芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠神经保护作用的实验研究

彭玮+蔡军

[摘要] 目的 研究芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠的神经保护作用。 方法 50只雄性SD大鼠随机分为假手术、模型组、芪冬颐心口服液高、中、低剂量组，于脑梗死模型建立后2h给药干预，连续给药14d，观察芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠神经功能、脑组织SOD（超氧化物歧化酶）、MDA（丙二醛）及神经凋亡相关蛋白Bcl-2表达的影响。 结果 与模型组比较，芪冬颐心口服液高、中、低剂量组能显著改善神经功能情况、提高脑组织中SOD含量，降低MDA含量，并抑制Bcl-2蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。 结论 芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠具有一定的神经保护作用。

[关键词]芪冬颐心口服液；脑梗死；Bcl-2

[中图分类号] R743.3 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）23-37-03

芪冬颐心口服液主要由黄芪、麦冬、生晒参等成分组成，活血化瘀的作用显著，适用于胸痹、心悸气阴两虚症。芪冬颐心口服液在临床上主要用于冠心病、动脉硬化等病的治疗。芪冬颐心口服液能否用于脑梗死的治疗，目前还没有相关研究。因此，本研究将采用脑梗死大鼠模型来观察芪冬颐心口服液对急性脑梗死的疗效情况。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 50只SPF级雄性SD大鼠，体重（250±20）g，购自重庆医科大学实验动物中心。

1.1.2 试剂 芪冬颐心口服液（白山药业有限责任公司，20140112）。SOD、MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所，Bcl-2 Elisa试剂盒，购自美国R&D公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组 50只大鼠按照配对设计的方法随机分为5组：假手术组（n=10）、模型组（n=10）、芪冬颐心口服液高剂量组（n=10）、芪冬颐心口服液中剂量组（n=10）、芪冬颐心口服液低剂量组（n=10）。除假手术组外，其余各组均用线栓法经左侧颈外动脉-颈内动脉插线制造急性脑梗死模型，假手术组除不插线栓以外，其余操作步骤与其他组相同。术后2h出现左侧Horner征，提尾时右前肢内收屈曲、爬行时向右侧划圈者为成功模型，脑梗死后2h，开始灌胃，假手术组和模型组灌胃生理盐水，1mL/d，高剂量组灌胃芪冬颐心口服液，2mL/d，中剂量组灌胃芪冬颐心口服液，1mL/d，低剂量组灌胃芪冬颐心口服液0.5mL/d，连续14d。

1.2.2 脑梗死模型的制作用 10%的水合氯醛按照1mL/kg的剂量麻醉大鼠，分离右侧颈总动脉，结扎颈外动脉，血管夹夹住颈总动脉近心端，再于颈总动脉上剪一小口，将尼龙线从小口插入，向颈内动脉推进1.8～2.0cm，此时大脑中动脉的血供被阻断[1]。假手术组除了不插线栓外，其余步骤操作相同。

1.2.3 神经功能障碍评分 脑梗死后2h，采用Zealonga的方法[2]，对大鼠进行神经功能评分。无神经症状，0分；不能完全伸展对侧前爪，1分；爬行时向对侧旋转，2分；行走时倾倒，3分；丧失意识，4分；死亡，5分。选择1～3分大鼠进行实验。14 d后再对大鼠进行神经功能评分。

1.2.4 SOD、MDA含量检测 在给药第14d，最后一次给药后2h，迅速断头取脑，冰浴中去除脑膜和残血，加入4oCPBS制成10%脑匀浆液，严格按照试剂盒说明书测定SOD和MDA含量。

1.2.5 Bcl-2含量检测 严格按照Bcl-2 Elisa试剂盒对得到的脑组织匀浆中的Bcl-2含量进行检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS20.0软件进行统计分析，数据均以（）表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 神经功能评分

与假手术组比较，其余各组神经功能评分发生显著性增加。与模型组相比较，芪冬颐心口服液高、中、低剂量组神经功能明显改善，具有显著性差异（P<0.01或P<0.05）。见表1。

2.2 脑组织SOD、MDA含量结果

与假手术组比较，其余各组中SOD含量显著降低，MDA含量显著升高。与模型组相比较，芪冬颐心口服液高、中、低剂量组能显著增加SOD含量，降低MDA含量。（P<0.05或P<0.01），见表2。

