野鸦椿籽中三萜类化合物的分离与鉴定

向德标， 胡乔铭， 谭 洋， 孟英才， 裴 刚

（湖南中医药大学药学院，湖南长沙410208）

［成分分析］

野鸦椿籽中三萜类化合物的分离与鉴定

向德标， 胡乔铭， 谭 洋， 孟英才， 裴 刚*

（湖南中医药大学药学院，湖南长沙410208）

目的对野鸦椿籽70%乙醇提取物的二氯甲烷及正丁醇萃取部位所含三萜类成分进行研究。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱方法进行分离、纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定结构。结果从二氯甲烷及正丁醇部分分离得到8个单体化合物，分别鉴定为木鳖子酸 （1）、熊果酸 （2）、3β，19α-二羟基-乌索-12-烯-28α-酸 （3）、β-谷甾醇 （4）、胡萝卜苷 （5）、白桦脂酸 （6）、马斯里酸 （7）、坡模酸 （8）。结论三萜化合物1、2、3、6、7、8均是首次从该植物中分离得到。

野鸦椿籽；三萜类化合物；分离；结构鉴定

野鸦椿籽为省沽油科植物野鸦椿Euscaphis fukienensis Hsu的干燥果实，其性微温，味苦。《四川中药志》载，野鸦椿籽可治疗月瘕、月经不调、膀胱疝气、痢疾泄泻；《湖南药物志》载，野鸦椿籽可治疗寒疝肿痛、睾丸肿、脱肛、子宫脱垂；《福建中草药》载，野鸦椿籽温中理气，消肿止痛，可治疗胃痛、寒疝、泻痢、脱肛、子宫下垂、睾丸肿痛。野鸦椿含有苯丙素类、黄酮类、酚酸类、生物碱类、三萜类以及芳香族化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肝纤维化、抗细胞增殖、抗菌等药理作用［1-7］。前期实验发现，野鸦椿籽乙醇提取物中含有大量的三萜类化合物，而且其活性十分广泛。为进一步研究野鸦椿中的三萜类化合物是否是该植物发挥药理作用的物质基础，有必要对其进行系统的分离纯化。本实验通过对野鸦椿籽二氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇部分浸膏进行成分分离，得到6个三萜类化合物。

1 仪器与试药

BRUKER-500超导核磁共振仪（德国Bruker公司）；LDS-10台式低速离心机 （北京京立记心机有限公司）；硅胶G、硅胶GF254（青岛海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）。所用试剂均为分析纯 （国药集团化学试剂有限公司）。

野鸦椿籽采购自福建省三明市 （经由湖南中医药大学药用植学教研室刘叶曼副教授鉴定），晒干，置电热恒温箱中（60±5）℃烘干至恒定质量，粉碎备用。

2 提取分离

野鸦椿籽粗粉2 kg，70%乙醇回流提取3次，浓缩至3 000 mL，放冷过滤，滤液依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，回收溶剂，浓缩液蒸干。二氯甲烷萃取部位 （82.0 g）经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇 （100：0→0：100）梯度洗脱，每200mL为一流份，以薄层硅胶色谱 （TLC）检识合并相同的部分，最后得到12个流份 （D.1～D.12）。D.2用三氯甲烷溶解，经过重结晶后得到化合物4；D.4经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇 （100：0→50：50）梯度洗脱。D.4.6中析出结晶，经重结晶后得到化合物6；D.5经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇 （100：0→50：50）梯度洗脱，得到18个流份（D.5.1～D.5.18）。D.5.6中析出白色粉末状固体，过滤得到化合物1；D.6经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-乙酸乙酯 （100：0-1：1）梯度洗脱，得到21个流份（D.6.1～D.6.21）。D.6.5经Sephadex LH-20柱色谱，三氯甲烷-甲醇 （2：3）洗脱，并结合重结晶得到化合物2；D.10用三氯甲烷溶解，重结晶后得到化合物5。乙酸乙酯部位 （49.2 g）经硅胶柱层析，以乙酸乙酯-甲醇 （100：0→1：1）梯度洗脱，TLC检测合并后得到 10个流份（E.1～E.10），E.7继续硅胶柱层析，以乙酸乙酯-甲醇 （100：0→1：1）梯度洗脱，得到11个流份。其中E.7.6中析出白色固体，经重结晶后，得到化合物7。正丁醇萃取部位 （85.2 g）经硅胶柱层析，以二氯甲烷-乙酸乙酯 （100：0→50：50）进行梯度洗脱，每200 mL为一流份，浓缩后得到154个流份 （B.1～B.154）。B.54中得到白色固体粉末，用少量甲醇洗涤，并用二氯甲烷-甲醇混合溶剂溶解，重结晶后得到化合物3；B.65继续进行硅胶柱层析，以乙酸乙酯-甲醇 （100：0→1：2）进行梯度洗脱，得到 20个流份 （B.65.1～B.65.20）。其中B.65.16中析出白色粉末，经重结晶后得到化合物8。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末 （甲醇），易溶于甲醇，不溶于苯、石油醚，Liebermann-Burchard反应呈绿色。1H-NMR（500 MHz，MeOD）δ：1.00（3H，s，H-24），1.17（3H，s，H-25），0.94（3H，s，H-26），1.31（3H，s，H-27），0.88（3H，s，H-29），0.91（3H，s，H-30），1.03（3H，s，H-23），5.23（1H，t，J=3.5 Hz，H-12），3.33（1H，dd，J=12.0，4.5 Hz，H-3），3.06（1H，tlike，J=12.0 Hz，H-2β），2.83（1H，dd，J= 4.0，13.5 Hz，H-18），2.28（1H，ddd，J=4.5，5.0，18.5 Hz，H-11），2.21（2H，m，H-2，H-9）。13C-NMR（MeOD，125 MHz）δ：213.7（C-1），180.6（C-28），143.2（C-13），122.6（C-12），78.2（C-3），54.4（C-5），52.4（C-10），46.4（C-17），45.6（C-19），43.6（C-2），41.7（C-14），41.7（C-8），41.6（C-18），39.1（C-4），39.1（C-9），33.6（C-7），32.5（C-22），32.4（C-21），32.2（C-29），30.2（C-20），27.6（C-23），27.4（C-15），24.9（C-11），24.9（C-27），22.7（C-16），22.6（C-30），17.5（C-6），17.0（C-26），15.2（C-24），14.0（C-25）。以上数据均与文献［8］报道一致，故鉴定化合物1为木鳖子酸。

