灵芝孢子油对辐射损伤老龄小鼠的保护作用

江红梅 葛长勋 孙 青 姜 迎 王淑娥

(山东大学千佛山校区医院，山东 济南 250061)

灵芝孢子油是从破壁的灵芝孢子中萃取浓缩富集而得到的油状脂质物，它集中了灵芝孢子中的三萜类、多糖类、核苷类、有机锗等有效成分〔1〕，同时含有18种脂肪酸，包括6种不饱和脂肪酸、7种饱和脂肪酸、2种环链脂肪酸，以及己酸、辛酸和壬酸等短链脂肪酸〔2〕。近年来，灵芝孢子油在抗肿瘤〔3〕、免疫调节〔4〕等方面的生物活性引起了科研人员的密切关注，但其抗辐射作用鲜见报道。由各种电离辐射引起的损伤等，已引起人们的高度重视。本实验研究灵芝孢子油对辐射损伤老龄小鼠的保护作用。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 Olympus显微镜(日本Olympus公司)、 DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)、LDZ5-2型低速自动平衡离心机(北京雷勃尔离心机有限公司)、722N-可见分光光度计(上海精密仪器有限公司)、γ射线源(山东大学齐鲁医院)。灵芝孢子油软胶囊(0.5 g/粒，人体每日推荐用量为0.05 g·kg，江苏安惠生物科技有限公司)，标准胎牛血清(天津TBD生物工程有限公司)、超氧化物歧化酶(SOD)、蛋白定量测定及微量血红蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2灵芝孢子油灌胃溶液的配制 准确称取适量灵芝孢子油软胶囊溶解于玉米油中，配制成相应浓度的灵芝孢子油溶液。

1.3实验动物分组与方法 健康SPF级昆明雄性12月龄小鼠144只，体重18～22 g，由山东大学实验动物中心提供，实验动物合格证号为SCXK(鲁)20090001。实验室温度为(22±2)℃，相对湿度为(50±5)%，小鼠自由摄食、饮水。以正常饲料适应性喂养3 d后，将小鼠按体重随机分为A、B、C三组。各组均随机分为辐射模型组、低、中、高剂量灵芝孢子油组，每组12只。低、中、高剂量灵芝孢子油组小鼠经口灌胃浓度分别为12.5、25.0和75.0 g/L的灵芝孢子油溶液，辐射模型组灌胃等体积的玉米油，灌胃容量为0.02 ml/g，1次/d。灌胃第30天，A组小鼠检测外周血白细胞计数后，各组小鼠给予60 Coγ射线全身一次性照射，A、B、C三组照射剂量分别为3、3、6 Gy，照射后继续给予灵芝孢子油。每周称量一次小鼠体重，观察其日常活动。

1.4测定指标 A组小鼠分别在照射后第3、14天进行外周血白细胞计数实验。B组小鼠照射后第4天测定骨髓细胞DNA含量及骨髓细胞微核率，测定方法依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)。C组小鼠照射后第7天称量体重，按试剂盒要求测定红细胞及肝脏SOD活力，并计算肝脏、胸腺及脾脏系数(肝脏、胸腺及脾系数=肝脏、胸腺及脾脏重量/体重×100%)。全血中微量血红蛋白含量的测定采用比色法，肝组织中蛋白定量测定采用双缩脲法进行。

2 结 果

2.1灵芝孢子油对小鼠体重的影响 各组小鼠生长发育良好，体重稳定增加。灵芝孢子油灌胃期间无小鼠死亡；在照射后，辐射模型组有2只小鼠死亡。各组小鼠各期体重差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2灵芝孢子油对小鼠外周血白细胞数的影响 照射前，各剂量组小鼠外周血白细胞数与辐射模型组相比，无显著性差异(P>0.05)；照射后第3天，辐射模型组外周血白细胞数与照射前相比明显降低(P<0.01)，表明辐射损伤模型成立。照射后第14天，中、高剂量组外周血白细胞数与辐射模型组相比显著增多(P<0.05)，见表1。

2.3灵芝孢子油对小鼠骨髓细胞DNA含量与微核率的影响 经照射后，随着灵芝孢子油剂量的增加，小鼠DNA含量升高趋势明显，且与模型组相比，各剂量组差异均具有统计学意义(P<0.05)；同时骨髓细胞微核率有下降趋势，高剂量组与模型组相比差异具有显著性(P<0.01)。见表2。

表1 灵芝孢子油对照射小鼠外周血白细胞计数的影响(×109个

2.4灵芝孢子油对小鼠肝脏、胸腺、脾脏重量及其脏器系数的影响 各组小鼠肝脏重量及其肝脏系数相比，差异均无统计学意义(P>0.05)。而中、高剂量组胸腺、脾脏重量及其系数与模型组相比显著增高(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表2 灵芝孢子油对照射小鼠骨髓细胞DNA含量及微核率的影响

表3 灵芝孢子油对抗辐射小鼠肝脏、胸腺、脾脏重量及其脏器系数的影响变化

2.5灵芝孢子油对小鼠红细胞及肝脏SOD活力的影响 中、高剂量灵芝孢子油组小鼠红细胞SOD活力均显著高于辐射模型组(P<0.01)，高剂量组肝脏SOD活力与辐射模型组相比显著增高(P<0.01)。随着灵芝孢子油剂量的升高，小鼠红细胞及肝脏SOD活力均呈上升趋势。见表4。

