胡颓子叶化学成分的研究

黄丽杰， 刘 伟， 崔永霞

（河南中医学院，河南郑州450008）

胡颓子叶化学成分的研究

黄丽杰， 刘 伟*， 崔永霞

（河南中医学院，河南郑州450008）

目的研究胡颓子叶的化学成分。方法胡颓子叶乙酸乙酯部位和正丁醇部位采用大孔吸附树脂柱、硅胶柱和DiaionHP-20、ToyopearlHW-40凝胶柱等柱色谱技术进行分离纯化，根据化合物的理化性质、核磁共振谱和红外光谱数据进行结构鉴定。结果从胡颓子叶乙酸乙酯部位分离得到8个化合物，经鉴定，分别为3，3-二甲基-5-氧代-2-己醇烯丙酸酯 （1）、β-谷甾醇 （2）、水杨酸 （3）、香草酸 （4）、没食子酸 （5）、山柰酚 （6）、槲皮素 （7）、银椴苷（8）；从正丁醇部位分离得到5个化合物，经鉴定，分别为芦丁 （9）、葛花苷 （10）、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（11）、3＇-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L-吡喃鼠李糖苷 （12）、3＇-甲氧基槲皮素 （13）。结论化合物1、8、9、10为首次从该属植物中分离得到。

胡颓子叶；化学成分；分离鉴定

胡颓子Elaeagnus pungens Thunb为胡颓子科胡颓子属植物，分布于长江流域以南各省区，果、根及叶入药，中医将其用作平喘要药［1］。胡颓子叶曾收载于 《中国药典》1977年版一部，具有止咳平喘、止血、解毒之功效。目前国内外对胡颓子叶化学成分的研究报道并不多见，为了更好地利用这一丰富的药用植物资源，进一步明确其有效成分与活性之间的关系，先前通过药理实验，已初步筛选出该植物止咳平喘的活性部位为乙酸乙酯部位和正丁醇部位。本实验将对胡颓子叶这两个部位进行更深入的化学成分研究。

1 仪器与材料

布鲁克AVANCEⅢ500MHz全数字化超导核磁共振仪（美国布鲁克公司）；菲尼根LCQ Advantage MAX多级离子阱液质联用仪（美国赛默飞世尔科技公司）；Kofler显微熔点测定仪（金伦科技香港有限公司）；Shimadzu FTIR-8201红外分光光度计（美国PE公司）；柱色谱凝胶DiaionHP-20、Toyopearl HW-40（日本TOSOH公司）；柱色谱硅胶H（100～140目，200～300目，青岛海洋化工有限公司）；薄层色谱硅胶G（粒径10～40μm，青岛海洋化工有限公司）。胡颓子叶于2012年购买自安徽亳州，由河南中医学院董诚明教授鉴定为胡颓子科胡颓子属植物胡颓子Elaeagnus pungens Thunb的干燥叶。

2 提取分离

取干燥胡颓子叶15 kg，分别用95%乙醇、50%乙醇加热回流提取2次，第1次加入8倍量回流2 h，第2次加入6倍量回流1 h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至膏状无醇味。浸膏质量约为1 056 g，加适量的水制成混悬液，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，将各部位低温回收溶剂，干燥。

取乙酸乙酯部位234 g，硅胶柱层析分离（10 cm×100 cm玻璃层析柱，100～140目硅胶），三氯甲烷-甲醇 （100：0→95：5→9：1→8：2→7：3→5：5→0：100）梯度洗脱，共收集160个流份 （1～160）。TLC检测合并相同流份，利用硅胶（200～300目）柱和DiaionHP-20、ToyopearlHW-40凝胶柱等柱色谱技术及重结晶等方法对该部位进行分离纯化，共得到8个化合物 （1～8）。

取正丁醇部位200 g，用水溶解，滤过，滤液上AB-8大孔吸附树脂柱层析分离，水、30%、60%、95%甲醇梯度洗脱，TLC检测合并相同流份，再经硅胶柱及凝胶柱层析反复分离，共得到5个化合物 （9～13）。

3 化合物的结构鉴定

化合物1：白色粉末，溶于甲醇。IR（cm-1）：1 615、1 663是羰基 （C=O）伸缩振动吸收峰，3 027是烯烃伸缩振动吸收峰，1 022、1 071、1 123、1 195、1 251、1 290是酯类伸缩振动吸收峰。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：5.78（2H，t，J=4.3 Hz，H-2），5.87（1H，d，J= 1.1 Hz，H-8），4.32（1H，q，J=1.5 Hz，H-2），1.90（3H，d，J=1.0 Hz，H-1），1.23（3H，s，H-10），1.00（3H，s，H-11）。13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：201.2（C-5），167.5（C-7），129.9（C-9），127.1（C-8），79.9（C-2）。光谱数据与文献 ［2］报道基本一致，综合确定该化合物为3，3-二甲基-5-氧代-2-己醇烯丙酸酯（3，3-dimethyl-5-oxo-2-hexanol allyl ester）。

