甲基强的松龙对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤高迁移率蛋白1表达的影响

陈慧伟++彭再梅

[摘要] 目的 探讨高迁移率蛋白1（HMGB1）在脂多糖诱导的急性肺损伤中的作用，以及甲基强的松龙注射剂干预后其在急性肺损伤中的表达变化。 方法 将54只清洁级成年雄性SD大鼠随机分成3组：①正常对照组（N组）：每只大鼠经尾静脉途径给予生理盐水2 mL/kg，1 h后再经尾静脉途径给予生理盐水1 mL/kg；②急性肺损伤组（ALI组）：尾静脉注射脂多糖6 mg/kg，1 h后再经尾静脉途径给予生理盐水1 mL/kg；③甲基强的松龙干预组（MPN组）：每只大鼠经尾静脉途径给予脂多糖6 mg/kg，1 h后再经尾静脉途径给予甲基强的松龙20 mg/kg。三组分别于注射后12、24、36 h麻醉处死后采集标本，每个时相点取6只大鼠。采用免疫组织化学法和实时定量PCR（Real-Time PCR）法检测各组各时相点大鼠肺组织HMGB1表达水平，同时观察肺组织病理学改变，并测定干湿重比（W/D）。采用SPSS 20.0统计学软件分析，数据处理采用方差分析。 结果 N组中大鼠肺组织有少量HMGB1 mRNA及其蛋白表达，ALI组和MPN组大鼠肺组织中HMGB1 mRNA及其蛋白表达水平明显高于N组，差异均有统计学意义（均P < 0.05），24 h表达达峰值；同一时相点ALI组大鼠肺组织HMGB1 mRNA及其蛋白表达水平高于MPN组，差异有统计学意义（P < 0.05）。ALI组大鼠与MPN组不同时相点W/D增高，与N组比较差异有高度统计学意义（P < 0.01），MPN组与ALI组比较W/D下降（P < 0.05或P < 0.01）。与N组比较，ALI组和MPN组组织病理学有不同程度的病理损害，MPN组比ALI组坏死程度轻，炎症细胞浸润少。 结论 HMGB1在炎症后期持续性高水平表达，在ALI发生、发展过程中，尤其是ALI后期失控性炎性反应过程中可能发挥重要作用。甲基强的松龙注射剂通过影响HMGB1 mRNA及其蛋白表达，对脂多糖所致的急性肺损伤有一定的保护作用。

[关键词] 脂多糖；急性肺损伤；高迁移率蛋白1；甲基强的松

[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）11（c）-0029-04

Effect of Methyl Prednisolone on high mobility protein 1 expression in LPS-induced acute lung injury

CHEN Huiwei1 PENG Zaimei2

1.Department of Emergency， the Central Hospital of Zhuzhou City， Hu′nan Province， Zhuzhou 412000， China； 2.Department of Emergency， the Second Xiangya Hospital Alliliated of Central South University， Hu′nan Province， Changsha 410000， China

[Abstract] Objective To explore the function of high mobility group box1 （HMGB1） in rats′lung tissue with acute lung injury induced by lipopolysaccharide and the intervention effect of Methyly Prednisolone Injection. Methods Fifty-four male SD rats were randomly divided into three groups： control group （n=18， injected 1 mL/kg saline through tail vein after the 2 mL/kg saline was injected）， ALI group （n=18， injected 1 mL/kg saline through tail vein after the 6 mg/kg lipopolysaccharide was injected）， MPN group （n=18， injected 20 mg/kg Methyl Prednisolone through tail vein after the 6 mg/kg lipopolsaccharide was injected）. Six rats of each group were killed at the twelve hour， twenty-four hour and thirty-six hour after the lipopolsaccharide was injected. Rats′blood from carotid artery was collected for vigor analysis. The HMGB1 mRNA and its protein expression of the rats′lung was measured by immunohistochemistry and RT-PCR in different periods of each group. At the same time the pathological changes of the lung tissues， and the proportion of wet and dry （W/D） were observed. Results Little HMGB1 mRNA and its protein was expressed in the lung tissue of control group， but was increased quickly in ALI group and MPN group with peak levels being present at 24 h， which significantly higher than that in control group （P < 0.05）. HMGB1 mRNA and its protein in MPN group was less expressed than that in ALI group （P < 0.05）. The proportion of wet and dry in ALI group and MPN group increased significantly， which was higher than that in control group （P < 0.01）， but the proportion of wet and dry in MPN group was lower than that in ALI group in different times （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with control group， it was observed different degrees of damage of lung′s pathological structure in ALI group and MPN group. There was more inflammatory cell and cell necrosis in ALI group. Conclusion It shows HMGB1 mRNA and its protein has a persistent high levels of expression on the stage of inflammation. This uncontrolled inflammation reaction contributes to the development of acute lung injury. Methyl Prednisolone， which through the effect of the expression of HMGB1 mRNA and its protein， has a protective effect to acute lung injury induced by lipopolysaccharide.

