川降养心滴丸质量标准研究

吴秀芹，贺巍，文映红

川降养心滴丸质量标准研究

吴秀芹，贺巍，文映红

(南方医科大学珠江医院药学部，广东广州510282)

目的建立中药复方制剂川降养心滴丸的质量标准。方法采用TLC法鉴别川降养心滴丸中的川芎、降香；用HPLC法对制剂中丁烯基苯酞和橙花叔醇进行定量分析。结果建立的定性鉴别分离度好、专属性强，丁烯基苯酞质量分数测定的线性范围为0.093 12～0.931 2 μg(r＝0.999 8，n＝6)，平均回收率为96.50%(RSD＝1.08%，n＝6)；橙花叔醇质量分数测定的线性范围为0.15～1.5 μg(r＝0.999 9，n＝6)，平均回收率为96.71%(RSD＝1.40%，n＝6)。结论本方法准确可靠、灵敏度高、专属性强，可有效控制川降养心滴丸的质量。

川降养心滴丸；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；丁烯基苯酞；橙花叔醇

川降养心滴丸是由川芎、降香为主药研制的中药复方制剂，来自于临床经验方，方中川芎辛温，入心包、肝经，活血行气，通心脉之瘀阻；降香辛温，入心经，走血分，行瘀定痛，二者君臣相需为用可畅通心胸气血，用于治疗冠心病和心绞痛疗效显著[1-2]。为有效控制其内在质量，参考相关文献采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的川芎和降香进行了定性鉴别[3-4]，并采用高效液相色谱(HPLC)法对其有效成分丁烯基苯酞和橙花叔醇进行了质量分数测定[5-7]，以建立准确、可靠、专属性强的质量控制方法。

1 仪器与试药

Waters2695/2487高效液相色谱仪，EmpowerⅡ化学工作站；DiamonsilTM十八烷基键合硅胶柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；DL-360A超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)；BSA124S-十万分之一电子天平(德国Sartorius集团)；LD-UPWF超纯水器(德国Mililpore公司)。川芎、降香对照药材(购自中国食品药品检定研究院，批号分别为201404、201508)，丁烯基苯酞对照品(自制，经UV、IR、MS、NMR确定结构，与文献报道一致[8]，面积归一化法测得其质量分数为98%)；橙花叔醇对照品(自制，经UV、IR、MS、NMR确定结构，与文献报道一致[9]，面积归一化法测得其质量分数为98.5%)。

薄层层析硅胶 G、GF254(青岛海洋生物制品厂)，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。川降养心滴丸(自制，50 mg/丸，批号分别为20130612、20130614、20130616)。

2 方法与结果

2.1 川芎的TLC鉴别

取川降养心滴丸适量，研碎，取粉末约1.0 g，加甲醇10 mL，超声提取10 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液；按处方除去川芎配制成阴性样品，同法制成相应质量浓度的阴性对照液；取川芎对照药材细粉2 g，加入石油醚(30～60℃)20 mL，加热回流1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液；称取丁烯基苯酞对照品适量，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

按照薄层色谱法(2005年版《中国药典》一部附录ⅥB)试验，分别吸取上述3种溶液3 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚-乙醚(体积比95∶5)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯254 nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光淬灭斑点。而阴性对照液在此相应的位置上未有斑点显示，说明阴性对照对鉴别无干扰。结果见图1。

图1 川降养心滴丸中川芎鉴别的TLC图Figure 1 TLC of szechwan lovage rhizome from Chuanjiang Yangxin pills

2.2 降香的TLC鉴别

取川降养心滴丸适量，研碎，取粉末约0.3 g，加甲醇10 mL，超声提取10 min，滤过，取滤液作为供试品溶液；按处方除去降香配制成阴性样品，同法制成相应质量浓度的阴性对照液；取降香对照药材细粉2 g，加入石油醚(30～60℃)-甲醇(体积比10∶1)的混合溶液30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为对照药材溶液；取橙花叔醇对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

按照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录ⅥB)试验，分别吸取上述3种溶液2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以苯-三氯甲烷-乙酸乙酯(体积比10∶2∶1.2)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%(质量浓度)香草醛的3%(体积分数)硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显多个相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。而阴性对照液在此相应的位置上未有斑点显示，说明阴性对照对鉴别无干扰。结果见图2。

图2 川降养心滴丸中降香鉴别的TLC图Figure 2 TLC of rosewood from Chuanjiang Yangxin pills

2.3 丁烯基苯酞的测定

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取丁烯基苯酞对照品37.93 mg，置20 mL量瓶中，加适量三氯甲烷(约0.5 mL)溶解，用甲醇定容至刻度，即得质量浓度为1.896 5mg/mL对照品储备液，摇匀备用。精密吸取上述对照品储备液0.5 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得质量浓度为47.41 μg/mL的对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研碎，取

