生物钟基因Clock对iPSCs分化作用的研究

赵　冉，杨　羊，徐　晨，李二敏，陆　超，孙　宁，钱睿哲(复旦大学基础医学院生理与病理生理学系，上海200433)

生物钟基因Clock对iPSCs分化作用的研究

赵冉，杨羊，徐晨，李二敏，陆超，孙宁，钱睿哲△
(复旦大学基础医学院生理与病理生理学系，上海200433)

目的:研究生物钟基因Clock对干细胞分化成熟过程的影响和机制。方法:我们将携带有Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4的TetO-FUW-OSKM慢病毒转染入小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中，利用PCR、免疫荧光法、碱性磷酸酶染色和拟胚体形成实验鉴定细胞的多能性。通过RNAi技术抑制Clock基因表达，观察Clock基因对iPSCs分化的影响。结果:小鼠MEF在转染后12 d形成典型的小鼠ESC样克隆。RT-PCR显示iPSCs表达多能性基因Nanog、Sox2、Oct4、Dax1、Esg1、ERas、Zfp296和Klf4;细胞碱性磷酸酶染色阳性;细胞免疫荧光检测结果显示有Oct4和SSEA1的表达;培养可见拟胚体的形成。因此，我们成功将小鼠MEF重编程为iPSCs。细胞非定向分化实验发现，转染48 h后，对照组克隆边缘不光滑，有伪足伸出，提示iPSCs存在分化; Clock-siRNA组的iPSCs克隆仍保持边缘光滑，极少有伪足伸出，RT-PCR提示多能性基因Sox2、Oct4和Klf4表达较对照组升高。结论:生物钟基因Clock可能参与了iPSCs的分化过程。

△E-mail: rzqian@shmu.edu.cn