2.3 脑组织Bcl-2表达的影响

与假手术组比较，其余各组脑组织中Bcl-2表达增加。与模型组相比较，芪冬颐心口服液高、中、低剂量组显著提高脑组织中Bcl-2的表达（P<0.05或P<0.01）。见表3。

3 讨论

脑梗死是严重威胁人类生命健康的三大杀手之一，我国脑梗死发病率较高[3]，大部分脑梗死患者都会留下后遗症甚至丧失劳动力和自理能力[4]。

研究已经证实在脑梗死的发生和发展过程中，自由基的水平对疾病的预后有很大的影响[5]。主要在线粒体产生的高度化学活性的自由基是人体生命活动中各种生化反应的中间代谢产物，参与细胞分裂、分化等重要生理功能。但过多的自由基导致细胞膜上的脂质过氧化，破坏蛋白质和核酸，损害细胞膜的双分子层结构，致细胞水肿和凋亡；导致DNA的碱基和脱氧核糖发生化学变化，引起碱基改变、破坏或脱落，DNA核苷酸链的单链和双链断裂等；还可引起蛋白质分子发生交联、聚合、肽链断裂。发生脑梗死时由于脑组织局部供血动脉血流的突然减少或停止，造成该血管区的脑组织缺血，缺血区内脑组织氧和葡萄糖供应发生障碍，大量自由基产生，组织清除自由基能力下降，自由基大量堆积，导致细胞及细胞器膜系统损害，诱导细胞凋亡而导致继发性脑损伤，从而使缺血伴暗带损伤，加重病情[6]。

脑梗死目前仍无特效的治疗方法，虽然静脉使用溶栓治疗有效，但基层医院开展困难。近年临床清除自由基药物依达拉奉注射液的应用已经显示具有一定的疗效[7]，提示具有清除自由基功能的药物在脑梗死患者中可能具有一定应用前景。在脑梗死的治疗中，由于中成药价格较低，历史悠久，其对脑梗死的治疗发挥了重要的作用。中成药芪冬颐心口服液具有显著的活血化瘀作用，对各种损伤后的血流不畅有着积极的效果，这种活血化瘀作用正好能应用于血栓性疾病的治疗中。但其能否治疗脑梗死，是否通过清除自由基或者抑制自由基引起的细胞凋亡起治疗作用尚不清楚。endprint

MDA是脂质过氧化的产物[8]，其含量能反应体内脂质过氧化的程度，间接反应了细胞受损的程度[9]。SOD是体内一种抗氧化酶，能歧化氧自由基，阻断羟自由基的产生，从而减轻氧化损伤[10]。Bcl-2是一种受自由基影响的细胞凋亡调控因子，其在神经元损伤后的凋亡过程中起着重要的调控作用[11]。有研究发现，在局灶性脑缺血模型中Bcl-2在缺血半暗带区存活的神经细胞中有明显表达，Bcl-2表达越高，神经细胞凋亡情况越低，因此Bcl-2具有抑制细胞凋亡、延长细胞生存期作用[12]。氧化/抗氧化失衡与脑梗死过程中细胞凋亡密切相关。SOD具有抗凋亡的作用，通过阻止Bcl-2下调来实现，同时细胞内Bcl-2表达增加，也可阻断活性氧相关的细胞凋亡[13]。因此本研究选择MDA、SOD和Bcl-2作为观察指标来研究芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠的保护作用。

从本研究结果发现，与模型组相比芪冬颐心口服液能显著提高脑梗死大鼠脑组织中SOD活力，降低MDA的含量，提示芪冬颐心口服液具有一定的抗氧化损伤作用，从而减轻细胞受损情况。在本实验中，与模型组大鼠相比，芪冬颐心口服液各剂量组能显著提高脑梗死大鼠中Bcl-2的表达，说明其具有一定的抑制神经元凋亡的作用，这对脑梗死病情的发展及预后都有重要的意义。

综上所述，芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠具有一定的保护作用，机制与提高SOD活性，抑制MDA表达，增加Bcl-2表达有关。

[参考文献]

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[12] 富苏，范吉平.通络化痰胶囊对脑缺血损伤大鼠神经细胞凋亡及缺血半暗带cytc、caspase-9和Caspase-3表达的影响[J].中华中医药杂志，2013，28（5）：1194-1198.

