胃肠道间质瘤中P21WAF1和Bax的表达及意义

黄昕　冉龙艳　吴云涛　等

【摘要】 目的 探讨胃肠道间质瘤（GIST）中P21WAF1和Bax的表达与生物学行为的关系。方法 运用免疫组化SP法检测P21WAF1和Bax在胃肠道间质瘤中的表达情况， 并分析其在良性、潜在恶性、恶性病例中的表达差异。结果 55例GIST中， P21WAF1和Bax的阳性表达率分别为54.5%和60.0%。P21WAF1和Bax的表达随着恶性程度的增加而增加， 与良性组相比差异有统计学意义（P<0.05）。P21WAF1与Bax的表达有显著相关性。结论 检测P21WAF1和Bax可作为预测胃肠道间质瘤恶性潜能的重要参考指标。

【关键词】 胃肠道间质瘤； P21WAF1；Bax；免疫组织化学

胃肠道间质瘤是一组较为复杂的胃肠道间叶性肿瘤， 其分化途径差异很大， 有显示向平滑肌分化的、向神经成分分化的、或双向分化的， 部分表达CD117抗原和具有c-kit基因突变。从临床表现及预后而言， 生物学行为难以准确预测， 有些转移灶可以在原发肿瘤切除30年之后才发现。在日常病理诊断中， 仍然依靠肿瘤大小、核分裂、细胞形态等来综合判断预测其恶性程度的大小， 因此寻找能判断GIST生物学行为的客观指标仍然是临床关注以及病理研究的热点。本研究通过检测P21WAF1和Bax在GIST中的表达， 以求探讨其与临床病理特征及生物学行为的关系。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 收集贵阳医学院附属医院1990～2006年期间术后诊断为胃肠道间叶源性肿瘤的病例， 经免疫组化标记CD117、CD34、Desmin、 SMA、S-100蛋白筛选， 从中确定GIST 55例。其中男29例， 女26例， 年龄24～77岁， 中位年龄54.8；病变部位： 食管1例， 胃23例， 小肠10例， 结肠6例， 直肠8例， 盆腔2例， 腹壁1例， 腹膜后4例。按照Emory等[1]提出的标准将GIST进行分级：良性14例， 潜在恶性14例， 恶性27例。

1. 2 方法 取上述存档的石蜡包埋组织块， 3 μm连续切片， 贴在已事先用APES胶处理好的载玻片上， 3%过氧化氢去离子水孵育5～10 min， 以消除内源性过氧化物酶活性；微波处理修复抗原（98℃， 15 min）；正常山羊血清封闭组织中非特异性抗原， 第一抗体：来自北京中杉金桥生物技术有限公司的鼠抗人P21WAF1单克隆抗体、鼠抗人Bax单克隆抗体， 用磷酸盐缓冲液作为阴性对照， 用乳腺浸润型导管癌腺上皮作为P21WAF1阳性对照；用胃腺癌上皮为Bax阳性对照， 严格参照说明书进行免疫组化染色SP法。结果判断： 阳性定位为胞核及胞质出现棕黄色颗粒， 且着染细胞数>10%判断为阳性； P21WAF1阳性定位为细胞核， Bax阳性定位为细胞质。

1. 3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件分析所得数据， 计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 P21WAF1在GIST中的表达 P21WAF1的表达在良性GIST、潜在恶性、恶性GIST的表达率分别为21.4%、64.2%和66.7%， 良性和潜在恶性之间及恶性之间 P21WAF1的阳性表达率差异有统计学意义（χ2=8.19， P<0.05）， 但潜在恶性组和恶性组之间的表达率差异无统计学意义（χ2=0.5， P>0.05）。

2. 2 Bax在 GIST 中的表达 Bax的表达在良性GIST、潜在恶性、恶性GIST的表达率分别为28.6%、71.4%和70.3%， 良性和潜在恶性及恶性之间Bax的阳性表达率差异有统计学意义（χ2=7.62， P<0.05）， 但潜在恶性组和恶性组之间的表达率差异无统计学意义（χ2=0.27， P>0.05）。

2. 3 P21WAF1与Bax表达的相关性 55例间质瘤中， P21WAF1与Bax 均阳性的26例， 均阴性的19例， 前者阳性后者阴性的3例， 前者阴性后者阳性的7例， 经χ2检验表明：P21WAF1与Bax在GIST中表达呈显著相关性（χ2=22.45， P<0.05）。

3 讨论

P21WAF1 作为肿瘤抑制基因， 与多种肿瘤的发生、发展及预后有关， 但P21WAF1的表达在不同组织差异较大。对大多数恶性组织而言， P21WAF1的表达以与正常组织相比降低或缺失为主。而本实验发现：P21WAF1在良性GIST表达较低， 而在潜在恶性和恶性GIST中表达较高， 良性和潜在恶性或恶性GIST之间P21WAF1的阳性表达率差异有统计学意义（P<0.05）， 说明随着恶性潜能的增加， 分化程度的不同， 其表达有增加的趋势。这与其他研究报告恶性 GIST表达P21WAF1结果有一致性[2]。作者推测P21WAF1表达高可能有助于遏制 GIST中肿瘤细胞的无限增生。因此， 检测GIST组织中P21WAF1表达水平有助于了解GIST的生物学行为。

Bax蛋白作为重要的促凋亡蛋白质， 其可以直接影响线粒体功能， 诱导细胞凋亡。刘艳明等[3]报道36例GIST中有20例表达Bax （55.6%）， 其表达与GIST的部位、组织学分型、肿瘤大小无关。本研究表明， Bax的表达随恶性程度的增高而增高， 从良性的28.6%到潜在恶性的71.4%， 其表达率在良性组和潜在恶性、恶性组之间差异有统计学意义（P<0.05）， 这对判断恶性潜能有重要的辅助意义， 因此检测GIST组织中Bax表达水平有助于了解GIST的生物学行为。

综上所述， 对于胃肠道间质瘤这类分化复杂、生物学行为复杂的消化道常见间叶来源肿瘤， 除了通过做免疫组化明确诊断之外， 在通过常用指标如肿瘤大小， 结合形态学观察如：细胞异型性、核分裂、是否坏死等指标外， 还可以通过检查客观指标如P21WAF1与Bax的表达， 且两者有明显的正相关， 从而更好地判断其恶性潜能的大小， 给临床医生的诊断及治疗提供更好的病理支持。

参考文献

[1] Emory TS， Sobin LH， Lukes L， et al. Prognosis of gastrointestinal smooth muscle（stromal） tumors：dependence on anatomic site. Am J Surg Pathol， 1999， 23（1）：82-87.

[2] 孙洁， 宦大为.胃肠道间质瘤中P21WAF1及Cyclin D1的表达和意义.中国组织化学与细胞化学杂志， 2009， 18（3）：60-62.

[3] 刘艳明， 蔡兰.胃肠道间质瘤中Bax和Ki67的表达及其意义.中国现代医生， 2007， 45（20）， 11-12.

[收稿日期：2014-05-19]endprint