[Key words] Lipopolsaccharide； Acute lung injury； High mobility group box1； Methyl Prednisolo

急性肺损伤（ALI）是由抗炎因子与促炎因子失衡引发多脏器功能紊乱在肺部的表现。高迁移率族蛋白（high mobility group box，HMGB）作为参与级联反应的晚期炎症介质成为了研究的热点和潜在的有效干预靶点。大中剂量糖皮质激素既不能预防ALI/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的发生，对早期ALI/ARDS也没有治疗作用，且副作用大，相关并发症多[1-3]；但小剂量激素治疗是否能改善其预后还不确定。甲基强的松龙有抗炎及免疫抑制的药理作用，设想在晚期炎性反应中它可能通过作用于某些细胞因子而发挥干预作用。因此本研究通过尾静脉注射脂多糖，建立ALI大鼠模型，通过观察大鼠肺组织病理学改变、肺组织中HMGB-1 mRNA及其蛋白的动态表达，同时观察在甲基强的松龙注射液的干预下肺组织病理学、HMGB-1 mRNA及其蛋白的时段变化特点，并对其作用机制和干预途径进行初步探讨。

1 材料与方法

1.1 实验材料

脂多糖（O55：B5美国Sigma公司L-2880），注射用甲泼尼龙琥珀酸钠（甲强龙，美国辉瑞公司H200 80284），HMGB-1免疫试剂盒（Santa Cruz生物公司），Trizol试剂（美国Invitrogen公司），逆转录试剂盒（日本TaKaRa公司）。凝胶成像及图像分析系统（美国Bio-Rad公司），ABI StepOne实时荧光PCR仪。

1.2 实验动物分组

清洁级10周龄成年雄性SD大鼠54只，体重200～250 g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。实验期间大鼠均可以自由饮水、摄食，明暗周期为12 h/12 h（8∶00-20∶00），室温控制在21～23℃，湿度保持在50%～55%。随机将其分成3组，每组分12、24、36 h 3个时相点，每个时相点各取6只动物。

1.3 模型建立

正常对照组（N组）：每只大鼠经尾静脉途径给予生理盐水2 mL/kg，1 h后再经尾静脉途径给予生理盐水1 mL/kg；急性肺损伤组（ALI组）：尾静脉注射脂多糖6 mg/kg，1 h后再经尾静脉途径给予生理盐水1 mL/kg；甲基强的松龙干预组（MPN组）：每只大鼠经尾静脉途径给予脂多糖6 mg/kg，1 h后再经尾静脉途径给予甲基强的松龙20 mg/kg。三组分别于注射后12、24、36 h予10%水合氯醛腹腔注射麻醉后处死动物，采集标本检测相应指标，每个时相点6只大鼠。