化合物2：无色针状结晶，mp 139～142℃。IR（cm-1）：3 430为羟基伸缩振动吸收峰，2 936、2 852为甲基和亚甲基的C-H伸缩振动吸收峰，1 382、1 368为异丙基C-H弯曲振动吸收峰，1 061为C-O伸缩振动吸收峰。1H-NMR（CDCl3，500 MHz）δ：5.24（1H，t，J=3.4 Hz，H-5），3.62（1H，m，H-2），0.81、0.85、0.88、0.90、0.96、1.01为 6个甲基信号。光谱数据与文献［3］报道基本一致，且与β-谷甾醇对照品比较，Rf值、显色行为均一致，混合熔点不下降，故确定该化合物为β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物3：无色针状结晶，mp 135～137℃，三氯化铁-铁氰化钾显蓝色，提示化合物含有酚羟基；溴酚蓝反应阳性，表明有羧基存在。IR（cm-1）：3 238是羟基 （OH）的伸缩振动吸收峰，3 238～2 857宽峰，为羧基中-OH的伸缩振动吸收峰，1 659是羰基 （C=O）伸缩振动吸收峰，1 612、1 483、1 465是苯环的骨架伸缩振动吸收峰，759、697、659为苯环C-H面外弯曲振动吸收峰。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.86（1H，d，J=7.4 Hz，H-3），7.44（1H，t，J=6.9 Hz，H-4），6.90（1H，t，J=8.8 Hz，H-5），7.85（1H，dd，J=1.4，7.7 Hz，H-6）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：173.5（C-7），163.2（C-2），136.6（C-4），131.5（C-6），120.0（C-5），118.1（C-3），113.9（C-1）。光谱数据与文献［4］报道基本一致，确定该化合物为水杨酸 （Salicylic acid）。

化合物4：无色针晶，溶于甲醇，mp 204～206℃，三氯化铁-铁氰化钾显蓝色，提示化合物含有酚羟基。IR vKBrmax（cm-1）：3 485是羟基（OH）的伸缩振动吸收峰，3 099～2 855宽峰，为羧基中-OH的伸缩振动吸收峰，1 683是羰基（C=O）伸缩振动吸收峰，1 598、1 523、1 473、1 454是苯环的骨架伸缩振动吸收峰，765、721、637为苯环C-H面外弯曲振动吸收峰。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.47（1H，dd，J=1.5，8.1 Hz），6.86（1H，d，J=1.5 Hz），6.74（1H，d，J=8.1 Hz），表明分子中有两个苯环上的邻位氢，且有间位偶合；3.87（3H，s）为甲氧基氢信号。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：175.5为羰基碳信号；148.1，149.9为苯环上连氧的碳信号，其中148.1是甲氧基碳信号。光谱数据与文献 ［5］报道基本一致，综合以上信息鉴定该化合物为香草酸（vanillic acid）。

化合物5：棕色针晶，溶于甲醇，mp 236～238℃，三氯化铁-铁氰化钾显蓝色，提示化合物含有酚羟基；溴酚蓝反应阳性，表明有羧基存在。IR（cm-1）：3 285，3 366，3 496是羟基（-OH）的伸缩振动吸收峰，2 668，3 065为羧基中-OH的伸缩振动吸收峰，1 669、1 702是羧酸上羰基 （C=O）伸缩振动吸收峰。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.04（2H，s），说明有两个处在对称位置的氢。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.4（C-7），146.4（C-3，5），139.6（C-4），121.9（C-1），110.3（C-2，6）。光谱数据与文献 ［6］报道基本一致，确定该化合物为没食子酸（gallic acid）。

化合物6：黄色粉末，溶于甲醇，mp 276℃，三氯化铁-铁氰化钾显蓝色，提示化合物中含有酚羟基；盐酸镁粉反应阳性，说明该化合物为黄酮类化合物。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.17（1H，d，J=1.9 Hz），6.38（1H，d，J=1.9 Hz）。J=1.9 Hz表明A环上两个质子为间位偶合关系，分别为6位和8位质子信号，即5，7位二取代；8.08（2H，dd，J=1.6，7.4 Hz），6.90（2H，dd，J=1.7，7.4 Hz）表明B环为对位取代。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：177.4为羰基碳；5，7位的碳信号向低场移至162.5，165.6，可以确定该位置为羟基取代；137.2，158.3为连有羟基的碳信号。光谱数据与文献 ［7-8］报道基本一致，确定该化合物为山柰酚（kaemferol）。

