不同提取浓缩干燥工艺对穿心莲内酯类成分的影响

2014-07-14范文成韩月芝张国良

中国药业 2014年2期

范文成，王岳，韩月芝，王健，张国良

（石家庄以岭药业股份有限公司，河北石家庄 050035）

穿心莲为爵床科植物Andrographis paniculata（Burm．F．）Nees，原产于印度，我国广东、福建地区也广泛栽培，是南方地区民间治疗多种感染性疾病及蛇毒咬伤的常用草药，同时也是穿心莲片、消炎利胆片、复方苦木消炎片的主要原料。穿心莲药材在受热或贮藏过程中其内酯类成分会发生变化，穿心莲提取浸膏在干燥过程中，其穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯也会发生转化[1－2]。对于提取、浓缩过程及不同pH的提取溶剂对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的影响，尚未见详细的报道。本研究中，通过对同一批药材采用不同提取、浓缩温度、时间及不同pH的提取溶剂，旨在找出穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的变化规律，为优选穿心莲药材的提取、浓缩工艺提供指导和参考。

1 仪器与材料

Agilent 1100型系列高效液相色谱仪，Agilent自动进样器，Agilent DAD检测器。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为110797－200307，110854－200306）；穿心莲药材（安徽井泉饮片公司，由以岭药业高级鉴别师王振江鉴定为穿心莲）；甲醇（色谱纯，Fisher公司），水为高纯水，提取用乙醇为分析纯。

2 方法与结果

2．1 含量测定

2．1．1 溶液制备

取样品适量（约相当于药材2 g），按2010年版《中国药典（一部）》穿心莲片含量测定方法制备供试品溶液[3]。精密称取穿心莲内酯 21．20 mg，脱水穿心莲内酯 20．40 mg，置 10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1．0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（穿心莲内酯质量浓度 0．212 g／L，脱水穿心莲内酯浓度0．204 g ／L）。

2．1．2 色谱条件与系统适用性试验

流动相：甲醇－水（60∶40）；色谱柱：ODS C18柱（250 mm ×4．6 mm，10 μm），检测波长：穿心莲内酯为 225 nm，脱水穿心莲内酯为254 nm。理论板数按穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2 000。本次分析所使用的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯混合对照品的质量浓度分别为0．103 5 mg／mL和0．102 4 mg／mL。穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品溶液、穿心莲提取物溶液、阴性对照品溶液色谱图，见图1。

图1 高效液相色谱图

2．1．3 方法学考察

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液 2．0，5．0，10．0，15．0，20．0 μL，注入高效液相色谱仪中测定。以进样量（μg）为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归曲线，穿心莲内酯为Y＝2 017 340X－74 407．5，（r＝0．999 6）；脱水穿心莲内酯为Y＝1 331 742X＋15 216．46（r＝0．999 8）。结果表明，穿心莲内酯进样量在0．424～4．24μg范围内与峰面积呈良好线性关系，脱水穿心莲内酯进样量在0．408～4．08μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液各10 μL，重复进样6次，按拟订色谱条件测定。结果的RSD分别为0．8%和 1．1% （n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：分别取同一批的穿心莲提取物5份，依法制备供试品溶液并测定。结果穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的RSD分别为1．3%和2．1% （n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的穿心莲提取物9份（穿心莲内酯含量 22．54 mg ／g，脱水穿心莲内酯 29．32 mg ／g），每份约0．2 g，精密称定，分别精密加入 2．0，2．5，3．0 mL 穿心莲内酯对照品溶液（质量浓度2．12 g／L）和脱水穿心莲内酯对照品溶液（质量浓度2．04 g／L），依法制备供试品溶液并按拟订色谱条件测定。结果见表1。

表1 穿心莲内酯和脱水穿心莲内莲加样回收试验结果（n＝9）

2．2 提取方法考察

提取温度和时间：取同一批药材100 g，混合均匀，按2010年版《中国药典（一部）》穿心莲片提取工艺提取，温度分别设定60，70，80℃，提取时间分别为1，2，3 h，按拟订方法测定提取液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，计算转移率。结果见表2。可见，60℃提取效果明显不如70℃和80℃，分析是温度低造成提取率低；无论哪个温度提取，脱水穿心莲内酯提取2 h效果比提取1 h和3 h好；70℃提取3 h与2 h，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量变化不大，80℃提取3 h与提取2 h比较，二者含量均降低，可能是由于提取的温度高、时间长，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯被部分破坏。取，温度设定70℃，以1 mol／L的盐酸或氢氧化钠溶液调节提取溶剂的 pH 分别为 3，6，9，提取时间分别为 1，2，3 h，取提取液按拟订方法测定提取液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果见表4。可见，pH为3和6的溶剂提取时，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量转移率无明显变化；pH为9提取时，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量转移率明显低于pH为3和6的提取转移率；pH为9提取时，随提取时间的延长，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量转移率均降低，可能是碱性条件下，长提取时间，对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯有破坏。

表3 不同浓缩温度穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯转移率（%）

表2 不同提取温度和时间穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯转移率（%）

表4 不同pH下穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯转移率（%）

浓缩温度和时间：取同一批药材100 g，按70℃提取2 h的条件提取，提取液进行减压浓缩，温度分别设定40，50，60℃，按上述方法测定提取液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果见表3。可见，不同浓缩温度对脱水穿心莲内酯含量影响不大，考虑60℃减压浓缩，沸腾剧烈，易跑药液，选择55℃减压浓缩。pH：取同一批药材 100 g，混合均匀，按2010年版《中国药典（一部）》穿心莲片提取工艺提

干燥温度：取同一批药材100 g，按70℃提取2 h的条件提取，提取液55℃浓缩，干燥温度分别设定50，70，90℃，干燥时间为4 h（均已干燥）。按拟订方法测定提取液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果见表5。可见，干燥前后穿心莲内酯含量降低，脱水穿心莲内酯含量升高；干燥温度越高，穿心莲内酯转移率下降越明显，脱水穿心莲内酯转移率升高越明显，穿心莲总内酯的转移率随温度变化不大，但比干燥前降低约10%。

3 讨论

提取过程中，提取温度过低，提取不完全；温度过高，时间过长，会破坏穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，故温度宜控制在70℃；在40～60℃范围内进行减压浓缩，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量转移率无明显变化；碱性条件影响穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的转移率，而且随提取时间延长，二者的转移率均下降，因此碱性条件不利于两成分的提出，且对两种成分有破坏。干燥对两种成分转移率影响显著，温度越高，穿心莲内酯转移率下降越明显，脱水穿心莲内酯升高越明显，说明干燥过程中，穿心莲内酯向脱水穿心莲内酯转化。同时对调整浓缩液pH进行了干燥试验，结果表明调整浓缩液pH至4～5再干燥，能有效防止穿心莲内酯向脱水穿心莲内酯转化，同时对两种内酯总和的转移率无明显影响。通过上述试验，确定了穿心莲最佳提取浓缩干燥的工艺为，提取温度70℃，提取液55℃减压浓缩，调浓缩液pH至4～5，然后70℃干燥。