1.4 组织标本处理

取右下肺肺组织于中性福尔马林浸泡固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚度为4 μm，置多聚赖氨酸预处理的载玻片上，60℃烤片3 h，室温冷却30 min后置4℃冰箱备用行免疫组化和苏木精-伊红（HE）染色，观察组织病理学改变。取右上肺滤纸吸干称湿重后置于60℃烤箱中72 h，称干重计算干湿重比（W/D）。余肺组织用冷生理盐水冲洗后迅速放于液氮中保存，用于实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）实验。

1.5 肺组织病理学观察

取肺组织切片，行HE染色，观察各组各时相点肺组织病理学改变。

1.6 肺组织HMGB-1蛋白表达检测

棕黄色颗粒出现在气道上皮细胞为HMGB-1蛋白染色阳性。每张组织切片随机选取5个高倍镜视野，选择400倍光镜。参考Ota等[4]免疫组化评分标准：由两个观察者对切片进行盲式阅片，显微镜下随机选择5个视野，观察所选择的高倍镜视野中所有细胞，记录阳性染色细胞百分比（%）并计分，将阳性百分数记分和细胞染色记分相加为免疫组化积分。

2.2 各组大鼠肺组织HE染色

N组大鼠肺组织肺泡结构清晰，肺泡腔干净，肺泡间无中性粒细胞浸润，偶见少许红细胞。ALI组肺泡壁增宽，肺泡及肺血管显著充血水肿，肺间质大量炎症细胞浸润，肺泡腔见红细胞渗出。肺组织的病理改变随着时间的延长逐渐加重，24 h最明显，36 h有所减轻。与ALI组比较，同一时相点MPN组肺组织改变有不同程度的减轻。见封三（图1）。

2.3 大鼠肺组织HMGB1蛋白表达

N组大鼠肺组织HMGB1蛋白表达极低。ALI组大鼠12 h HMGB1表达升高，24 h达到高峰，36 h下降，但仍高于正常。MPN组大鼠HMGB1蛋白表达较N组升高，与同时相点ALI组相比，HMGB1蛋白表达减少。见封三（图2）、表2。

2.4 大鼠肺组织HMGB1 mRNA的表达

3 讨论

ALI的本质可能是促炎因子与抗炎因子的失衡，以致多种炎症介质瀑布样放大级联效应，炎症因子的过度释放，导致肺微血管通透性增高、肺间质和肺泡渗出、肺水肿和透明膜形成，并伴有肺间质纤维化，最终造成急性呼吸衰竭[5-6]。ALI确切的发病机制仍不清楚，但目前研究炎症介质的过度释放是重要发病机制之一，常见于内毒素及其诱导的急性炎性反应。

Wang等[7]首次提出了HMGB-1是内毒素致死效应的晚期炎症介质的概念。Wang等[7]用脂多糖与小鼠RAW 264.7细胞一起培养6 h后，上清液中HMGB1含量明显升高，16 h出现峰值并在24 h仍有高水平表达。Andersson等[8]发现经气管内给予HMGB1可导致肺部急性炎症损伤，出现肺水肿，并可见中性粒细胞积聚。同时检测到呈剂量依赖效应的巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-1β等炎症因子生成量增加。如果用抗HMGB1抗体作用于脂多糖诱导的ALI，则能发现中性粒细胞聚集减少，炎症减轻，肺水肿改善。同时研究发现TNF-α、IL-1等多种促炎因子也能促使细胞分泌HMGB1，反过来HMGB-1也可以分泌一些促炎因子，如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等，主要是通过内分泌或旁分泌形式刺激单核巨噬细胞分泌形成。因而认为HMGB-1与促炎因子之间的相互作用、相互影响可以促进炎性反应，在延长和维持炎性反应中起着重要的作用[8]。