粉末约110 mg，精密称定，置20 mL容量瓶中，加入甲醇适量，超声处理20 min(功率250 W，频率33 kHz)，放冷，用甲醇补足至刻度，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例配制缺川芎的阴性空白对照样品，按“2.3.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.3.4 色谱条件 色谱柱:Diamonsil TM十八烷基键合硅胶柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相:甲醇-水(体积比66∶34)；流速:1 mL/min；检测波长:230 nm；柱温:30℃；进样量:10 μL。分别精密吸取对照品、供试品、阴性样品溶液10 μL，注入液相色谱仪，依法测定。结果表明，阴性样品在与对照品溶液相应的保留时间处无峰出现，表明本品中其他成分对待测组分测定无干扰；理论塔板数以丁烯基苯酞计不得小于5 000，丁烯基苯酞峰与其他峰的分离度良好。见图3。

图3 川降养心滴丸中丁烯基苯酞测定的高效液相色谱图Figure 3 ChromatogramsofN-butylidenephthalide from Chuanjiang Yangxin pills

2.3.5 线性关系的考察 分别精密吸取质量浓度为46.56 μg/mL的丁烯基苯酞对照品溶液2.0、6.0、10.0、12.0、16.0、20 μL注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，相应的进样量为横坐标绘制标准曲线。得丁烯基苯酞的回归方程为Y＝2.51×107X＋5.45×104，r＝0.999 8(n＝6)，结果表明丁烯基苯酞在0.093 12～0.931 2 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.6 精密度试验 分别精密吸取丁烯基苯酞质量浓度为46.56 μg/mL的对照品溶液10 μL，按“2.3.4”项下条件连续进样测定6次。测得丁烯基苯酞峰面积RSD值为0.86%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

2.3.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号: 20130612)，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样，按“2.3.4”项下色谱条件测定，计算丁烯基苯酞的质量分数。结果丁烯基苯酞质量分数的RSD值为1.57% (n＝7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.3.8 重复性试验 取同一批(批号:20130612)川降养心滴丸，按“2.3.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，按“2.3.4”项下色谱条件测定，结果丁烯基苯酞质量分数的RSD值为1.28%(n＝6)，表明本法重复性良好。2.3.9 加样回收率试验 分别精密称取已知质量分数(丁烯基苯酞质量分数为0.459 mg/丸)的同一批(批号:20130612)川降养心滴丸 6份，每份约55 mg，精密称定，分别加入质量浓度0.522 5 mg/mL的丁烯基苯酞对照品溶液1 mL，按照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液10 μL，按照“2.3.4”项下色谱条件测定丁烯基苯酞的质量分数，分别计算其加样回收率。结果见表1。

表1 川降养心滴丸中丁烯基苯酞加样回收率试验结果Table 1 Recovery results of N-Butylidenephthalide from Chuanjiang Yangxin pills(n＝6)

2.3.10 样品的测定 分别取3批川降养心滴丸，各约55 mg，精密称定，按照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，每批平行操作2次。分别精密吸取供试品溶液10 μL，按照“2.3.4”项下色谱条件测定丁烯基苯酞的质量分数，结果批号20130612、20130614、20130616川降养心滴丸中丁烯基苯酞的质量分数分别为0.456、0.426、0.442 mg/丸，平均质量分数为0.441 mg/丸。以平均质量分数的80%作为下限，可规定本品丁烯基苯酞质量分数不低于0.353 mg/丸。

2.4 橙花叔醇的测定

2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取橙花叔醇对照品12.52 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得质量浓度为1.252 mg/mL的对照品储备液，摇匀，备用。精密吸取上述对照储备液0.6 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得质量浓度为75.12 μg/mL的对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液的制备 取川降养心滴丸适量，研碎，取粉末约50 mg，精密称定，置20 mL容量瓶中，加入甲醇适量，超声处理20 min(功率250 W，频率33 kHz)，放冷，用甲醇补足至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例配制缺降香的阴性空白对照样品，按“2.4.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.4.4 色谱条件 色谱柱:DiamonsilTM十八烷基键合硅胶柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相:甲醇-水(体积比82∶18)；流速:1 mL/min；检测波长:210 nm；柱温:30℃；进样量:10 μL。理论塔板数以橙花叔醇计不得小于5 000，待测组分与其他峰的分离度良好。分别精密吸取对照品、供试品、阴性样品溶液10 μL，注入液相色谱仪，依法测定。结果表明，阴性样品在与对照品溶液相应的保留时间处无峰出现，表明本品中其他成分对待测组分测定无干扰；理论塔板数以橙花叔醇计不得小于5 000，待测组分与其他峰的分离度应良好。见图4。

图4 川降养心滴丸中橙花叔醇测定的高效液相色谱图Figure 4 Chromatograms of nerolidol from Chuanjiang Yangxin pills

