莲子心总黄酮不同提取方法的比较与分析

吴梅青

（湘潭职业技术学院，湖南湘潭 411102）

莲子心属于睡莲科水生草本植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn）成熟种子中的胚根及幼叶，具有清心安神、交通心肾、涩精止血的功效。用于热入心包，神昏谵语，心肾不交，失眠遗精，血热吐血，收载于2010年版《中国药典》[1]。莲子心中含有木犀草素、金丝桃苷、芸香苷等黄酮类化合物，具有独特的营养和保健功效，且无毒副作用。相关提取方面的研究多针对莲子心生物碱，而对总黄酮的研究报道较少。为了进一步研究和开发，本研究参考相关文献资料，采用碱溶酸沉法、水提法、常规乙醇提取法、超声波辅助乙醇提取法、微波辅助乙醇提取法等5种提取方法，用紫外分光光度法测定总黄酮类物质含量，用莲子心总黄酮提取率和干浸膏得率为指标，对莲子心做了5种提取方法的平行对照实验，并对提取结果进行比较研究与分析。

1 材料、试剂与仪器

1.1 材料与试剂

莲子心，产于湖南湘潭。实验前将莲子心放在50℃干燥4 h后再放入多功能粉碎机中粉碎，过四号筛后密封保存备用。

芦丁对照品（购自中国药品生物制品检定所）；95%乙醇、石油醚、NaNO2、Al（NO3）3、NaOH等试剂均为分析纯。

1.2 仪器

PH-O50A干燥箱：上海一恒科学仪器有限公司；UV10000紫外可见分光光度计：上海天美科学仪器有限公司；G80F23DCSL-F7（R0）型微波炉：格兰仕微波炉电器有限公司；KQ3200DB数控超声波清洗仪：昆山超声仪器有限公司；PL-L型电子分析天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

2 实验方法与结果

2.1 样品溶液的制备

2.1.1 碱溶酸沉法液[2]

准确称取5.00 g洗净干燥研碎的莲子心，置于干净的烧杯中，加已煮沸的0.4%硼砂水溶液120 mL加热至沸腾，并在搅拌条件下加石灰乳调pH在8～9，并保持该pH煮沸20 min，趁热用4层纱布过滤；药渣同法再操作2次，合并3次滤液，并用浓HC1调pH约为3～4，搅拌，放置过夜使沉淀完全，减压抽滤，沉淀用蒸馏水洗涤3次，抽干，将沉淀物转移到表面皿中，于45℃恒温真空干燥6 h，再加蒸馏水定容至100 mL。平行试验3次，测定吸光度，计算莲子心总黄酮的提取率。

2.1.2 水提法液[3]

准确称取5.00 g洗净干燥研碎的莲子心，按料液比3∶100，分别在90℃的水浴中浸提30 min，取滤液，滤渣按相同方法进行第2次，合并2次滤液，然后再过滤、离心，得浸提液，再浓缩定容至100 mL。平行试验3次，测定吸光度，计算莲子心总黄酮的提取率。

2.1.3 常规醇提法液[4]

准确称取5.00 g洗净干燥研碎的莲子心，采用20倍量75%一定浓度乙醇回流提取2次，第一次1.5 h，第二次1 h。过滤后合并2次滤液，回收乙醇，定容至100 mL，平行试验3次。测定吸光度，计算莲子心总黄酮的提取率。

2.1.4 超声波辅助醇提法液

准确称取5.00 g洗净干燥研碎的莲子心，用75%乙醇按料液比1∶25（g∶mL）在超声功率250 W及超声温度50℃的水浴中提取30 min，收集滤液，以石油醚脱脂除色，浓缩后得提取液[5]，用乙醇定容至100 mL，平行试验3次。测定吸光度，计算莲子心总黄酮的提取率。

2.1.5 微波辅助醇提法液

准确称取5.00 g洗净干燥研碎的莲子心于烧杯中，加入125 mL的75%乙醇溶液，采用微波辅助提取，微波辐射功率400 W、微波辐射时间30 s×3，趁热过滤，滤液，回收乙醇[6]，定容至100 mL容量瓶中待测。平行试验3次。测定吸光度，计算莲子心总黄酮的提取率。