化合物2：白色粉末状结晶 （甲醇），易溶于甲醇，略溶于二甲基亚砜，不溶于苯、石油醚，Liebermann-Burchard反应呈绿色。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：1.20，1.33，1.36，1.54，1.56（各3H，s），1.26（3H，d，J=5.8 Hz，H-30），1.31（3H，d，J=6.0 Hz，H-29），5.32（1H，brs，H-12）。13C-NMR（C5D5N，125 MHz）δ：180.0（C-28），139.4（C-13），125.7（C-12），78.2（C-3），55.9（C-5），53.7（C-18），48.2（C-9），48.2（C-17），42.6（C-14），40.07（C-8），39.6（C-20），39.5（C-19），39.5（C-4），39.2（C-1），37.5（C-10），37.4（C-22），33.7（C-15），31.2（C-7），28.9（C-23），28.8（C-21），28.2（C-2），25.1（C-11），24.8（C-16），24.0（C-27），23.7（C-39），21.5（C-30），18.9（C-6），17.6（C-24），16.7（C-25），15.8（C-26）。以上核磁数据与文献［9］报道一致，故鉴定化合物2为熊果酸。

化合物3：白色无定形粉末 （甲醇），易溶于甲醇，不溶于苯、石油醚。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：1.22（3H，s，H-25），1.33（3H，s，H-24），1.42（3H，s，H-26），1.54（3H，s，H-23），1.76（3H，s，H-29），2.03（3H，s，H-27）；1.43（3H，d，J=4.0 Hz，H-30）；3.76（1H，dd，J=11.0，5.0 Hz，H-3）；5.92（1H，brs，H-12），5.31（1H，s，19-OH）。13C-NMR（125 MHz，C5D5N）δ：180.8（C-28），140.0（C-13），128.1（C-12），78.3（C-3），72.8（C-19），56.0（C-5），54.7（C-18），48.4（C-17），47.9（C-9），42.5（C-20），42.2（C-14），40.5（C-8），39.5（C-4），39.1（C-1），38.6（C-22），37.5（C-10），33.7（C-7），29.4（C-15），28.9（C-23），28.2（C-2），27.2（C-29），27.0（C-21），26.5（C-16），24.8（C-27），24.1（C-11），19.0（C-6），17.3（C-26），16.9（C-30），16.6（C-24），15.7（C-25）。以上数据均与文献［10］报道一致，故鉴定化合物3为3β，19α-二羟基-乌索-12-烯-28α-酸。

化合物4：透明针片状结晶 （三氯甲烷），易溶于三氯甲烷，Liebermann-Burchard反应呈阳性，与β-谷甾醇对照品在TLC中的Rf值及显色行为一致，因此确定化合物4为β-谷甾醇。

化合物5：白色无定形粉末 （三氯甲烷-甲醇），Liebermann-Burchard反应呈阳性，与胡萝卜苷对照品在TLC中的Rf值及显色行为一致，故确定化合物5为胡萝卜苷。

