腹腔镜超声引导下射频消融术对肝癌患者免疫功能的影响

袁艳红

(张家港澳洋医院超声科，江苏 张家港 215600)

肝癌为临床较为常见的恶性肿瘤之一，因高致死率、高复发率及高转移率广受关注〔1〕。临床调查结果显示〔2〕，多数患者入院时已错过根治性手术的时间窗，仅20%～30%的患者可获得切除机会。射频消融术(RFA)是随肿瘤微创治疗学发展起来的新技术，属物理疗法，无药源性刺激，藉高温或低温使肿瘤组织凝固性坏死，对肿瘤细胞的杀伤作用靶向性强、安全性高，可在微侵袭的前提下取得较高的治疗效果；此外，RFA可能介导了患者的细胞免疫功能变迁〔3，4〕。随着现代影像医学及内镜医学的发展，腹腔镜超声RFA(LURFA)的出现，突破了常规RFA不可直视和触觉缺失两大限制，进一步拓宽了RFA的适用范围，已成为当前医疗水平下小病灶肝癌患者非外科治疗的首选方法〔5〕。本研究重点从T细胞亚群细胞计数及血清免疫因子变迁两方面探讨ULRFA对肝癌患者免疫功能的影响。

1 资料和方法

1.1一般资料 选取本院收治、经临床、影像及病理联检确诊为肝癌的患者37例为观察组；其中男21例，女16例；年龄33～75〔平均(50.3±8.94)〕岁；病程1～7年，平均(4.1±1.7)年；病灶范围：2.7 cm×3.6 cm～6.2×8.9 cm，平均(16.7±4.32)cm2。诊断标准：参照第8届全国肝癌学术会议《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》进行诊断。排除标准：弥漫性肝癌患者；肝外转移患者；肝癌治疗史患者；血液系统疾病患者；严重内科合并疾病患者等。同时，选取同期入院体检的29例同期健康志愿者为对照组；其中男17例，女12例；年龄31～72〔平均(48.7±9.10)〕岁。两组患者年龄、性别等一般资料方面无统计学差异(P>0.05)。

1.2方法 37例患者均在超声诊断仪(Volusion-730,GE)和腹腔镜(A50000A,OLYMPUS)的共同引导下进行RFA治疗：(1)患者根据肿瘤位置选择合适体位，本组病例左肝病灶取左前斜位，右侧病灶取左侧卧位。(2)全麻后，建立CO2气腹，入镜探查，掌握病灶位置、数量、分布形态及其与周边组织的解剖关系。(3)选择合适的穿刺路径，在超声和腹腔镜的共同引导下将射频治疗针植入瘤体组织，启动射频治疗仪(CelonAGPower,Olympus)，以10 w为基点，梯度设置射频能量，根据患者个体情况，增加10～20 w/min，阻抗上升为组织固化标志。(4)对于小病灶患者，可采用单点穿刺，对于较大病灶及多瘤体患者，可制订多个穿刺点，以涵盖瘤体四周为宜，同时谨慎处理周边正常生理组织，避免医源性损伤。(5)治疗过程中密切监测患者血压、心电、动脉血气、疼痛程度等基本生命体征，及时给予降压、补液、吸氧、镇痛等对症处理，治疗结束后，禁食水4～12 h，并进行保肝治疗。

1.3观察指标 各组研究对象均于清晨8∶00～9∶00时取空腹静脉血，其中肝癌患者于治疗前1 d、及治疗后1 w分两次取血，健康志愿者于体检当日取血。所得血样室温静置40 min以上，4 000 r/min离心，取血清，-80℃存储，待检。采用流式细胞仪(CyFlow®Counter,Partec)测定T细胞亚群T、Ts、Th、NK、及CIK细胞计数；采用ELISA试剂盒测定血清免疫因子水平。其中，Th1细胞分泌因子IL-2、IFN-γ、TNF-α及Th2细胞分泌因子IL-4、IL-10试剂盒由上海微晶生物科技有限公司提供，肿瘤细胞分泌因子sIL-2R、TGF-β试剂盒由上海高创化学科技有限公司提供。

