虎射利咽含片的抗炎、镇痛作用及对小鼠免疫系统的影响

秦莉花 吴艳飞 陈晓阳，3 黄 宽 李 晟 叶丽芝

(湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208)

实验研究表明，虎射利咽方具有较好的抗炎、镇痛、抑菌等作用〔1～3〕。临床使用发现，该方在治疗急慢性咽炎效果显著，尤其是在治疗湿热型咽炎效果尤为突出。本实验从抗炎、镇痛以及免疫学方面研究虎射利咽含片的作用。

1 材料与方法

1.1材料 健康KM小鼠，SPF级，体重18～22 g，雌雄皆用；健康SD大鼠，雄性，SPF级，体重180～220 g，以上动物由长沙市开福区东创实验动物科技服务部代购，动物合格证号：scsk(豫)2009-0012。 虎射利咽含片组成方(自制)，阿司匹林肠溶片(长春银诺克药业有限公司，国药准字H20053136)、银黄含化滴丸(山西千汇药业有限公司，国药准字Z20080475)、注射用环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H32020857)以上药物用时均由生理盐水配成所需浓度。二甲苯(500 ml/瓶，天津市大茂化学试剂厂，批号：20080921)；角叉菜胶(100 g/瓶，Sigma公司，批号：45F- 0427)；其他试剂均为市售分析纯。 打孔器直径(7 mm)；电子天平(德国SartoriuS公司产品，型号：BP211D)；电热三用水箱(北京市医疗设备厂)；GJ28402型热板测痛仪(浙江宁海白行电子医药仪器厂)；UV-9600型分光光度计(北京北分瑞利分析仪器(集团)责任有限公司，型号：R11107317)。

1.2方法

1.2.1虎射利咽含片对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响〔4,5〕取50只KM小鼠，18～22 g，雄性，按体重随机分成五组，每组10只，即空白对照组(生理盐水组)、阳性对照组(阿司匹林组)、虎射利咽含片低剂量组、片中、高剂量组。虎射利咽含片组每天分别灌胃相应剂量0.52、1.04、2.08 g/kg；阳性对照组灌胃阿司匹林0.156 g/kg；空白对照组按体重灌胃相应量生理盐水。连续给药7 d。与末次给药30 min后，立即在右耳前后两面均匀涂抹0.02 ml/只致炎，左耳不涂作对照。致炎30 min后，颈椎脱臼处死小鼠，用7 mm打孔器分别取两耳相同部位耳片。以左右耳质量之差为其肿胀程度，计算各组耳肿胀度。炎症抑制率(%)=〔(空白对照组肿胀度-给药组肿胀度)/空白对照组肿胀度×100%〕。

1.2.2虎射利咽含片对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响〔6〕取SD大鼠50只，180～220 g，雄性，按体重随机分成五组，分组同上。各组每天按1 ml/100 g 灌胃给药1次，虎射利咽含片低、中、高剂量组每天分别灌胃相应剂量0.36、0.72、1.44 g/kg，空白对照组给予生理盐水。阳性对照组按0.108 g/kg给予阿司匹林，连续给药7 d。正式实验开始前按后足容积法测定实验大鼠右后足容积，测2次，取平均值作为致炎前足趾容积。末次给药后1 h，分别在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶混悬液0.1 ml/只致炎，测定l、2、3、4、6 h右后足跖容积。

1.2.3虎射利咽含片对小鼠热板致痛实验的影响〔7〕取KM小鼠，18～22 g，雌性，置于(55±0.5)℃热板上，记录小鼠自热板上至出现舔后足反应所需的时间，即为痛阈值，凡小于5 s或大于30 s及跳跃者均淘汰，合格小鼠再测1次痛阈值，取两次平均值作为各鼠痛阈值。取合格小鼠50只，按照痛阈值随机分为五组，分组同上。虎射利咽含片组每天分别灌胃相应剂量 0.52、1.04、2.08 g/kg；阳性对照组灌胃阿司匹林0.156 g/kg；空白对照组按体重灌胃相应量生理盐水。连续给药7 d。于末次给药30 min 后测定痛阈值，并计算痛阈提高百分率，痛阈提高百分率= (给药后平均痛阈值-给药前平均痛阈值)/给药前平均痛阈值×100%。