[13] Ma SW，Zhao M，Liu HX，et al.Pharmacokinetic effects of baicalin on cerebral ischemia-reperfusion after iv administration in rats[J].Chin Herb Med，2012，4（1）：53-57.

（收稿日期：2014-09-09）endprint

MDA是脂质过氧化的产物[8]，其含量能反应体内脂质过氧化的程度，间接反应了细胞受损的程度[9]。SOD是体内一种抗氧化酶，能歧化氧自由基，阻断羟自由基的产生，从而减轻氧化损伤[10]。Bcl-2是一种受自由基影响的细胞凋亡调控因子，其在神经元损伤后的凋亡过程中起着重要的调控作用[11]。有研究发现，在局灶性脑缺血模型中Bcl-2在缺血半暗带区存活的神经细胞中有明显表达，Bcl-2表达越高，神经细胞凋亡情况越低，因此Bcl-2具有抑制细胞凋亡、延长细胞生存期作用[12]。氧化/抗氧化失衡与脑梗死过程中细胞凋亡密切相关。SOD具有抗凋亡的作用，通过阻止Bcl-2下调来实现，同时细胞内Bcl-2表达增加，也可阻断活性氧相关的细胞凋亡[13]。因此本研究选择MDA、SOD和Bcl-2作为观察指标来研究芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠的保护作用。

从本研究结果发现，与模型组相比芪冬颐心口服液能显著提高脑梗死大鼠脑组织中SOD活力，降低MDA的含量，提示芪冬颐心口服液具有一定的抗氧化损伤作用，从而减轻细胞受损情况。在本实验中，与模型组大鼠相比，芪冬颐心口服液各剂量组能显著提高脑梗死大鼠中Bcl-2的表达，说明其具有一定的抑制神经元凋亡的作用，这对脑梗死病情的发展及预后都有重要的意义。

综上所述，芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠具有一定的保护作用，机制与提高SOD活性，抑制MDA表达，增加Bcl-2表达有关。

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[13] Ma SW，Zhao M，Liu HX，et al.Pharmacokinetic effects of baicalin on cerebral ischemia-reperfusion after iv administration in rats[J].Chin Herb Med，2012，4（1）：53-57.

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MDA是脂质过氧化的产物[8]，其含量能反应体内脂质过氧化的程度，间接反应了细胞受损的程度[9]。SOD是体内一种抗氧化酶，能歧化氧自由基，阻断羟自由基的产生，从而减轻氧化损伤[10]。Bcl-2是一种受自由基影响的细胞凋亡调控因子，其在神经元损伤后的凋亡过程中起着重要的调控作用[11]。有研究发现，在局灶性脑缺血模型中Bcl-2在缺血半暗带区存活的神经细胞中有明显表达，Bcl-2表达越高，神经细胞凋亡情况越低，因此Bcl-2具有抑制细胞凋亡、延长细胞生存期作用[12]。氧化/抗氧化失衡与脑梗死过程中细胞凋亡密切相关。SOD具有抗凋亡的作用，通过阻止Bcl-2下调来实现，同时细胞内Bcl-2表达增加，也可阻断活性氧相关的细胞凋亡[13]。因此本研究选择MDA、SOD和Bcl-2作为观察指标来研究芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠的保护作用。

从本研究结果发现，与模型组相比芪冬颐心口服液能显著提高脑梗死大鼠脑组织中SOD活力，降低MDA的含量，提示芪冬颐心口服液具有一定的抗氧化损伤作用，从而减轻细胞受损情况。在本实验中，与模型组大鼠相比，芪冬颐心口服液各剂量组能显著提高脑梗死大鼠中Bcl-2的表达，说明其具有一定的抑制神经元凋亡的作用，这对脑梗死病情的发展及预后都有重要的意义。

综上所述，芪冬颐心口服液对脑梗死大鼠具有一定的保护作用，机制与提高SOD活性，抑制MDA表达，增加Bcl-2表达有关。

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