2.2 总黄酮含量的比较

2.2.1 标准曲线的绘制

精密称取芦丁标准品100 mg，用无水乙醇溶解并定容至50 mL容量瓶中，精密吸取5 mL，置50 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得含芦丁0.2 mg/mL标准溶液。精确移取芦丁标准溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL容量瓶中，采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH显色体系显色，定容并摇匀，于200 nm～900 nm波长范围扫描，最大吸收波长为500 nm。以试剂空白做参比，于500 nm处测定吸光度，重复3次，取平均值。以吸光度A为纵坐标，以芦丁标准溶液质量浓度C（mg/mL）为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：A=13. 57471C-0. 01473，线性关系良好（R=0. 9995）。

2.2.2 样品中总黄酮含量的测定

分别精密吸取上述样品溶液（各提取3次）各1mL，置于具塞试管中，加入无水乙醇9 mL稀释混匀后，以无水乙醇为空白对照，于500 nm波长处测定吸收度，每一样品平行测定3次，取平均值。并按“2.1.1”项下回归方程计算含量，结果详见表1。

表1 5种提取方法所得总黄酮提取率比较Table 1 Comparison in the total yield of flavonoids extracted by 5 methods

2.2.3 干浸膏得率的测定

按《中国药典》2010年版I部附录X A的浸出物测定法项下的浸出物测定法热浸法测定。精密量取样品溶液（每方法各提取3次）各10 mL，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴蒸干溶剂后，放入烘箱中于105℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷却30 min后迅速准确称重，计算浸膏量，每一样品平行测定3次，取平均值。结果详见表2。

2.2.4 5种提取方法的综合评价

表2 5种方法干浸膏得率比较Table 2 Comparison in the yield of dry extract by 5 extraction methods

表3 莲子心总黄酮5种提取方法的综合评价比较Table 3 Comparison in comprehensive evaluation of 5 extraction methods

3 结论与讨论

莲子心中黄酮类化合物包括木犀草素、金丝桃苷、芸香苷等。研究表明，黄酮类化合物有多重生物学作用，如抗炎抑菌、抗氧化、降血糖、降血脂、抗癌、抗肿瘤及增强免疫力等作用[7]。本实验以莲子心中总黄酮提取率和干浸膏得率为指标，对莲子心黄酮的5种提取方法进行比较。从表3可以看出，Y值的大小顺序为微波辅助醇提法＞超声波辅助醇提法＞常规醇提法＞水提法＞碱溶酸沉法，结果提示莲子心黄酮的提取以微波辅助醇提法为佳。

本实验中5种提取方法均采用的是从近几年文献中提到的最优提取工艺。但是实际中药制剂的提取受到多种因素的影响，提取方法的选择不但要考虑主要有效成分的提取率，还应兼顾干浸膏物的得率。因为提取液中有效成分含量越多越好，但干浸膏越多意味着服用的量就越大，所以在5种提取方法的比较上，以总黄酮的含量和干浸膏得率为指标来进行评价，同时对这2个指标的数据进行标准化处理，以消除各指标的单位和量纲不同及各指标数值不同所造成的影响，以标准化指标加权后求和作为Y，优选出微波辅助醇提法为较佳条件，这样使结果更加合理、科学。微波辅助醇提法中总黄酮提取率明显提高，而且提取时间明显缩短，只需要几分钟，如果用于大生产，则安全可靠，无污染，并可节省投资。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：256

[2] 蔡定建,柳茶花,钟鸿鸣,等.莲子心中黄酮类物质的提取和测定[J].中国酿造,2010(1)：132-135

[3] 肖贵平.建莲莲心黄酮物质水浸提条件优化[J].亚热带农业研究,2011,7(3)：192-196

[4] 周芳.莲子心中总黄酮、多糖的分离纯化及氨基酸、农残测定研究[D].中南大学,2013：5

[5] 张俊生,陈莉华,杨顺清,等.超声波辅助乙醇提取莲子心总黄酮及其抗氧化活性的研究[J].食品工业科技,2012,33(3)：220-223

[6] 余其凤,周文富.莲子心总黄酮的微波辅助提取研究[J].化学与生物工程,2011,28(2)：43-48

[7] 王博,林圣云.含黄酮类中药的抗癌抗肿瘤作用研究概况[J].浙江中医药大学学报,2012,36(7)：838-840