MIP-1α和MMP-9在鼻息肉中的表达及其临床意义

姜晓丹，魏晓丽，白 洁，孙 佳，刘国福

（佳木斯大学附属第一医院耳鼻喉科，黑龙江 佳木斯154003）

鼻息肉是耳鼻喉科的一种常见疾病，其发病机理目前尚未完全阐明，大量研究发现鼻息肉的发生与遗传、变态反应、感染等多种因素有关［1］。鼻息肉的组织学表现是表面为假复层纤毛柱状上皮、上皮基底膜增厚、上皮下为疏松结缔组织水肿、其间炎症细胞浸润。巨噬细胞炎性蛋白1α（Macrophage Inflammatory Protein-1 Al-pha，MIP-1α）是趋化因子CC家族成员之一，作为一种前炎性趋化因子主要由单核细胞、中性粒细胞、巨嗜细胞产生，它在炎症因子网络中具有重要作用，能特异性趋化炎症细胞向炎症部位迁移。因此阻断它的表达可能有助于切断炎症反应中炎症因子网络，逐而减缓炎症反应。基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinases-9，MMP-9）能有效降解细胞外基质基和底膜的主要成分，进而使血浆大分子等物质进入间质，从而引起组织水肿，还可与VEGF／VPF协同促进新生血管形成，影响血管通透性等进而通过降解底物在多种炎症性和肿瘤性疾病致病过程中起到重要作用。有资料表明MMP-9与鼻息肉的发生发展有着紧密的相关。对于MIP-1α在鼻息肉组织的表达及MIP-1α与MMP-9在鼻息肉组织中表达的相关性研究国内外尚无研究。进一步探讨NP的发生、发展及NP患者临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验对象

选取我院2012～2013年期间住院治疗的鼻息肉患者40例作为实验组，符合中华医学会耳鼻咽喉学分会制定的鼻息肉诊断标准，均经病理确诊。其中男28例，女12例，年龄18～65岁，平均44.4岁，并除外哮喘、变应性鼻炎及全身性疾病史。选取同期在我院因鼻中隔偏曲而需行矫正手术者需要部分切除的下鼻甲黏膜组织20例作为对照组，其中男12例，女8例，年龄18～55岁，平均30.5岁，并排除过敏性疾病、慢性鼻炎鼻窦炎以及全身性疾病和家族疾病史。所有研究对象术前均未服用或局部应用过激素类、免疫抑制剂及抗组胺类药物。

1.2 实验方法

实验标本均在手术切除后2h内收集，经10%的中性福尔马林溶液固定，24h内低温石蜡包埋，并于-20℃冰箱放置2h时后，上切片机切片，厚度为5μm左右，分别进行MIP-1α和MMP-9染色。脱蜡水化的切片置于枸橼酸缓冲液中，高火微波修复。免疫组化染色步骤按试剂盒上的说明进行。以提供的阳性切片作为阳性对照，以PBS代替-抗作为空白阴性对照，以排除非特异性染色。

1.3 结果判定

阳性染色主要呈棕黄色颗粒状；每张病理切片至少在高倍显微镜（200×）下观察10个不重复的视野，以判断细胞染色强度和细胞染色百分率为记分方式，对免疫组化结果进行半定量分析，判断结果如下：

（1）染色强度：0分：无着色；1分：淡黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。

（2）细胞染色百分率：0分：＜5%阳性细胞；1分：6%～25%阳性细胞；2分：26%～50%阳性细胞；3分：＞51%阳性细胞。

判断标准为两项计分相加：0分为阴性（-）；1～2分弱阳性（+）；3～4分为阳性（++）；5～6分强阳性（+++）。其中“-”示为阴性表达，“+”示为阳性表达。

1.4 统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件进行χ2检验，相关性检验采用Spearman等级相关分析，P＜0.05，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 光镜下观察

在鼻息肉组织中，MlP-la阳性表达主要位于鼻息肉上皮细胞的胞浆，呈淡黄色、棕黄色或黄褐色（图1）。MMP-9主要在上皮细胞和炎症细胞以及腺上皮细胞中表达（图2），定位于胞浆。

图1 MIP-1a在鼻息肉组的强阳性表达

图2 MMP-9在鼻息肉组的强阳性表达

2.2 两组组织中MIP-1α和 MMP-9含量的比较

通过对组织中MIP-1α和 MMP-9含量的测定，MIP-1α在鼻息肉组织表达明显高于下鼻甲黏膜组织，且两者对比（P＜0.05）（表1），差异有统计学意义。MMP-9在鼻息肉组织表达明显高于下鼻甲黏膜组织，且两者对比（P＜0.05）（表2），差异有统计学意义。在鼻息肉组MIP-1α和 MMP-9的表达呈正相关 （r=0.546，P＜0.05）（表3）。