甲基强的松龙属于合成的中效脂溶性糖皮质激素，具有较强的抗炎作用、免疫抑制及抗过敏作用，与其他激素相比，同等剂量时甲基泼尼松龙在肺组织和肺泡上皮衬液中的浓度较高，且滞留时间也较长[9]。游离型甲基泼尼松龙分子易于透过细胞膜到达胞浆，在胞浆内与特异的糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）相结合，形成具有配体活性的GC-GR复合物，移行至细胞核后与DNA上GC反应元件相结合或与转录因子发生作用，影响与GC有关的各种特定蛋白的mRNA转录和蛋白质的合成，从而直接或间接作用于炎性反应有关的多种炎症细胞及细胞因子，抑制iNOS，拮抗白三烯，减少氧自由基的产生，增加表面活性物质的产生等作用，保护肺组织[10-11]。同时糖皮质激素也能通过抑制核细胞因子（NF）-κB 的活性，减弱炎症介质的转录表达，从而减轻炎性反应。

本研究数据结果表明HMGB1在内毒素所致大鼠ALI早中期即开始升高，24 h出现峰值并维持较长时间的高于正常水平表达，表明HMGB1参与了ALI的发生与发展过程，与炎症因子的级联效应可能相关；HMGB1是一种新的晚期炎症介质，与TNF-α、IL-1等速发型炎症介质相比意义有本质区别，HMGB1在诱导全身性性反应、宿主免疫功能紊乱及脓毒并发症病理过程中扮演着重要角色。如果将HMGB1的表达和释放过程作为切入点，干预与调控机体过度炎症及有害免疫反应的进程，可控制炎性反应的级联效应，减轻ALI的炎性反应，改善预后。

大量研究已经证实糖皮质激素通过糖皮质类固醇激素受体对多种信号通路的多种效应发挥作用，早期小剂量应用甲泼尼龙可缩短患者的缺氧和休克持续时间，并缩短机械通气时间[12-13]。同时短期应用小剂量甲泼尼龙可减少糖皮质激素引起的副作用，如避免诱发或加重感染，防止消化道出血等并发症。同时研究认为糖皮质激素能抑制ALI/ARDS晚期持续存在的炎性反应，并能防止过度的胶原沉积。本实验数据提示小剂量甲强龙可以抗炎或抑制炎症因子的释放，从而减轻炎性反应。由此说明甲基强的松龙注射液在ALI中抗炎及抑制炎性反应的作用可能是通过抑制HMGB1等炎症因子的释放和炎性反应的扩大而发挥作用，对内毒素所致的ALI具有一定的干预作用。但是HMGB1防治ALI的确切机制与应用效果尚待深入探讨与研究。

[参考文献]

[1] Luce JM，Montgomery AB，Marks JD，et al. Ineffectiveness of high-dose methylprednisolone in preventing parenchymal lung injury and improving mortality in patients with septic shock [J]. Am Rev Respir Dis，1988，138：62-68.

[2] Bone RC，Fisher CJ，Clemmer TP，et al. Early methylprednisolone treatment for septic syndrome and the adult respiratory distress syndrome [J]. Chest，1987，92：1032-1036.

[3] Bernard GR，Luce JM，Sprung CL，et al. High-dose corticosteroids in patients with the adult respiratory distress syndrome [J]. N Engl J Med，1987，317：1565-1570.

[4] Ota H，Igarashi S，Sassaki M，et al. Distribution of cyclooxygenase-2 in eutopic and endometrin in wndonetriosis and andomyosis [J]. Hum Reprod，2001，16（3）：561-566.

[5] DowneyGP，DougQ，Kruger J，et al. Regulationofneutrophil activation inacute lung injury [J]. Chest，1999，116（Suppl1）：46-54.

[6] Hughes M，Mackirdy FN，Ross J，et al. Acute respiratory distress syndrome： an audit of incidence and outcome in Scottish intensive care units [J]. Anaesthesia，2003，58：838-845.

[7] Wang H，Bloom O，Zhang M，et al. HMGB-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice [J]. Science，1999，285：248-251.

[8] Andersson U，Erlandsson-Harris H，Yang H，et al. HMGB-1 as a DNA-binding Cytokine [J]. J Leukoc Biol，2002，72（6）：1084.

[9] 程青，曾梅，唐忠杰，等.丹参与甲基泼尼松龙联合治疗急性肺损伤的实验研究[J].华南国防医学杂志，2009，23（4）：31-33.

