肾透明细胞癌中KISS-1、VEGF的表达及其临床意义

袁 帅，潘梦音，冯凯祥，景东帅，谢明红，李世朋，韩洪波

肾透明细胞癌中KISS-1、VEGF的表达及其临床意义

袁 帅1，潘梦音1，冯凯祥1，景东帅1，谢明红1，李世朋2，韩洪波1

目的探讨肿瘤抑制因子KISS-1蛋白和血管内皮生长因子VEGF在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测31例肾透明细胞癌组织和15例正常肾组织中KISS-1蛋白和VEGF的表达。结果在肾透明细胞癌组织和正常肾组织中KISS-1蛋白阳性表达率分别为29.0%和60.0%，差异有统计学意义(P﹤0.05)；在肾透明细胞癌组织和正常肾组织中VEGF阳性表达率分别为80.6%和46.7%，差异有统计学意义(P﹤0.05)；两者的表达均与肾透明细胞癌不同分化程度、分期、浸润和转移有关(P﹤0.05)；肾透明细胞癌中KISS-1、VEGF的表达呈显著负相关(r=-5.086，P﹤0.05)。结论KISS-1蛋白低表达与VEGF高表达可能与肾透明细胞癌的发生及浸润转移有密切关系。

KISS-1；VEGF；肾透明细胞癌；蛋白表达

肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是肾细胞癌最常见的病理类型，占75%～80%[1-3]。肿瘤转移抑制基因由于仅抑制肿瘤转移而不影响原发肿瘤的生长而得名，KISS-1基因是其中之一。研究发现KISS-1基因的高表达与食管癌[4]等恶性肿瘤的转移呈负相关，但它与肾透明细胞癌发生转移的关系少有报道。VEGF可分别与表达在自身及血管内皮细胞上的受体结合，促进肿瘤细胞生长及新血管形成。本文采用免疫组化法对KISS-1蛋白和VEGF在肾透明细胞癌中的表达情况进行观察，并探讨KISS-1蛋白和VEGF与肾透明细胞癌扩散、侵袭和预后的关系。

1 资料与方法

1.1标本来源收集河南科技大学第一附属医院2010年10月～2013年6月行根治性肾切除术的ccRCC组织标本31例，术后经病理检查确诊为ccRCC，并取15例正常肾组织作为对照。术前均未接受过化疗、放疗和免疫治疗，手术标本取材后经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋。

1.2主要试剂与设备KISS-1兔抗人抗体(稀释浓度1∶150)，VEGF兔抗人抗体(稀释浓度1∶200)，二步法免疫组化试剂盒(SP-0023)产自美国ZYMED公司均购自北京博奥森生物技术有限公司；DAB显色试剂盒(AR-0612)购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯。

1.3方法免疫组化测KISS-1与VEGF的表达。石蜡切片常规脱蜡、水化，微波炉法抗原修复，滴加抗体，DAB显色显微镜下观察，自来水终止，苏木素复染2 min，盐酸乙醇分化10 s，自来水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片，显微镜下观察结果。

1.4结果判断选用试剂盒中的阳性片作为阳性对照，PBS取代一抗作为阴性对照。KISS-1蛋白，VEGF可以表达于细胞质和(或)细胞膜，染色呈棕黄色视为阳性。阳性细胞数为0%～10%为0分(-)，阳性细胞数大于10%～25%为1分(+)，阳性细胞数大于25%～50%为2分(++)，阳性细胞数大于50%～75%为3分(+++)，阳性细胞数大于75%为4分。0～3分为表达阴性，≥3分为表达阳性[5]。

1.5统计学处理SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。样本率的比较采用χ2检验，以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

KISS-1蛋白染色主要存在于细胞质中。在正常肾的细胞质中可见大量棕黄色染色，在肾透明细胞癌的癌细胞中呈弱阳性表达。肾透明细胞癌组织和正常肾组织中KISS-1蛋白表达率分别为29.0%(22/31)和60.0%(9/15)，差异有统计学意义(χ2=4.070，P﹤0.05)。VEGF染色主要存在于细胞质和细胞膜中。在正常肾组织中呈弱阳性表达，在肾透明细胞癌组织中可见大量棕黄色染色。肾透明细胞癌组织和正常肾组织中VEGF表达率分别为80.6%(25∕31)和46.7%(7/15)，差异有统计学意义(χ2=5.512，P﹤0.05)，见表1、表2。低未分化，Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的肾透明细胞癌组织中KISS-1 的表达水平分别比高中分化、Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移的低；而低未分化，Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的肾透明细胞癌组织中VEGF的表达水平分别比高中分化、Ⅰ～Ⅱ期和无淋巴结转移的高，见表3。KISS-1蛋白和VEGF在肾透明细胞癌表达中KISS-1与VEGF双阳性4例，双阴性1例，KISS阴性VEGF阴性5例，KISS阴性VEGF阳性21例。采用Spearman 相关检验计算相关系数r=-5.086，P﹤0.05，表明两种蛋白在肾透明细胞癌中的表达存在负相关性。

