芍药苷在 10.22～204.40μg/m L范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液，连续进样6次，测得芍药苷峰面积的RSD为0.71%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验取同一批样品（批号：20130502）6份，依法制备供试品溶液并测定含量，结果样品中含芍药苷平均值为 1.66 mg/g，RSD为 1.09%（n＝6）。

2.2.7 稳定性试验取同一份供试品溶液（批号：20130502），分别于0，1，2，4，8，12，24 h进样10μL，测定其峰面积，结果芍药苷在0～ 24 h测定的峰面积的RSD为 0.35%，表明供试品溶液在24小时内稳定。

2.2.8 加样回收率试验取已知含量的同一批样品（批号：20130502）适量，精密加入一定量的芍药苷对照品，按供试品溶液的制备方法制备加样供试品溶液，测定，计算加样回收率。结果见表1。

2.2.9 样品含量测定分别取3批样品按2.2.2项下方法制得供试品溶液，进行测定，计算含量。结果 3批样品中芍药苷含量分别为 1.66，1.65，1.61 mg/g。

根据以上3批样品的含量测定，确定本品的含量限度为：本品每1 g含赤芍以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于1.3 mg。

表1 加样回收试验

3 讨论

原标准为广东省食品药品监督管理局医疗机构制剂注册标准——粤ZB20110015（Z）。原标准仅对麻黄（盐酸麻黄碱）进行了TLC鉴别，无含量测定方法。原标准中供试品的提取溶剂为三氯甲烷，本研究更换了试剂，优化了供试品的制备方法；原展开系统为三氯甲烷-甲醇-浓氨试液（20∶5∶0.5），使用了毒性较大的三氯甲烷，本研究通过实验更换成毒性较小的试剂并调整了展开剂的比例，调整后的展开系统为二氯甲烷-甲醇-浓氨试液（40∶7∶1），实验所得色谱斑点清晰，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上斑点对应良好，且阴性对照无干扰。

芍药苷含量测定流动相选择时，曾参照现行药典，流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（12∶88），但保留时间较长，最后选用乙腈-水（18∶82）[6]，缩短了保留时间。

值得注意的是，目前对赤芍的质量控制主要是根据芍药苷的含量高低来进行评价，近年来，有研究者[7]采用HPLC建立了评价赤芍质量的特征指纹图谱分析方法，指纹图谱在制剂[8]质量评价中的应用也日渐增多。此外，一测多评[9-10]也是近年来兴起的符合中药特点的中药产品质量控制[11]模式。很多医疗机构中药制剂的临床需求量都较大，但其质量控制总体水平尚落后于市售中成药。在一些医院制剂大品种的质量标准提高时，建议有条件的医院引进先进的中药质量控制技术，严格控制产品的质量，确保制剂的临床安全性和有效性。

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Studies on Quality Standard of W enyang Tongbi Pills

Xie Qiang,Wang Zhimei，Wu Weikui（Meizhou Institute for Food and Drug Control，Guangdong Meizhou 514071，China）

Objective:To establish the quality standard of wenyang tongbi pills.M ethods:TLC was used to determine Paeonide radix rubra and Ephedrae herba in wenyang tongbi pills，and HPLC was used to determ ine the content of paeoniflorin.A chromatographic column of SHIADZU VP-ODS（250 mm ×4.6 mm，5μm）was used w ith a mobile phase of acetonitrile-water （18∶82）at a flow rate of 1.0 m L/m in,the detection wavelength was at 230 nm and the room temperature was at 30℃.Results:The spots of TLC were fairly clear and the negative control w ithout interference.A good linear relationship of paeoniflorin was from 10.22 to 204.40μg/m L（r= 0.999 9）.The average recovery was 98.45%,RSD was 0.7%（n=6）.Conclusion:The established standard is applicable for the quality control of wenyang tongbi pills.

Wenyang Tongbi Pills；Paeoniflorin；Ephedrin Hydrochloride；TLC；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.05.007

2015-01-23）

谢强，男，副主任药师。主要从事药品质量研究工作。E-mail：xqmzmzb@21cn.net

王志梅，女，主管中药师。主要从事药品检验及质量标准研究工作。通讯作者E-mail：wangzhimei@gdda.gov.cn