[10] 宋志芳，郭小红.糖皮质激素在急性呼吸窘迫综合症中的救治价值探讨[J].中国危重病急救医学，2003，15（6）：349

[11] Nishio E，Fukushima K，Shiozaki M，et al. Nitric oxide donor SNAP induces apoptosis in smooth muscle cells through cGMP independent mechanism [J]. Biochem Biophys Res Commun，1996，221（1）：163-168

[12] Thompson BT. Glucocorticoids and acute lung injury [J]. Crit Care Med，2003，31：S253.

[13] Meduri GU，Tolley EA，Chrousos GP，et al. Prolonged methyl prednisolone treatment suppresses systemic inflammation in patients with unresolving acute respiratory distress syndrome： evidence for inadequate endogenous glucocorticoid secretion and in flammation-induced immune cell resistance to glucocorticoids [J]. Am J Respir Crit Care Med，2002，165：983.

（收稿日期：2014-08-25 本文编辑：卫 轲）

甲基强的松龙属于合成的中效脂溶性糖皮质激素，具有较强的抗炎作用、免疫抑制及抗过敏作用，与其他激素相比，同等剂量时甲基泼尼松龙在肺组织和肺泡上皮衬液中的浓度较高，且滞留时间也较长[9]。游离型甲基泼尼松龙分子易于透过细胞膜到达胞浆，在胞浆内与特异的糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）相结合，形成具有配体活性的GC-GR复合物，移行至细胞核后与DNA上GC反应元件相结合或与转录因子发生作用，影响与GC有关的各种特定蛋白的mRNA转录和蛋白质的合成，从而直接或间接作用于炎性反应有关的多种炎症细胞及细胞因子，抑制iNOS，拮抗白三烯，减少氧自由基的产生，增加表面活性物质的产生等作用，保护肺组织[10-11]。同时糖皮质激素也能通过抑制核细胞因子（NF）-κB 的活性，减弱炎症介质的转录表达，从而减轻炎性反应。

本研究数据结果表明HMGB1在内毒素所致大鼠ALI早中期即开始升高，24 h出现峰值并维持较长时间的高于正常水平表达，表明HMGB1参与了ALI的发生与发展过程，与炎症因子的级联效应可能相关；HMGB1是一种新的晚期炎症介质，与TNF-α、IL-1等速发型炎症介质相比意义有本质区别，HMGB1在诱导全身性性反应、宿主免疫功能紊乱及脓毒并发症病理过程中扮演着重要角色。如果将HMGB1的表达和释放过程作为切入点，干预与调控机体过度炎症及有害免疫反应的进程，可控制炎性反应的级联效应，减轻ALI的炎性反应，改善预后。

大量研究已经证实糖皮质激素通过糖皮质类固醇激素受体对多种信号通路的多种效应发挥作用，早期小剂量应用甲泼尼龙可缩短患者的缺氧和休克持续时间，并缩短机械通气时间[12-13]。同时短期应用小剂量甲泼尼龙可减少糖皮质激素引起的副作用，如避免诱发或加重感染，防止消化道出血等并发症。同时研究认为糖皮质激素能抑制ALI/ARDS晚期持续存在的炎性反应，并能防止过度的胶原沉积。本实验数据提示小剂量甲强龙可以抗炎或抑制炎症因子的释放，从而减轻炎性反应。由此说明甲基强的松龙注射液在ALI中抗炎及抑制炎性反应的作用可能是通过抑制HMGB1等炎症因子的释放和炎性反应的扩大而发挥作用，对内毒素所致的ALI具有一定的干预作用。但是HMGB1防治ALI的确切机制与应用效果尚待深入探讨与研究。

[参考文献]

[1] Luce JM，Montgomery AB，Marks JD，et al. Ineffectiveness of high-dose methylprednisolone in preventing parenchymal lung injury and improving mortality in patients with septic shock [J]. Am Rev Respir Dis，1988，138：62-68.