化合物6：白色结晶粉末 （三氯甲烷），易溶于四氢呋喃、吡啶，微溶于甲醇、乙醇、丙酮，不溶于水。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：0.96，0.82，0.94，0.96，0.97（各3H，s，H-24，H-25，H-23，H-26，H-27），1.70（3H，s，H-30），2.99（1H，dd，J=4.7，10.8 Hz，H-19），3.16（1H，dd，J=5.0，1.2 Hz，H-3），4.61（1H，d，J=2.2 Hz，H-29α），4.74（1H，d，J=2.2 Hz，H-29β）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：178.6（C-28），150.6（C-20），108.7（C-29），78.7（C-3），56.1（C-17），55.7（C-5），51.2（C-9），49.1（C-18），47.0（C-19），42.3（C-14），41.5（C-8），40.7（C-1），39.6（C-4），39.4（C-13），37.4（C-22），36.7（C-10），36.5（C-16），31.9（C-7），30.3（C-21），29.6（C-15），26.8（C-23），26.7（C-2），25.6（C-12），20.8（C-11），20.8（C-30），18.2（C-6），16.8（C-26），16.0（C-24），15.9（C-25），14.0（C-27）。以上数据与文献 ［11］报道一致，确定化合物6为白桦脂酸。

化合物7：淡黄色无定形粉末 （甲醇），易溶于甲醇、吡啶，Liebermann-Burchard反应呈绿色，1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：5.26（1H，t，J=5.0 Hz，H-12），3.64（1H，dt，J=5.0，10.0 Hz，H-2），2.91（1H，d，J=10.0 Hz，H-3α），2.83（1H，d，J=5.0 Hz，H-18），（各3H，s）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：180.0（C-28），143.9（C-13），122.0（C-12），83.0（C-3），68.1（C-2），55.3（C-5），47.6（C-9），46.7（C-19），46.2（C-1），45.8（C-17），41.5（C-14），41.3（C-18），39.2（C-8），39.1（C-4），37.8（C-10），33.5（C-21），32.5（C-7），32.4（C-22），32.1（C-29），30.2（C-20），27.9（C-15），27.4（C-23），25.0（C-27），23.2（C-11），22.6（C-16），22.6（C-30），18.1（C-6），16.3（C-26），16.0（C-24），15.7（C-25）。以上数据与文献 ［12］报道一致，确定化合物7为马斯里酸。

化合物8：白色无定形粉末 （三氯甲烷-甲醇），溶于二甲基亚砜，Liebermann-Burchard反应呈绿色。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：0.94，1.05，1.14，1.26，1.48，1.75（各 3H，s，H-25，H-23，H-26，H-24，H-29，H-27），1.15（3H，d，J=6.6 Hz，H-30），3.08（1H，s，H-18），3.45（1H，dd，J=10.8，5.4 Hz，H-3），5.64（1H，brs，J=3.2 Hz，H-12）。13C-NMR（125 MHz，C5D5N）δ：180.8（C-28），140.0（C-13），128.1（C-12），78.3（C-3），72.8（C-19），56.0（C-5），54.7（C-18），48.4（C-17），47.9（C-14），42.5（C-9），42.2（C-20），40.5（C-8），39.5（C-1），39.1（C-4），38.6（C-22），37.5（C-10），33.7（C-7），29.4（C-15），28.9（C-23），28.2（C-2），27.2（C-30），27.0（C-21），26.5（C-16），24.8（C-11），24.1（C-27），19.0（C-6），17.3（C-29），16.9（C-26），16.6（C-25），15.7（C-24）。以上核磁数据与文献［13］报道一致，确定化合物8为坡模酸。

4 讨论

三萜类化合物的药理活性十分广泛，具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、调节免疫等多种作用。野鸦椿籽中所含三萜类成分的相对含有量较高，因此，对其进行分离和药理活性研究是很有意义的，而且对野鸦椿药用资源的开发也具有十分积极的作用。

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Isolation and identification of triterpenoids from fruits of Euscaphis fukienensis

XIANG De-biao， HU Qiao-ming， TAN Yang， MENG Ying-cai， PEIGang*

（College of Pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，China）

AIMTo investigate triterpennoids from methylene dichloride and n-butanol parts from 70%ethanol extractof the fruits of Euscaphis fukienensis.METHODSThe triterpenoidswere isolated and purified by silica gel and Sephadex LH-20 column chromatographies.Their structures were identified by spectroscopic methods and physicochemical properties.RESULTSEight compounds were isolated and identified as momordic acid（1）、ursolic acid（2）、3β，19α-dihydroxyurs-12-en-28α-oic acid（3）、β-sitosterol（4）、daucostrol（5）、betulinic acid（6）、maslinic acid（7）、pomonic acid（8）.CONCLUSIONTriterpennoids1、2、3、6、7、8are isolated from the fruits of Euscaphis fukienensis for the first time.

Euscaphis fukienensis Hsu fruits；triterpennoids；isolated；identified

R284.1

A

1001-1528（2015）04-0793-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.021

2014-07-18

湖南省 “十二五”重点学科开发基金项目资助 （2014）；湖南省高层次卫生人才 “225”工程项目资助 （2013）；湖南中医药大学 “十二五”校级重点学科资助 （2012）

向德标（1989—），男，硕士，研究方向为中药化学。Tel：15343310781，E-mail：xiangdebiao@163.com

*通信作者：裴 刚（1971—），男，教授，研究方向为中药化学与分析。Tel：13467548983，E-mail：peigang@hotmail.com