表4 灵芝孢子油对小鼠红细胞及肝脏SOD活力的影响

3 讨 论

γ射线辐射可直接作用于DNA、蛋白质及酶类,破坏细胞结构，使分子变性；也可作用于机体内水分子,使其产生大量具有强氧化性的自由基,导致机体代谢紊乱，出现生理、生化和形态上的异变〔6〕。而据不完全统计，我国每年约有2.5亿人次接受放射诊断和治疗〔7〕。同时根据国际辐射防护委员会的最新结果， 100万人中每年大约35人可能因为照射X线而诱发癌症、白血病或其他遗传疾病〔8〕。灵芝孢子油是从灵芝孢子中提取的脂质活性物，通常每20 g灵芝孢子粉可萃取出1 g灵芝孢子油，集合了多种有效成分。

造血系统对辐射高度敏感。过量辐射后，造血干细胞急剧减少，外周血液因成熟血细胞来源匮乏而致白细胞数量降低〔9〕。微核是当真核细胞的染色体断裂或纺锤丝受影响时，出现在有丝分裂后期，滞留于细胞核外的异常遗传物质，其数量的大小可直接反映染色体的损伤程度〔10〕。骨髓细胞DNA含量在一定的范围内与辐射剂量成反比、与恢复时间成正比〔11〕，因而其含量高低可代表机体辐射受损状况。胸腺是T细胞分化和成熟的主要场所，胸腺的损伤和退化可导致免疫细胞、特别是成熟T细胞数量的减少〔12〕；脾脏是机体最大的外围免疫器官，参与机体多种免疫反应。目前认为, 辐射使机体产生大量自由基进而导致脂质过氧化是引起机体损伤的机制之一。SOD作为消除自由基的酶系防御因子，能特异有效地清除活性氧自由基，阻止机体脂质过氧化〔13〕。因而血象指标、DNA含量、自由基数量是否改善可作为衡量某种药物对辐射损伤拮抗力强弱的重要指标〔14〕。本实验辐射模型组小鼠在进行3 Gy 60Coγ射线全身一次性照射后，外周血白细胞数明显降低，表明辐射损伤模型成立，这也与Simic等〔15〕的报道相一致。

灵芝孢子油富含三萜类、有机锗及多种不饱和脂肪酸，因而其改善血象、保护DNA、淬灭自由基具有合理性。就本实验结果而言，灵芝孢子油作为一种保护剂，能够显著地提高外周血白细胞数、骨髓细胞DNA含量、胸腺/脾系数及血/组织SOD活力，并明显降低骨髓细胞微核率，从而表明适量的灵芝孢子油可以拮抗辐射引起的机体损伤，但其具体作用机制仍需深入探讨。

4 参考文献

1颜 燕,徐建华,吕实波,等.灵芝抗辐射功能的研究〔J〕.中国公共卫生,2002；18(10):1221-2.

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3吕明明,王婷婷,钱 倩,等.灵芝孢子油对肺腺癌癌性胸水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用〔J〕.现代肿瘤医学,2011；19(7): 1289-92.

4黄建康,王凤岩,黄 琼,等.灵芝孢子油增强小鼠免疫功能及护肝作用的实验研究〔J〕.现代预防医学,2007；34(7):1272-4.

5中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范〔S〕.2003.

6吴红星,杨剑婷.抗辐射剂的研究现状〔J〕.放射免疫学杂志,2005;18(1):58.

7蒋宇宏,李春高,梅海清.医用X线诊断受检者的电离辐射危害〔J〕.中国医疗设备,2011;26(8):86-7.

8赵 东.完善放射防护措施提高生命健康质量〔J〕.中华健康教育,1999；15(9):58.

9段玉清,张海晖,唐 瑛,等.莲房原花青素对60Co-γ射线致亚急性辐射损伤防护的研究〔J〕.营养学报,2005；27(6):491-3.

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11彭瑞云,崔雪梅,高亚兵,等.电磁脉冲辐射对猕猴骨髓造血细胞损伤效应研究〔C〕.第三届电磁辐射与健康国际研讨会暨2003年全国电磁辐射生物学学术会议论文集,2003:134-5.

12Mu XY, Thoman ML. Aging affects the regeneration of the CD8+T cell compartment in bone marrow of transplanted mice 〔J〕. Mech Ageing Dev，2000；112(2):113-24.

13Giardino R,Giavaresi G,Fini M,etal. The role of different chemical modifications of superoxide dismutase in preventing a prolonged muscular ischemia/reperfusion injury 〔J〕. Artif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol, 2002;30(3):189-98.

14金乐红,刘传飞,曾 宇.葛根素对实验性大鼠电离辐射损伤的保护效应〔J〕.中西医结合学报,2005;3(1):43-5.

15Simic MG, Bergtold DS, Karam LR. Generation of oxy radicals in biosystems〔J〕. Mutat Res,1989;214(1):3-12.