[2] Bone RC，Fisher CJ，Clemmer TP，et al. Early methylprednisolone treatment for septic syndrome and the adult respiratory distress syndrome [J]. Chest，1987，92：1032-1036.

[3] Bernard GR，Luce JM，Sprung CL，et al. High-dose corticosteroids in patients with the adult respiratory distress syndrome [J]. N Engl J Med，1987，317：1565-1570.

[4] Ota H，Igarashi S，Sassaki M，et al. Distribution of cyclooxygenase-2 in eutopic and endometrin in wndonetriosis and andomyosis [J]. Hum Reprod，2001，16（3）：561-566.

[5] DowneyGP，DougQ，Kruger J，et al. Regulationofneutrophil activation inacute lung injury [J]. Chest，1999，116（Suppl1）：46-54.

[6] Hughes M，Mackirdy FN，Ross J，et al. Acute respiratory distress syndrome： an audit of incidence and outcome in Scottish intensive care units [J]. Anaesthesia，2003，58：838-845.

[7] Wang H，Bloom O，Zhang M，et al. HMGB-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice [J]. Science，1999，285：248-251.

[8] Andersson U，Erlandsson-Harris H，Yang H，et al. HMGB-1 as a DNA-binding Cytokine [J]. J Leukoc Biol，2002，72（6）：1084.

[9] 程青，曾梅，唐忠杰，等.丹参与甲基泼尼松龙联合治疗急性肺损伤的实验研究[J].华南国防医学杂志，2009，23（4）：31-33.

[10] 宋志芳，郭小红.糖皮质激素在急性呼吸窘迫综合症中的救治价值探讨[J].中国危重病急救医学，2003，15（6）：349

[11] Nishio E，Fukushima K，Shiozaki M，et al. Nitric oxide donor SNAP induces apoptosis in smooth muscle cells through cGMP independent mechanism [J]. Biochem Biophys Res Commun，1996，221（1）：163-168

[12] Thompson BT. Glucocorticoids and acute lung injury [J]. Crit Care Med，2003，31：S253.

[13] Meduri GU，Tolley EA，Chrousos GP，et al. Prolonged methyl prednisolone treatment suppresses systemic inflammation in patients with unresolving acute respiratory distress syndrome： evidence for inadequate endogenous glucocorticoid secretion and in flammation-induced immune cell resistance to glucocorticoids [J]. Am J Respir Crit Care Med，2002，165：983.

（收稿日期：2014-08-25 本文编辑：卫 轲）

甲基强的松龙属于合成的中效脂溶性糖皮质激素，具有较强的抗炎作用、免疫抑制及抗过敏作用，与其他激素相比，同等剂量时甲基泼尼松龙在肺组织和肺泡上皮衬液中的浓度较高，且滞留时间也较长[9]。游离型甲基泼尼松龙分子易于透过细胞膜到达胞浆，在胞浆内与特异的糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）相结合，形成具有配体活性的GC-GR复合物，移行至细胞核后与DNA上GC反应元件相结合或与转录因子发生作用，影响与GC有关的各种特定蛋白的mRNA转录和蛋白质的合成，从而直接或间接作用于炎性反应有关的多种炎症细胞及细胞因子，抑制iNOS，拮抗白三烯，减少氧自由基的产生，增加表面活性物质的产生等作用，保护肺组织[10-11]。同时糖皮质激素也能通过抑制核细胞因子（NF）-κB 的活性，减弱炎症介质的转录表达，从而减轻炎性反应。

本研究数据结果表明HMGB1在内毒素所致大鼠ALI早中期即开始升高，24 h出现峰值并维持较长时间的高于正常水平表达，表明HMGB1参与了ALI的发生与发展过程，与炎症因子的级联效应可能相关；HMGB1是一种新的晚期炎症介质，与TNF-α、IL-1等速发型炎症介质相比意义有本质区别，HMGB1在诱导全身性性反应、宿主免疫功能紊乱及脓毒并发症病理过程中扮演着重要角色。如果将HMGB1的表达和释放过程作为切入点，干预与调控机体过度炎症及有害免疫反应的进程，可控制炎性反应的级联效应，减轻ALI的炎性反应，改善预后。