2 结 果

2.1T细胞亚群细胞计数 治疗前，患者的Ts细胞计数显著高于对照组(P<0.05)，而T、Th、NK、CIK细胞计数显著低于对照组(P<0.05)；治疗后，患者的Ts细胞计数显著降低(P<0.05)，T、Th、NK、CIK细胞计数显著升高(P<0.05)。见图1。

2.2Th1细胞分泌因子水平 治疗前，患者的血清IL-2、IFN-γ、TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)；治疗后，各项指标均得以显著升高(P<0.05)。见图2。

2.3Th2细胞分泌因子水平 治疗前，患者的血清IL-4、IL-10水平显著低于对照组(P<0.05)；治疗后，两项指标均得以显著升高(P<0.05)。见图3。

2.4肿瘤细胞分泌因子水平 治疗前，患者的血清sIL-2R、TGF-β水平显著低于对照组(P<0.05)；治疗后，两项指标均得以显著升高(P<0.05)；见图4。

图1 各组患者T细胞亚群细胞计数比较

图2 各组患者Th1型辅助细胞分泌因子血清浓度比较

图3 各组患者Th2型辅助细胞分泌因子血清浓度比较

图4 各组患者肿瘤细胞分泌因子血清浓度比较

3 讨 论

作为手术之外的微创治疗方式，LURFA集治疗靶向化、定位可视化及损伤最小化于一身，在临床有效性和安全性上均获得了确切的保障〔6，7〕。近年研究〔8〕结果显示，LURFA的独特优势在于清除病灶的同时，对患者的机体免疫功能有所强化。机体的抗肿瘤免疫以细胞免疫为主，作为细胞免疫的主效应细胞，T淋巴细胞亚群在肿瘤的发生、发展中发挥了重用作用。已有研究表明〔9～11〕，多数肝癌患者存在不同程度的免疫损伤，细胞免疫功能处于抑制状态，表现为抑制性T细胞Ts增多、辅助性T细胞Th减少、抗原呈递功能低下、肿瘤杀伤性免疫因子缺失或失活等多个方面。

本研究结果提示肝癌患者的机体处于Th/Ts失衡状态，Th向Ts的漂移削弱了T细胞的抗原呈递功能及NK与CIK的细胞活性。其次，提示肝癌患者的机体处于Th1/Th2失衡状态，Th1向Ts的漂移导致IL-2、IFN-γ、TNF-α等肿瘤杀伤效应因子缺失〔12〕。再次，提示肝癌患者外周血细胞免疫水平的抑制状态可能源于肿瘤细胞分泌因子的长期刺激。另外，LURFA对肝癌患者的各项免疫变迁均有一定的纠正作用，分析与两方面机制有关：(1)经消融刺激，可直接引起细胞蛋白质变性，导致肿瘤细胞发生凝固性坏死〔13〕，坏死细胞作为异体组织，一定程度上刺激了白细胞、巨噬细胞等固有免疫细胞的吞噬功能，同时，利于暴露肿瘤细胞抗原，进一步提高抗原提呈效率。(2)LURFA对肿瘤细胞的杀伤作用直接阻断了肿瘤细胞分泌因子的分泌，一定程度上缓解了机体的免疫负担，利于免疫机能的自我修复。

综上，基于肿瘤细胞分泌因子的长期刺激，肝癌患者外周血细胞免疫水平处于抑制状态，辅助型T细胞由Th1向Th2漂移；LURFA可通过激发抗原呈递，抑制sIL-2R、TGF-β分泌等多重途径调整Ts/Th、Th1/Th2比例，强化患者的细胞免疫功能。

4 参考文献

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13Shah DR,Green S,Elliot A,etal.Current oncologic applications of radiofrequency ablation therapies〔J〕.World J Gastrointest Oncol,2013；5(4):71-80.