2.4.5 线性关系的考察 分别精密吸取质量浓度为75.12 μg/mL的橙花叔醇对照品溶液2.0、6.0、10.0、12.0、16.0、20 μL注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，相应的进样量为横坐标绘制标准曲线。得橙花叔醇的回归方程为Y＝2.7× 107X-5.8×104，r＝0.999 9(n＝6)，结果表明橙花叔醇在0.15～1.5 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.6 精密度试验 分别精密吸取橙花叔醇质量浓度75.12 μg/mL的对照品溶液10 μL，按“2.4.4”项下条件连续进样测定6次。测得橙花叔醇峰面积RSD值为0.51%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

2.4.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号: 20130612)，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样，按“2.4.4”项下色谱条件测定，计算橙花叔醇的质量分数。结果丁烯基苯酞质量分数的RSD值为1.85% (n＝7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4.8 重复性试验 取同一批(批号:20130612)川降养心滴丸，按“2.4.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，按“2.4.4”项下色谱条件测定，结果橙花叔醇质量分数的RSD值为1.56%(n＝6)，表明本法重复性良好。2.4.9 加样回收率试验 分别精密称取已知质量分数(橙花叔醇质量分数为1.425 mg/丸)的同一批(批号:20130612)川降养心滴丸6份，每份约25 mg，精密称定，分别加入质量浓度0.724 mg/mL的橙花叔醇对照品溶液1 mL，按照“2.4.2”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液10 μL，按照“2.4.4”项下色谱条件测定橙花叔醇的质量分数，分别计算其加样回收率。结果见表2。

表2 川降养心滴丸中橙花叔醇的加样回收率试验结果Table 2 Recovery results of nerolidol from Chuanjiang Yangxin pills(n＝6)

2.4.10 样品的测定 分别取3批川降养心滴丸，各约25 mg，精密称定，按照“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，每批平行操作2次。分别精密吸取供试品溶液10 μL，按照“2.4.4”项下色谱条件测定橙花叔醇的质量分数，结果批号20130612、20130614、20130616川降养心滴丸中橙花叔醇的质量分数分别为0.361、0.359、0.367 mg/丸，平均质量分数为0.363 mg/丸。以平均质量分数的80%作为下限，可规定本品橙花叔醇的质量分数不低于0.290 mg/丸。

3 讨论

TLC鉴别试验中，分别建立了方中主药川芎和降香的薄层色谱鉴别方法，通过优化展开剂和显色剂等条件，样品色谱图中主要斑点与对照药材中的主要斑点吻合，且阴性无干扰，所建立方法较理想。

在质量分数测定试验中，曾选用不同比例的甲醇-H2O系统为流动相做了比较，最后选择以甲醇-H2O(体积比66∶34)和甲醇-H2O(体积比82∶18)分别作为流动相时，待测组分分离效果好、峰形较好、出峰时间适当。另外试验过程中对样品的超声处理时间也进行了考察，确定超声 20 min即可提取完全。

本试验建立了川降养心滴丸的鉴别和质量分数测定项目，方法简单、可靠准确、专属性强，为本制剂的质量控制提供了依据。下一步考虑将方法进一步简化，如采用梯度洗脱同时测定川降养心滴丸中的丁烯基苯酞和橙花叔醇等。

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(责任编辑:刘晓涵)

Study on quality standard for Chuanjiang Yangxin pills

WU Xiuqin，HE Wei，WEN Yinghong
(Department of Medicine，Zhujiang Hospital of Southern Medical University，Guangzhou 510282，China)

ObjectiveTo establish the quality standard for Chuanjiang Yangxin pill.MethodsSzechwan lovage rhizome and rosewood were identified by TLC.N-butylidenephthalide and nerolidol were determined by HPLC.ResultsThe characteristic identification by TLC was distinct and highly specific.N-butylidenephthalide showed a good linearity in the range of 0.093 12-0.931 2 μg(r＝0.999 8，n＝6)，and the average recovery was 96.50%(RSD＝1.08%，n＝6).Nerolidol had a good linearity within the range of 0.15-1.5 μg(r＝0.999 9，n＝6)，the average recovery was 96.71%(RSD＝1.40%，n＝6).ConclusionThe method was reliable，accurate and specific.It could be used for quality control of Chuanjiang Yangxin pills.

Chuanjiang Yangxin pill；quality standard；TLC；HPLC；N-butylidenephthalide；nerolidol

R284.1

:A

10.3969/j.issn.1006-8783.2015.05.012

1006-8783(2015)05-0612-05

2015-05-29

吴秀芹(1980—)，女，药师，学士，从事药物质量研究，电话:020-62782125，Email:wxq＿560＠163.com。

时间:2015-09-30 15:20

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20150930.1520.002.html