化合物7：黄色粉末，溶于甲醇，mp 312～314℃，三氯化铁-铁氰化钾显蓝色，提示化合物中含有酚羟基；盐酸镁粉反应阳性，Molish反应为阴性，提示该化合物为黄酮类化合物的苷元。IR（cm-1）：3 297，3 379是羟基 （OH）的伸缩振动吸收峰，1 660是羰基 （C=O）伸缩振动吸收峰，1 615、1 555、1 513、1 457是苯环的骨架伸缩振动吸收峰。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.17（1H，d，J=2.0 Hz），6.38（1H，d，J= 2.0 Hz）。J=2.0 Hz表明A环上两位质子为间位偶合关系，分别为6位和8位质子信号，即5，7位二取代；6.87（1H，d，J=8.7 Hz，H-5＇），7.63（1H，dd，J=8.3 Hz，2.0 Hz，H-6＇），7.72（1H，d，J=2.0 Hz，H-2＇）为B环上的三个质子信号，为1，3，4位三取代。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：177.3为羰基碳；5，7，3＇，4＇位的碳信号向低场移至162.5，165.6，148.0，146.2，可以确定为羟基取代。以上数据与文献［9］报道基本一致，且与槲皮素对照品比较，TLC，Rf值一致，混合熔点不下降，故确定该化合物为槲皮素（quercetin）。

化合物8：浅黄色粉末，溶于甲醇，mp 257～260℃，盐酸-镁粉反应显阳性，Molish反应显阴性，提示该化合物为黄酮类化合物的苷元。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.98（2H，d，J= 8.9 Hz）、6.84（2H，d，J=8.9 Hz）出现两个双氢双峰，提示分子中有一个AA＇BB＇系统的苯环；7.36（1H，d，J=8.7 Hz，H-6＇），7.33（2H，d，J=15.7 Hz，H-5＇）；6.77（2H，d，J=8.5 Hz）为6、8位氢质子信号，显示A环为5、7-二羟基取代；δ6.36处有一个单质子单峰，推测为黄酮H-3信号；6.13（1H，d，J=2.0 Hz）、6.05（1H，d，J=15.9 Hz）、5.43（1H，d，J=7.5 Hz）为葡萄糖端基氢信号峰。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：177.7（C-4），166.5（C-2），164.9（C-7），161.5（C=O），160.4（C-5），160.2（C-4＇），156.7（=CH），145.0（C-4″），133.4（C-3），131.2（C-3＇，5＇），130.5（CH=），125.3（C-1″），121.1（C-1＇），116.1（C-3″，5″），115.4（C-2＇，6＇），114.0（C-2″，6″），104.1（Cglc-1），101.4（CH2O），99.2（C-6），94.1（C-8），76.6（Cglc-5），74.6（Cglc-3），74.5（Cglc-2），70.3（Cglc-4），63.3（Cglc-6）。MS（FAB）：m/z=595［M+H］+。以上数据与文献 ［10］报道基本一致，且与银锻苷对照品对照TLC，Rf值一致，故确定该化合物为银锻苷（trans-tiliroside）。

化合物9：黄色结晶，易溶于水，mp 176～178℃，三氯化铁-铁氰化钾显蓝色，表明该化合物中含有酚羟基；盐酸-镁粉反应显阳性，Molish反应显阴性，提示该化合物为黄酮类化合物的苷元。ESI-MS：正离子287［M+H］+，309［M+ Na］+；负离子 285［M-H］-，分子质量是286，推测分子式为C15H10O6。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.17（1H，d，J=2 Hz），6.38（1H，d，J=2.0 Hz）。J=2.0 Hz表明A环上两个质子为间位耦合关系，分别为6位和8位质子信号，即5，7位二取代；8.08（2H，dd，J=2.0，8.0 Hz），6.90（2H，dd，J=2.0，8.0 Hz），表明B环为对位取代。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：177.4为羰基碳；5、7位的碳信号向低场移至162.5，165.6，可以确定为羟基取代；137.2，158.3为连有羟基的碳信号。光谱数据与文献［11-13］报道基本一致，确定该化合物为芦丁（kaem ferol）。