表1 MIP-1α在鼻息肉组与对照组中的表达

表2 MMP-9在鼻息肉组与对照组中的表达

表3 NP中 MIP-1α和 MMP-9表达结果的比较

3 讨论

早在1977年Tos等［2］就提出了“上皮破裂理论”，用此理论阐明鼻息肉的发病机制。后来有很多学者［3］在不断的学习和探索中更加完善了该理论，并提出了“上皮破裂理论和多因素发病学说”。此学说认为鼻息肉是由于鼻腔外侧壁及筛前区空气动力学的改变和病毒、细菌的侵袭，继而引发了宿主免疫反应，大量炎性细胞及炎性介质释放并浸润于鼻腔黏膜，导致发生炎性反应从而引起黏膜水肿，固有层压力增高而疝出导致上皮破裂，破裂部位继续增殖并上皮化而形成息肉。由此可见，在鼻息肉发生发展的病理过程中浸润的炎性细胞和炎性介质具有重要的内在动力作用。

最近Sugimoto等［4］构造大鼠非细菌性前列腺炎模型中，研究发现在大鼠前列腺组织和尿液中 MIP-1α的表达均有升高，而且MIP-1α的表达明显受到爱活尼通的抑制。Desireddi［5］等的研究表明MIP-1α在Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液中的表达也明显升高。MIP-1α在实验性自身免疫性脑脊髓炎中也有高表达，给予抗MIP-1α抗体后，中枢神经系统单核细胞数量显著减少。CCR1基因敲出小鼠与野生型小鼠相比，实验性自身免疫性脑脊髓炎发病率明显下降，而且中枢神经系统的炎症明显减轻。

有研究表明MMP-9的表达水平的高低与肺癌发展的程度有关，而且有可能作为判断肺癌临床分期的重要依据之一［6］。Wang LF等［7］研究慢性鼻窦炎及鼻息肉的发生及发展中发现MMP-9基因表达增加，表明MMP-9是鼻息肉发生及发展中的重要风险基因。吴俣等［8］通过创建小鼠无菌性腹膜炎症模型研究发现在炎症反应过程中，MMP9的表达受到MIP-1α及其受体CCR1、CCR5的影响。

本研究结果显示，MIP-1α在鼻息肉组织表达明显高于下鼻甲黏膜组织，且两者对比（P＜0.05），差异有统计学意义。MMP-9在鼻息肉组织表达明显高于下鼻甲黏膜组织，且两者对比（P＜0.05），差异有统计学意义。提示两者可能参与了鼻息肉的发病。为临床防止NP的发生、发展及NP患者临床治疗提供理论依据。在鼻息肉组织中，MIP-1α和 MMP-9的表达呈正相关 （r=0.546，P＜0.05），提示两者具有密切关系，但相互作用的方式及机制有待进一步探索和研究。有学者［9］研究指出MMP-9是炎症反应的调节者。在慢性非细菌性前列腺炎患者中 MIP-1α与 MMP-9表达存在类似的关系，MIP-1α可通过增强MMP-9的分泌及活化来降解细胞外基质，继而使炎症细胞游走聚集，加重炎症反应过程。因此认为MIP-1α和MMP-9在鼻息肉中可能起到调节炎症因子网络作用。

［1］邱学敏，魏晓丽，张爱华，等.SDF-1和STAT6在鼻息肉组织中的表达及其临床意义［J］.黑龙江医药科学，2011，34（1）：76-77

［2］Tos M，Mogensen C.Pathogenesis of nasal polyps［J］.Rhinology，1977，15（2）：87-95

［3］Bernstein JM，Gorfien J，Noble B.Role of allergy in nasal poly posis：a review［J］.Otolaryngol Head Neck Surg，1995，113（6）：724-732

［4］Sugimoto M，Oka M，Tsunemori H，et al.Effect of a phytotherapeutic agent，eviprostat 1，on prostatic and urinary cytokines／chemokines in a rat model of nonbacterial prostatitis［J］.Prostate，2011，71（4）：438-444

［5］Yang X，Lu P，Fujii C，et al.Essential contribution of a chemokine，CCL3，and its recetor，CCR1，tohepatocellular carcinoma progression［J］.Int J Cancer，2006，118（8）：1869-1876

［6］阎红娥，梁姗姗，鲍文华，等.RECK及MMP-9在非小细胞肺癌中的表达及意义［J］.黑龙江医药科学，2011，36（2）：11-13

［7］Wang LF，Chien CY，Tai CF，et al.Matrix MMP-9 gene polymorphisms in nasal polyposis［J］.BMC Med Genet，2010，11（9）：85-91

［8］吴俣，向田直史，刘霆，et al.MMP-9在 Mip-1α敲除小鼠和Mip-1α受体敲除小鼠炎性细胞的表达［J］.J Sichuan Univ（MedSci Edi），2009，40（3）：374-377

［9］Opdenakker G，Van den steen PE，Dubois B，et al.Gelatinase B functions as regulator and effector in leukocyte biology［J］.J Leukoo Biol，2001，69（6）：851-859