1.2.4虎射利咽含片对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响〔8〕取KM小鼠60只，18～22 g，雌雄各半，按体重随机分成六组，每组10只，即空白对照组、环磷酰胺组、阳性药物组、虎射利咽含片低剂量组、虎射利咽含片中剂量组、虎射利咽含片高剂量组。第1～3天小鼠腹腔注射环磷酰胺75 mg/只，并从第一天灌胃给药，虎射利咽含片组每天分别灌胃灌胃相应剂量0.52、1.04、2.08 g/kg；阳性对照组灌胃银黄含化滴丸0.655 g/kg；空白对照组、环磷酰胺组按体重灌胃相应量生理盐水，连续给药7 d。末次给药1 h后，尾静脉注射墨汁0.1 ml/20 g(墨汁以生理盐水按1∶9稀释)，注射后2 min、20 min用吸管(预先用肝素溶液润湿)分别从眼眶后静脉取血20 μl，溶于2 ml 0.1%Na2CO3溶液中摇匀，摇匀后在675 nm处测其吸光度值A1(2 min取血所测吸光度值)和A2(20 min取血所测吸光度值)，以0.1%Na2CO3溶液作空白调零，根据公式计算廓清指数K值。K=(logOD1-logOD2)/t2-t1。

1.2.5虎射利咽含片对小鼠溶血素抗体生成的影响〔9〕取KM小鼠60只，18～22 g，雌雄各半，按体重随机分成六组，每组10只，即空白对照组、环磷酰胺组、阳性药物组、虎射利咽含片低剂量组、虎射利咽含片中剂量组、虎射利咽含片高剂量组。第1～3天小鼠腹腔注射环磷酰胺75 mg/只，第4天各组小鼠(空白对照组除外)腹腔注射5%鸡红细胞0.2 ml，致敏4 h后灌胃给药，虎射利咽含片组每天分别灌胃相应剂量0.52、1.04、2.08 g/kg，阳性对照组灌胃银黄含化滴丸0.655 g/kg，空白对照组、环磷酰胺组根据体重灌胃相应量生理盐水，连续给药7 d。末次给药30 min后，摘眼球取血，离心，分离血清，取血清20 μl稀释至2 ml，取稀释血清1 ml与5%鸡红细胞0.2 ml、10%补体0.5 ml混合均匀,在37 ℃恒温水箱中保温30 min，然后置0 ℃冰浴中终止反应，离心，取上清液于分光光度计540 nm处比色，不加血清的空白对照上清液作为比色时调零基准，以给药组的吸光度值与模型组的吸光度值做统计分析。

2 结 果

2.1虎射利咽含片对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 虎射利咽含片高、中剂量组能减轻二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。见表1。

表1 虎射利咽含片对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

2.2虎射利咽含片对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响 与空白对照组比较，虎射利咽含片高、中、低剂量组能显著减少角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀，提示虎射利咽含片有显著的抗炎作用，能显著抑制角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀。见表2。

表2 虎射利咽含片对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀容积的影响

2.3虎射利咽含片对小鼠热板致痛实验的影响 虎射利咽含片高、中剂量组能够显著提高小鼠热刺激的痛阈值，与空白对照组比较有显著差异(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 虎射利咽含片对小鼠热板致痛实验的影响

2.4虎射利咽含片对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响 与环磷酰胺组比较，虎射利咽含片高、中、低剂量组K值增加(P均<0.01)，说明虎射利咽含片能提高免疫低下小鼠巨噬细胞吞噬能力。见表4。

表4 虎射利咽含片对网状内皮系统吞噬功能及溶血素抗体生成的影响

2.5虎射利咽含片对小鼠溶血素抗体生成的影响 与环磷酰胺组比较，虎射利咽含片高、中剂量组吸光度值值增加(P均<0.01)。说明虎射利咽含片高、中剂量可显著促进小鼠溶血素抗体生成(P<0.01)，见表4。

3 讨 论

咽炎是一种常见病、多发病，是咽黏膜并波及黏膜下及淋巴组织的急性炎症，根据病程可分为急性和慢性两大类，祖国医学统称之为“喉痹”。湿热型咽炎则为急性咽炎中的一种证型。虎射利咽方为临床治疗湿热型咽炎的经验方，疗效显著，现开发为含片，使其疗效既有局部作用又有整体作用，减少了服用量，使用方便。

本研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足趾肿胀两种非特异性炎症模型评价虎射利咽含片对早期急性炎症的影响，以热板法镇痛药粗筛的经典方法评价虎射利咽含片的镇痛作用。本实验结果证实，虎射利咽方高、中剂量组都显示出较好的抗炎作用和镇痛作用。单核巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一, 它承担吞噬销毁细胞内寄生菌、真菌等的职能, 巨噬细胞碳廓清指数的多少可以反映其吞噬功能的强弱, 在免疫反应中起着重要的作用。针对病原微生物, 体液免疫起着抗感染免疫调理等作用, 它可能通过产生抗体与对应的抗原特异性集合产生各种生物学效应〔8〕。本文实验结果表明，与环磷酰胺组比较，虎射利咽含片，高、中、低剂量组能促进抗体的生成。

综上所述，虎射利咽含片有较强的抗炎、镇痛作用，且能提高免疫力低下小鼠免疫力的作用。

4 参考文献

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