高效液相色谱法测定十味玉泉胶囊中葛根素含量

伍鹏兮

(湖南省邵阳市食品药品检验所，湖南 邵阳 422001)

十味玉泉胶囊由天花粉、葛根、麦冬等10 味中药组方，具有益气养阴、清热生津的功效，用于气阴两虚之消渴病。原标准采用无水乙醇提取，薄层色谱展开后刮下斑点，洗脱定容，紫外可见分光光度计测定葛根素含量[1]。该方法不但操作步骤复杂，易造成损失，误差难以控制，且初步摸索，无水乙醇提取不完全。为更好地控制产品质量，准确测定葛根素含量，笔者改变提取方法，采用高效液相色谱(HPLC)法测定含量，结果满意，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1260 型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵、二极管阵列检测器;TP-150 型超声波清洗器;AG 135 型电子分析天平。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110752 -200912，供含量测定用，含量以96.0%计，使用前不用处理);十味玉泉胶囊(河北华茸堂药业有限公司);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:Agilent C18柱(100 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(22 ∶78);检测波长:250 nm;柱温:35 ℃;流速:1.0 mL/min。

2.2 溶液配制

精密称取葛根素对照品0.022 33 g，置50 mL 容量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2 mL，置10 mL 容量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(0.085 75 g/L)。取本品适量内容物，研细，取约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加30%乙醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定质量，用30%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。按处方比例及生产制备方法，制备不含葛根素的阴性样品，照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别精密吸取2.2 项下3 种溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件进样测定，结果见图1。样品中葛根素峰与杂质峰完全分离，阴性对照品溶液无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品溶液(0.085 75 g/L)2，3，5，7，10 μL 进样测定，以葛根素进样量(X，μg)为横坐标、峰面积积分值( Y)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程A=4 387.5 C+3.883 5，r =1.000 0。结果表明，葛根素进样量在0.171 5 ～0.857 5 μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液5 μL，重复进样5次，测定其峰面积积分值。结果的RSD=0.11% ( n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:分别精密吸取同一供试品溶液5 μL，于0，1，2，4，8，24 h 时进样，测定其葛根素峰面积积分值。结果的RSD=0.26%( n=6)，表明供试品溶液在24 h 内基本稳定。

重复性试验:取同一批样品6 份，分别按拟订色谱条件进样测定其葛根素含量。结果葛根素平均含量为每粒7.3 mg，RSD=0.33%( n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量(每粒7.26 mg)的样品约0.15 g，共6 份，分别加入葛根素对照品溶液(质量浓度为0.92 g/L)2.0 mL，依法制备供试品溶液，并测定其含量。结果见表1。

表1 葛根素加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取不同批号的样品0.25 g，依法制备供试品溶液，并按拟订色谱条件进样测定，以外标法计算样品中葛根素的含量。结果批号为100203，101128，110609 的3 批样品中葛根素的平均含量分别为每粒7.28，6.23，6.87 mg，RSD 分别为1.5%，0.7%，0.7%。

3 讨论

样品提取曾采用了无水乙醇超声提取、氯仿索氏提取除杂质后再用30%乙醇超声提取、30%乙醇超声提取3 种方法。其中用后两种方法提取的样品，葛根素含量测定结果无显著差异，但用第1 种方法提取的样品含杂质峰，且无论是更换色谱柱还是改变流动相比例，杂质峰和被测峰都不能很好地分离，并粗略计算其含量，明显低于用后两种方法提取的样品。考虑到精简步骤，减少污染，以30%乙醇为提取溶剂。采用标准方法与本试验方法对同一批样品进行测定，结果标准方法测得含量不到本方法测得的一半，说明标准方法提取不完全，误差大。本试验中所建立的葛根素含量测定方法，样品处理简单，色谱分离效果良好，精密度高，准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

[1] WS3-213(Z-036) -97(Z)，卫生部药品标准·新药转正标准(第十五册)[S].

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京:中国医药科技出版社，2010:313.