HSD17B1和HSD17B2基因多态性与四川汉族人群肝癌的关联性研究

刘 博，马 伟，陈 博，甘 莉，刘冬梅，陈柯宇，张录顺

HSD17B1和HSD17B2基因多态性与四川汉族人群肝癌的关联性研究

刘 博1，马 伟1，陈 博2，甘 莉3，刘冬梅3，陈柯宇4，张录顺5

目的探讨性激素17β-羟甾类固醇脱氢酶(HSD17B1和HSD17B2)基因单核苷酸多态性与四川地区汉族人群肝癌之间的关系，为肝癌的预防、筛查、治疗及预后提供理论依据。方法以136例汉族肝癌患者，200例汉族健康人群为对象，选取HSD17B1rs676387、HSD17B2rs8191246两个位点作为遗传标志，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态技术检测HSD17B1和HSD17B2基因多态性及其分布频率。结果与健康人群相比HSD17B1rs676387的T等位基因显著增加肝癌患病风险(P<0.05)。结论HSD17B1rs676387与四川汉族HCC的发生发展具有相关性，该研究结果有待在多民族、多中心、大样本研究中进一步证实。

HSD17B1；HSD17B2；肝癌；单核苷酸多态性

17β-羟甾类固醇脱氢酶(17-beta dehydrogenase 1,HSD17B)属于雌激素代谢酶，它参与调节组织中雄激素和雌激素水平。HSD17B1是NADPH依赖的还原酶，可将雌酮(E1)转化成活性更强的17B-雌二醇(E2)。HSD17B1基因位于染色体17q12，其基因多态位点rs676387(G/T)与雌激素相关疾病，如乳腺癌、前列腺癌以及子宫肌瘤的相关[1-3]。HSD17B2是NADPH依赖的氧化酶，它能催化高活性的17B-羟类固醇与低活性酮类固醇之间的转换。HSD17B2基因位于16号染色体长臂的24号1区位点的编码区，存在一个同义突变位点rs8191246(A/G,Ter388Trp)。目前有研究发现HSD17B2rs8191246与子宫肌瘤和精子缺乏症有关[3-4]。

基于前人的研究基础，推测HSD17B1和HSD17B2基因多态性可能与肝癌发生发展有关，但迄今为止，尚未查见相关研究报道。因此，本研究拟采用PCR-RFLP技术进行基因分型，计算基因型频率和等位基因频率，探讨HSD17B1rs676387和HSD17B2rs8191246基因座多态性与四川汉族人群肝癌发生发展的相关性，为肝癌的筛查和治疗提供理论依据。

1 资料和方法

1.1资料收集2008 年10月～2010年10月在四川大学华西医学院就诊的肝癌患者136例(男112例，女24例，平均年龄50岁)，所有病例均经病理学证实。收集病人性别、年龄、家庭肝癌史、乙肝表面抗原的状态等临床指标。同期收集对照组200例(四川汉族，男166例，女34例，平均年龄50.3岁)，来自于四川大学华西医院体检中心健康人群。对照组人群排除具有个人或家族癌症史或其他严重的疾病史，排除肝炎病毒感染史。本研究经四川大学伦理委员会批准，受试对象均签署知情同意书。

1.2DNA提取、扩增及分型常规采集5 mL外周静脉血，经EDTA抗凝，使用全血基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA。PCR扩增引物序列及扩增条件参照文献[3](详见表1)，总扩增产物经限制性内切酶酶切、聚丙酰胺凝胶电泳、硝酸银银染后进行基因型分析。为确保实验结果的准确性，随机选取扩增样本测序。

表1 HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246引物序列、退火温度及内切酶

1.3统计学方法采用直接计数法计算基因型和等位基因频率。正常对照组Hardy-Weinberg平衡分析，基因型和等位基因频率分析均采用χ2检验，结果用相对风险度比值比(Odds ratio,OR)及95%可信区间(Confidence interval,CI)表示，P<0.05为差异有统计学意义。统计均使用SPASS 17.0软件进行。

2 结果

本实验包括136例HCC患者和200例健康对照人群，两组年龄和性别构成无统计学差异(P>0.05)。正常组基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，表明纳入人群具有群体代表性。HSD17B1rs676387的T等位基因分布与正常对照组存在统计学差异(95%CI=1.47～2.85,P<0.001)，未发现HSD17B2rs8191246等位基因和基因型频率分布与正常对照组存在统计学差异。遗传模式分析结果如表3所示，HSD17B1rs676387 T等位基因携带者及TT基因型与HCC组显著相关，HSD17B2rs8191246遗传模式与正常对照组无统计学差异。