化合物10：无色针晶，mp 238～239℃，FeCl3反应和盐酸镁粉反应均呈阳性，说明该化合物为黄酮类化合物。ESI-MS：正离子609［M+ H］+，631［M+Na］+；负离子607［M-H］-，分子质量是608，推测分子式为C28H32O15。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.98（1H，s，H-8），8.44（1H，s，H-2），证明该化合物为异黄酮；7.53（2H，d，J=8.7 Hz，H-2＇，6＇），7.03（2H，d，J=8.7 Hz，H-3＇，5＇）；3.80、3.77为6位及4＇位的甲氧基氢信号。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：60.8，55.6为6位及4＇位的甲氧基碳信号。波谱数据与文献［14］报道基本一致，鉴定该化合物为葛花苷（kakkalide）。

化合物11：黄色结晶，溶于甲醇，mp 234～236℃，FeCl3反应和盐酸镁粉反应均呈阳性，说明该化合物为黄酮类化合物。ESI-MS：正离子471［M+Na］+；负离子447［M-H］-，分子质量是448，推测分子式为C21H20O11。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.43（1H，d，H-6），6.79（1H，d，H-8），6.95（2H，d，J=9.0 Hz，H-3＇，5＇），8.07（2H，d，J=9.0 Hz，H-2＇，6＇）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）显示有一组葡萄糖的信号。波谱数据与文献［15］报道基本一致，鉴定该化合物为山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（kaemepferol-7-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物12：黄色针晶，溶于甲醇，mp 360℃，Molish反应和盐酸镁粉反应均呈阳性，说明该化合物为黄酮类化合物。ESI-MS：正离子463［M+ H］+，485［M+Na］+；负离子461［M-H］-，分子质量是462，推测分子式为C21H18O12。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：1.14（3H，d，J=6.2 Hz）为鼠李糖上的甲基，δ5.48（1H，s）为鼠李糖端基质子，δ7.73（1H，s，H-5），7.51（1H，s，H-5＇）为芳环上的氢；δ4.04（3H，s）为甲氧基氢信号。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）显示有一组葡萄糖的信号，与ESI-MS中m/z147碎片离子峰对应；δ61.4为甲氧基碳信号。波谱数据与文献［16］报道基本一致，鉴定该化合物为3＇-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（3＇-O-methyl-ellagic acid-4-O-α-L-rhamnicoside）。

化合物13：黄色粉末，溶于甲醇，mp 267～277℃，Molish反应呈阴性，盐酸镁粉反应呈阳性，说明该化合物为黄酮类化合物的苷元。ESIMS：正离子317［M+H］+，339［M+Na］+；负离子315［M-H］-，分子质量是316，推测分子式为C16H12O7。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.20（1H，d，J=2.0 Hz），6.48（1H，d，J= 2.0 Hz）为槲皮素类6位和8位的特征氢信号，没有3位信号，说明该位置被取代；3.85（3H，s）为甲氧基氢信号；12.47（1H，s）、10.79（1H，s）、9.76（1H，s）、9.46（1H，s）为羟基氢信号。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：56.2为甲氧基碳信号。波谱数据与文献［17］报道基本一致，鉴定该化合物为3＇-甲氧基槲皮素（3＇-O-methylquercetin）。

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Chem ical constituents from leaves of Elaeagnus pungens Thunb.

HUANG Li-jie， LIUWei*， CUIYong-xia

（Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China）

AIMTo study the chemical constituents from the leaves of Elaeagnus pungens Thunb.METHODSThe chromatographic separation and purification of the ethyl acetate and n-butyl alcohol parts of the leaves of E.pungens Thunb were carried out on DiaionHP-20，Toyopearl HW-40，and silica gel column.The structureswere identified on the basis of spectral data and physiochemical properties，NMR，and IR spectra.RESULTSEightcompounds were obtained at the partof Ethylacetate，which were elucidated as3，3-dimethyl-5-oxo-2-hexanolallyl ester（1），β-sitosterol（2），salicylic acid（3），vanillic acid（4），gallic acid（5），kaemferol（6），quercetin（7），trans-tiliroside（8），five compoundswere obtained at the part of N-butyl alcohol，which were elucidated as rutin（9），kakkalide（10）kakkalidekaemepferol-7-O-β-D-glucopyranoside（11），3＇-O-methyl-ellagic acid-4-O-α-L-rhamnicoside（12），3＇-O-methylquercetin（13）.CONCLUSIONCompounds1、8、9、10are isolated from this plant for the first time.

Elaeagnus pungens Thunb leaves；chemical constituents；isolation and identification

R284.1

A

1001-1528（2015）04-0796-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.022

2014-06-23

河南省科技攻关重点项目 （102102310089）

黄丽杰 （1988—），女，硕士生，研究方向为现代仪器分析方法在药物质量标准研究中的应用。

*通信作者：刘 伟 （1955—），男，教授，研究方向为中药质量标准和仪器分析方法。Tel：（0371）65575838，E-mail：hnliuwei2088 @sina.com