505 株临床分离的铜绿假单胞菌的临床分布与耐药性分析

吴怡，王岚，刘新，张，叶梦

(1.沈阳医学院基础医学院病原生物学教研室，辽宁 沈阳 110034;2.沈阳医学院附属中心医院检验科;3.沈阳医学院基础医学院临床医学专业2012 级8 班)

铜绿假单胞菌在自然界中广泛分布，属于条件致病菌，也是医院感染的主要病原菌之一［1］。近年来，随着β-内酰胺类抗生素、免疫抑制剂及肿瘤化疗药物的广泛应用，铜绿假单胞菌引起的医院感染日益突出，多重耐药的铜绿假单胞菌(对5 种或5 种以上的抗生素耐药)逐渐给临床治疗带来了极大的困难［2］。为了指导临床及时、有效、合理地选用抗生素，本研究回顾分析沈阳医学院附属中心医院2008年9 月至2012年9 月分离的505 株铜绿假单胞菌的临床分布及其耐药性。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 收集2008年9 月至2012年9 月沈阳医学院附属中心医院送检的各类标本中分离培养获得的铜绿假单胞菌505 株。

1.2 主要试剂及仪器 培养基:血琼脂平板、麦康凯平板、M-H 平板;革兰染色液;药敏试验纸片:头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、阿米卡星、环丙沙星、美洛培南、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢曲松、氯霉素、磺胺甲唑/甲氧苄啶。Biobas 生物洁净安全柜(型号:3SC-1500ⅡA2-X，济南鑫贝西生物技术有限公司);生物梅里埃ATB 细菌鉴定仪;Olympus 光学显微镜。

1.3 方法

1.3.1 细菌分离培养 菌种的分离培养按照《全国临床检验操作规程》进行。将临床送检的合格标本分别接种于血平板和麦康凯平板，35 ℃培养18～24 h。

1.3.2 细菌鉴定 根据菌落特征结合革兰染色镜下形态初步筛选505 株铜绿假单胞菌，采用法国梅里埃ATB 细菌鉴定仪对上述菌株鉴定到种。

1.3.3 药敏试验 采用K-B 纸片扩散法［3］。M-H结果判定按临床和实验室标准协会 (CLSI/NCCLS)2008年标准进行。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853，购于卫生部临床检验中心。

2 结果

2.1 铜绿假单胞菌临床标本分布 在各类临床送检的标本中，铜绿假单胞菌分离率分别为痰标本(83.6%)、伤口分泌物 (4.5%)、尿 液(3.1%)、脓汁 (2.5%)、血液 (1.4%)、其他(4.9%)。

2.2 铜绿假单胞菌临床科室分布 分离出的505株铜绿假单胞菌分别分布于ICU 病房(30.5%)、干诊病房 (21.3%)、呼吸内科病房 (18.4%)、神经外科病房 (12.0%)、神经内科病房(9.2%)、普外科病房 (1.4%)、手外科病房(1.3%)和其他(5.9%)。

2.3 铜绿假单胞菌药敏实验结果 对分离出的505 株铜绿假单胞菌分别进行13 种抗生素的药敏检测。结果显示铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦耐药率达16.9%，而对磺胺甲唑/甲氧苄啶的耐药率达到72.1% (表1)。通过对5年来铜绿假单胞菌耐药性的回顾分析显示，铜绿假单胞菌对多种抗生素存在不用程度的耐药性，并呈逐年升高的趋势，尤其对亚胺培南和美罗培南的耐药率逐年上升，同时多药耐药占有较高的比例(表2)。

表1 505 株铜绿假单胞菌对抗生素的药敏结果

表2 2008 至2012年铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性(%)

3 讨论

铜绿假单胞菌是医院感染常见的条件致病菌，可导致机体多系统严重感染。近年来，铜绿假单胞菌的临床分离率一直居于高位，本研究显示痰标本的分离率最高(83.6%)，是临床患者肺部感染的首要致病菌，与文献［3］相似，耐药的铜绿假单胞菌感染常导致严重后果，是目前临床医生关注的焦点和热点。随着抗生素的大量、不合理使用，其耐药问题变得日益严重，与其他文献［4］报道基本一致。本研究结果显示，铜绿假单胞菌主要分布在ICU 病房、干诊病房、呼吸内科病房，可能与这些该病区的患者患有基础疾病，年龄大，营养不良，广泛大量使用抗生素、使用免疫抑制剂及机体抵抗力下降等因素有关［5］。由铜绿假单胞菌引起的院内感染，对临床医生提出了新的挑战。

铜绿假单胞菌有着复杂的耐药机制，产生抗菌活性酶如β-内酰胺酶，可使细胞外膜的通透性降低以及菌体蛋白变异，使细菌对不同抗生素形成固有的耐药;抗生素的作用靶位的改变，如青霉素结合蛋白(PBPs)结构发生改变，可使细菌对抗生素发生逃避作用;细菌也可生成生物被膜，导致抗生素治疗失败;细菌的主动泵出系统也使细菌产生固有和获得性耐药，在铜绿假单胞菌的多药耐药性中起了主要作用;抗生素的广泛使用也可刺激细菌耐药基因发生改变或产生新的耐药基因［6－7］。505 株临床分离的铜绿假单胞菌对磺胺甲唑/甲氧苄啶耐药率最高达到72.1%，对加酶抑制剂的头孢哌酮/舒巴坦耐药率最低，为16.9%;与全国耐药监测报道的结果［8－9］基本相符;本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率为20.4%和22.7%;对碳青霉烯类抗生素亚胺培南耐药率有逐年增高趋势，其耐药机制主要是细菌产生金属β-内酰胺酶以及细菌菌体上特异性外膜通道蛋白OprD2 的丢失，临床治疗中大量使用是其耐药的主要诱发因素。氨基糖苷类抗生素中，阿米卡星的耐药率为22.6%，低于庆大霉素的36.3%，可能与阿米卡星对细菌产生的钝化酶比较稳定相关。

通过对5年来铜绿假单胞菌耐药性的分析显示，铜绿假单胞菌对多种抗生素存在不用程度的耐药性，并呈逐年升高的趋势，尤其对亚胺培南和美罗培南的耐药率逐年上升，同时多药耐药占有较高的比例。对于铜绿假单胞菌的感染，应引起高度重视。有效的预防和控制铜绿假单胞菌引起的院内感染是十分重要的［10］。同时应加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测，及时了解其耐药变化趋势，从而合理地使用抗生素。

［1］寥蕴惠，宋秀宇.医院分离铜绿假单胞菌的分布情况与耐药分析［J］.检验医学与临床，2010，7 (11):1048－1049，1052.

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