3 讨论

HSD17B1广泛分布于人体的各个组织，包括激素分泌组织如胎盘、卵巢，还包括脂肪、皮肤、乳腺、子宫内膜、肝脏等组织，以参与调节靶器官局部组织E2水平，调整雌激素对靶组织的作用。近年来，越来越多的研究关注于HSD17B1rs676387基因多态性与激素相关疾病的关联性。Kraft等[1]对来自欧洲、拉丁美洲、美国的8 290例前列腺癌病人和9 367例正常人进行对照研究，结果未发现HSD17B1rs676387与前列腺癌存在相关性。Feigelson等[2]在5 370例乳腺癌和7 480例正常对照中，未发现HSD17B1rs676387与乳腺癌的相关性。同样，Gaudet等[5]通过对11 074例乳腺癌和13 605例正常对照进行meta分析，结果未发现HSD17B1rs676387与乳腺癌的相关性。在子宫肌瘤患者中，Cong等[3]未发现HSD17B1rs676387与四川汉族妇女子宫肌瘤病存在相关性。然而，Lamp等[6]通过150例子宫内膜异位症病人和199例正常生育妇女的研究发现，HSD17B1rs676387基因多态性与子宫内膜异位症患者的生育状况有关。另外，Dumas等[7]通过回顾性研究发现HSD17B1rs676387多态性显著增加乳腺密度；由于乳腺密度与乳腺癌密切相关，因此，HSD17B1rs676387也被认为与乳腺癌的发病存在关联性。近期研究表明，HSD17B1rs676387基因多态性与唐氏综合症妇女早期阿尔兹海默病发生有关[8]。本次实验发现，HSD17B1rs676387 T等位基因及TT基因型增加肝癌发病易感性，该结果提示HSD17B1rs676387参与了四川汉族人群肝癌的发病过程。

HSD17B2是雌二醇的失活转变为雌激素酮的主要因素。HSD17B2同工酶可抑制肝脏，胎盘和子宫内膜中的性类固醇激素。Elo等[9]对50例前列腺癌病人的研究发现，HSD17B2基因座区域缺失与前列腺癌患者的生育状况有关。Su等[4]在180例生精缺陷和120例正常男性对照的调查发现，HSD17B2rs8191246等位基因及基因型基因多态性与台湾男性生精缺陷有关。然而，在子宫肌瘤患者中，Cong等[3]未发现HSD17B2rs8191246与四川汉族妇女子宫肌瘤病的关联性。本次针对四川汉族人群肝癌的研究，也未发现HSD17B2rs8191246等位基因及基因型与肝癌发展的关联性。然而，考虑到纳入样本数量的局限性，该结果尚需在大样本中进一步证实。

总之，本研究首次探讨了HSD17B1rs676387和HSD17B2rs8191246基因多态性与四川汉族人群肝癌发病风险的关系，结果发现HSD17B1rs676387等位基因及基因型可增加肝癌的易感性，提示HSD17B1参与了肝癌的发生进程。该结论有待在多民族、多中心、大样本研究中进一步证实。

表2 HCC和正常对照人群HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246碱基分布

表3 HCC和正常对照人群HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246基因型及遗传模式分布

[1]Kraft P,Pharoah P,Chanock SJ,et al.Genetic variation in the HSD17B1 gene and risk of prostate cancer[J].PLoS Genet,2005,1(5):68.

[2]Feigelson HS,Cox DG,Cann HM,et al.Haplotype analysis of the HSD17B1 gene and risk of breast cancer:a comprehensive approach to multicenter analyses of prospective cohort studies[J].Cancer Res,2006,66(4): 2468-2475.

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[7]Dumas I,Diorio C.Estrogen pathway polymorphisms and ma-mmographic density[J].Anticancer Res,2011,31(12): 4369-4386.

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AssociationofHSD17B1andHSD17B2GenePolymorphismswithHepatocellularCarcinomainSichuanHanPopulation

LIU Bo,MA Wei,CHEN Bo,et al

(School of Medical Laboratory Science,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China)

ObjectiveTo investigate the association between the sex hormone 17β- hydroxysteroid dehydrogenase (HSD17B1 and HSD17B2) gene single nucleotide polymorphisms in Sichuan Han population with HCC (Hepatocellular carcinoma).Methods136 cases of HCC and 200 healthy control subjects were enrolled in present study.Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) methods were chosen to genotype theHSD17B1rs676387 andHSD17B2rs8191246 single nucleotide polymorphisms.ResultsThere was statistically significant difference between HCC patientsHSD17B1rs676387 and normal control groups (P<0.05).ConclusionHSD17B1rs676387 polymorphisms increased the susceptibility of HCC in the Sichuan Han population.Those findings should be further confirmed in a large sample of multi-ethnic multi-center study.

HSD17B1；HSD17B2；HCC；single nucleotide polymorphisms

成都医学院“大学生创新实验计划”基金资助项目(CXJS201302)

2014-07-28

1.成都医学院检验医学院，四川成都 610500 2.成都医学院康复治疗系，四川成都 610500 3.中国人民解放军成都军区总医院，四川成都 610083 4.成都医学院生物医学系，四川成都 610500 5.成都医学院基础医学院，四川成都 610500

刘博(1992-)，男，四川广元人，从事检验医学工作。

张录顺，男，博士，E-mail：zhangls2012@163.com

R735.7

A

1672-688X(2014)03-0164-03