表1 KISS-1蛋白在不同肾组织中的表达

两组相比χ2=4.070，P=0.044。

表2 VEGF在不同肾组织中的表达

两组相比χ2=5.512，P=0.019。

表3 肾透明细胞癌中KISS-1蛋白和VEGF表达与临床病理学参数的关系

3 讨论

肾透明细胞癌是泌尿系统中常见的肿瘤之一。肾透明细胞癌的治疗以手术根治性切除为主要方法，放疗及化疗效果欠佳，免疫治疗效果不明确。因此，迫切需要发现特异、敏感的早期诊断、鉴别诊断和预后评估的因子。KISS-1基因由是在人类黑色素细胞株中发现的一种新的肿瘤转移抑制基因。它对人类肿瘤转移有抑制作用，能够调节肿瘤细胞的生长信号[6]，对肿瘤的生物行为有潜在的作用。KISS-1表达的降低或缺失与肿瘤进展和临床病理学分期等联系紧密，而且对肿瘤患者的预后有前瞻性的价值。通过对它进一步的研究，将可能有助于为人类肿瘤的早期诊断、合理治疗和预防转移提供线索和依据。相关研究发现，在人体多种恶性肿瘤(胃癌[7]、胰腺癌[8])中存在KISS-1基因表达降低、缺失，其表达水平的下降与恶性肿瘤的进展、侵袭转移及预后密切相关，高水平表达者进展慢、不易发生淋巴结及远处器官转移，预后好。本研究结果表明，在肾透明细胞癌组织中KISS-1蛋白表达与正常肾组织相比明显减少，在低未分化肾透明细胞癌表达较少，随着病理分级增高表达水平降低，且有淋巴结转移肾透明细胞癌中的阳性率明显低于无淋巴结转移者。作者推测KISS-1蛋白表达减少，可能与癌细胞异常的增殖及癌细胞迁移有关，并可能参与了癌细胞的浸润与转移。

VEGF可分别与表达在自身及血管内皮细胞上的受体结合，促进肿瘤细胞生长及新血管形成，这两方面相辅相成，为肿瘤侵袭转移提供重要的条件[9]。肿瘤细胞增殖能力强可促进肿瘤体积增大，且分期分级随着增高，侵袭转移能力也相应增强。新血管的形成为肿瘤提供充足的营养，同时脱落的肿瘤细胞可以通过血液途径种植到其他部位发生转移，为肿瘤转移提供可能。本研究表明，在正常肾组织中VEGF呈弱阳性表达，而肾透明细胞癌组织中其表达上调，低未分化肾透明细胞癌中的阳性率明显高于高中分化者，Ⅲ～Ⅳ期肾透明细胞癌组织中的表达水平比Ⅰ～Ⅱ期高，且有淋巴结转移肾透明细胞癌中的阳性率表达较高。这提示VEGF在肾透明细胞癌组织中的高表达可能与癌细胞向周围组织的浸润、迁移有密切关系，并为癌细胞转移奠定基础。

本文采用配对资料的检验计算相关系数r=-5.085，P﹤0.05。表明KISS-1和VEGF在肾透明细胞癌组织中的表达呈负相关。因此作者推测KISS-1蛋白表达下调和VEGF表达增高在肾透明细胞癌发生发展、侵袭转移过程中存在拮抗作用。并为肾透明细胞癌机制及可行治疗措施的探索研究提供了实验基础及理论依据。

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KISS-1andVEGFExpressioninRenalClearCellCarcinomaandItsClinicalSignificance

YUAN Shuai,PAN Meng-yin,FENG Kai-xiang,et al

(Medical College,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo investigate the expressions and significances of KISS-1 and VEGF in renal clear cell carcinoma tissues and its clinical significance.MethodsImmunohistochemical detection of 31 cases of renal clear cell carcinoma and 15 patients with normal kidney tissue and protein KISS-1 and VEGF expression.ResultsIn renal clear cell carcinoma and expression of KISS-1 protein in renal tissues of normal positive rate were 29% and 60%,a statistically significant difference(P<0.05);in renal clear cell carcinoma and normal kidney tissue VEGF expression in 80.6% and 46.7%,respectively,a statistically significant difference(P<0.05);low undifferentiated,Ⅲ～Ⅳ and lymph node metastasis in human renal clear cell carcinoma of the KISS-1 expression of differentiation than high schools,respectively,secondary and no lymph node metastasis of Ⅰ～Ⅱ low and undifferentiated,phase Ⅲ～Ⅳ renal clear cell carcinoma and lymph node metastasis in the differentiation of VEGF expression level than high schools,respectively,secondary and no lymph node metastasis of I～high.And both expressions are a significant negative correlation (r=-5.086,P<0.05).Conclusionabnormal expression of KISS-1 protein,VEGF may be associated with renal clear cell carcinoma and closely related to invasion and metastasis.

KISS-1；VEGF；Clear cell renal cell carcinoma

河南科技大学大学生训练计划(SRTP)项目(2012186)

2014-07-06

1.河南科技大学医学院，河南洛阳 471003 2.天津医科大学一中心临床学院，天津 300192

袁帅(1991-)，男，四川广元人，从事肿瘤研究工作。

韩红波，男，讲师，E-mail：295157120@qq.com

R737.11

A

1672-688X(2014)03-0167-03