高效液相色谱法测定颈舒胶囊中葛根素含量

马善治，郭剑华，刘渝松，郭 亮，林 於，刘 新，彭文忠，王 健，廖兴隆，胡 晓

（1.重庆市中医骨科医院，重庆400010；2.重庆医科大学，重庆400016）

颈舒胶囊系重庆市中医骨科医院临床使用多年的验方制剂，是由葛根、桂枝、白芍10味等药物组成，其中葛根作为方中君药，而葛根素是葛根的主要有效成分。为控制制剂质量，我们用高效液相色谱法测定葛根中的葛根素的含量［1，2］，取得满意结果。

1 仪器和试药

SY-810高效液相色谱仪（瑞利分析仪器公司），色谱柱Kromasil NH2（250mm×4.6mm，5μ），乙腈（色谱纯），重蒸水，分析纯，葛根素对照品（供含量测定用，批号110713-200609，中国生物制品检定所提供），颈舒胶囊样品（重庆市中医骨科医院提供）。

2 测试方法

色谱条件：色谱柱（Kromasil NH2（250mm×4.6mm，5μ），流动相，乙腈，水（8∶2），流速1mL/min，检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于3000。色谱条件下葛根素分离良好，阴性无干扰（图1-3）［3］。

图1 葛根素HPLC

图2 样品HPLC

图3 阴性样品HPLC

供试品溶液的制备：取颈舒胶囊内容物4g，碾细，精密称定，用甲醇100mL分二次超声提取，每次5min；放冷，离心取上清液，合并上清液，用石油醚（60～90℃）50mL萃取1次，弃石油醚液，甲醇液蒸干，残渣用甲醇分次使溶解并转移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，用甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

葛根素线性关系考察：精密称取葛根素对照品适量，用甲醇制成每1mL含5.2、26.0、52.0、78.0、104μg/mL的系列溶液，在选定的色谱条件下分别进样20μL，记录色谱图中葛根素峰面积积分值，葛根素在5.2～104.0μg/mL范围与其峰面积积分值之间线性关系良好，见表1。

表1 葛根素与其峰面积积分值的关系

仪器精密度考察：取同一葛根素对照品溶液，重复进样相等量5次，记录葛根素的峰面积积分值，见表2。

表2 仪器精密度测试结果

供试品溶液的稳定性考察：取同一刚制备的供试品溶液，分别于0、5、9、12和24小时在选定的色谱条件下进样20μL，记录葛根素的峰面积积分值，即供试品溶液在24h内保持稳定，见表3。

表3 供试品溶液稳定性测试结果

方法重現性考察：取同一批样品，依法取5份样品，精密称定，依法制备5份供试品溶液，在选定的色谱条件下分别进样10μL，记录葛根素的峰面积积分值，即方法重现性符合要求，见表4。

表4 方法重现性测试结果

加样回收率试验：从己知葛根素含量（0.045%）的样品中取6份供试品，精密称定，分别精确加入葛根素对照品的甲醇稀释液，依法制备6份供试品溶液，依法测定，记录葛根素的峰面积积分值，按下式计算回收率，其平均回收率为97.6%，见表5。

表5 加样回收率测定结果

中试样品含量测定：取本品中试样品3批，依法测定葛根素含量，见表6。

表6 中试样品含量测定结果

3 讨 论

采用照高效液相色谱测定法对颈舒胶囊有效成分之一的葛根素作定量研究，可有效测定葛根素的含量，使颈舒胶囊的配制以及制定有效成分的下限有了明确标准。

［1］黄亚非，张永明，何翱，等.采用高效液相色谱法测定心脉通口服液中葛根素的含量［J］.中国中药杂志，2001，26（11）：760-761.

［2］王建平，秦红岩，何伟，等.HPLC法测定解酒灵冲剂中葛根素的含量［J］.时珍国药研究，1997，8（4）：322.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典中药材薄层鉴别彩色图鉴［M］.北京：人民卫生出版社，2010.