大量研究已经证实糖皮质激素通过糖皮质类固醇激素受体对多种信号通路的多种效应发挥作用，早期小剂量应用甲泼尼龙可缩短患者的缺氧和休克持续时间，并缩短机械通气时间[12-13]。同时短期应用小剂量甲泼尼龙可减少糖皮质激素引起的副作用，如避免诱发或加重感染，防止消化道出血等并发症。同时研究认为糖皮质激素能抑制ALI/ARDS晚期持续存在的炎性反应，并能防止过度的胶原沉积。本实验数据提示小剂量甲强龙可以抗炎或抑制炎症因子的释放，从而减轻炎性反应。由此说明甲基强的松龙注射液在ALI中抗炎及抑制炎性反应的作用可能是通过抑制HMGB1等炎症因子的释放和炎性反应的扩大而发挥作用，对内毒素所致的ALI具有一定的干预作用。但是HMGB1防治ALI的确切机制与应用效果尚待深入探讨与研究。

[参考文献]

[1] Luce JM，Montgomery AB，Marks JD，et al. Ineffectiveness of high-dose methylprednisolone in preventing parenchymal lung injury and improving mortality in patients with septic shock [J]. Am Rev Respir Dis，1988，138：62-68.

[2] Bone RC，Fisher CJ，Clemmer TP，et al. Early methylprednisolone treatment for septic syndrome and the adult respiratory distress syndrome [J]. Chest，1987，92：1032-1036.

[3] Bernard GR，Luce JM，Sprung CL，et al. High-dose corticosteroids in patients with the adult respiratory distress syndrome [J]. N Engl J Med，1987，317：1565-1570.

[4] Ota H，Igarashi S，Sassaki M，et al. Distribution of cyclooxygenase-2 in eutopic and endometrin in wndonetriosis and andomyosis [J]. Hum Reprod，2001，16（3）：561-566.

[5] DowneyGP，DougQ，Kruger J，et al. Regulationofneutrophil activation inacute lung injury [J]. Chest，1999，116（Suppl1）：46-54.

[6] Hughes M，Mackirdy FN，Ross J，et al. Acute respiratory distress syndrome： an audit of incidence and outcome in Scottish intensive care units [J]. Anaesthesia，2003，58：838-845.

[7] Wang H，Bloom O，Zhang M，et al. HMGB-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice [J]. Science，1999，285：248-251.

[8] Andersson U，Erlandsson-Harris H，Yang H，et al. HMGB-1 as a DNA-binding Cytokine [J]. J Leukoc Biol，2002，72（6）：1084.

[9] 程青，曾梅，唐忠杰，等.丹参与甲基泼尼松龙联合治疗急性肺损伤的实验研究[J].华南国防医学杂志，2009，23（4）：31-33.

[10] 宋志芳，郭小红.糖皮质激素在急性呼吸窘迫综合症中的救治价值探讨[J].中国危重病急救医学，2003，15（6）：349

[11] Nishio E，Fukushima K，Shiozaki M，et al. Nitric oxide donor SNAP induces apoptosis in smooth muscle cells through cGMP independent mechanism [J]. Biochem Biophys Res Commun，1996，221（1）：163-168

[12] Thompson BT. Glucocorticoids and acute lung injury [J]. Crit Care Med，2003，31：S253.

[13] Meduri GU，Tolley EA，Chrousos GP，et al. Prolonged methyl prednisolone treatment suppresses systemic inflammation in patients with unresolving acute respiratory distress syndrome： evidence for inadequate endogenous glucocorticoid secretion and in flammation-induced immune cell resistance to glucocorticoids [J]. Am J Respir Crit Care Med，2002，165：983.

（收稿日期：2014-08-25 本文编辑：卫 轲）