水翁皮化学成分研究（Ⅰ）

甄惠娉韩秀奇郝 虹李书渊*

（1 广东药学院中药学院，广东 广州 510006；2 河南新乡医学院第一附属医院，河南 卫辉 453100）

水翁皮化学成分研究（Ⅰ）

甄惠娉1韩秀奇2郝 虹1李书渊1*

（1 广东药学院中药学院，广东 广州 510006；2 河南新乡医学院第一附属医院，河南 卫辉 453100）

目的研究水翁皮Cleistocalyx operculatus （Roxb.）Merr.et Perry的化学成分，为寻找水翁皮抗菌的物质基础及质量标准的提高提供依据。方法运用多种层析方法进行分离纯化，通过波谱数据确定化合物的结构。结果分离得到2个化合物，分别为β-谷甾醇和3，3'-O-二甲基鞣花酸（3，3'-di-O-methylellagic acid）。结论两种成分均为首次从该植物中分离得到。

水翁皮；化学成分；分离；鉴定

水翁皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus（Roxb.）Merr.et Perry的干燥树皮。气无，味苦涩。辛，温。行气，杀虫，止痒。外用治阴囊瘙痒，脚癣，香港脚，皮肤瘙痒[1，2]。对水翁皮的化学成分鲜有研究，仅有人报道了从水翁茎皮中分离出一种抗皮肤真菌性成分—齐墩果烷型三萜，并使用光谱法鉴定为2α，3β，23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28油酸[3]。本文对水翁皮进行系统的化学成分研究，从中分离得到2个化合物，分别为β-谷甾醇和3，3'-O-二甲基鞣花酸，均为首次从该植物中获得。

图1 3，3'-O-二甲基鞣花酸的结构图

1 材料与仪器

薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司），CMC-Na（天津市福晨化学试剂厂），自制薄层板10 cm×10 cm，厚度0.5 mm。柱层析硅胶（上海五四化学试剂有限公司），粒度为80～100目。水为蒸馏水，三氯甲烷，甲醇为分析纯，乙醇为化学纯，核磁共振谱测试试剂为：氚代DMSO。

水翁皮药材1 kg，经广东药学院中药学院李书渊教授鉴定桃金娘科植物水翁的干燥树皮。3，3'-O-二甲基鞣花酸对照品（批号：20101013）购自购自深圳市美荷生物科技有限公司。

SK250HP超声波清洁器（超声功率为100W，上海科导超声仪器有限公司）、DYG-9143B-2电烘箱（上海福玛实验设备有限公司）、AVANCE III 500 MHz 全数字化超导核磁共振谱仪（瑞士Bruker 公司）、Micro MS四级杆飞行时间高分辨质谱仪配备电喷雾离子化（ESI）接口（美国Waters公司）。

2 方法与结果

2.1 提取与分离

取水翁皮药材1 kg，用95%乙醇5倍量浸渍3次，每次24 h，合并浸渍液，减压回收乙醇并浓缩至浸膏，得浸膏41.5 g。浸膏加少量水分散后依次以石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取，各萃取液分别挥去溶剂，除石油醚部位得到油状物外，其余部位浓缩至浸膏。

将乙酸乙酯部位浸膏（31 g）用乙酸乙酯溶解后拌入一定量硅胶（80～100目）并挥干溶剂，上硅胶柱层析，用三氯甲烷-甲醇（100∶0～10∶1）进行梯度洗脱，每份收集100 mL，共收集203份，TLC检识，合并相同组分。

将收集到的各部分流份，分别以三氯甲烷-甲醇（不同比例）展开剂展开，10%硫酸乙醇显色，斑点Rf值相近的组分合并，浓缩，放置析晶。

其中第55～63流份合并为F1，经薄层鉴别为β-谷甾醇；第98～195流份合并为F2，经甲醇重结晶后析出浅黄色小针晶。

2.2 3，3'-O-二甲基鞣花酸的结构鉴定

F2为浅黄色针晶，难溶于甲醇。溶于氚代DMSO、吡啶、三氯甲烷-甲醇混合溶液。薄层板日光下呈黄色斑点，紫外光下显蓝色荧光。三氯化铁反应阳性。

ESI-MS给出分子离子峰m/z329[M-H]-，得出分子量为330。二级质谱m/z298可能是失去官能团CH2O-的离子峰，m/z270可能是失去官能团CH2O-和CO的离子峰。

图2 3，3'-O-二甲基鞣花酸的薄层鉴定结果

1H-NMR（500MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：δ7.52（2H，s，H-5，5'），4.04（6H，s，2×OCH3，3，3'-OCH3）。图谱中可见有一个甲氧基和芳氢，推断为对称结构，结构中可能有两个甲氧基和芳氢。

13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ（ppm）：δ159.1（C-7，7'），152.7（C-4，4'），141.9（C-2，2'），140.8（C-3，3'），112.8（C-6，6'），112.3（C-1，1'），112.0（C-5，5'），61.6（3，3'-OCH3）。图谱中可见在δ100至δ160之间有7个碳信号，说明可能为对称的鞣花酸类结构，δ61.6为甲氧基取代信号，说明可能是3和3'位取代。

综上所述，推测这化合物结构式为C16H10O8，为3，3'-O-二甲基鞣花酸，以上数据与文献[4]基本一致。结构式见图1。

2.3 3，3'-O-二甲基鞣花酸薄层色谱鉴定

取上述F2结晶加吡啶制成饱和溶液，作为供试样品溶液。另取3，3'-O-二甲基鞣花酸对照品及自制对照品，加吡啶制成饱和溶液，作为对照品。照薄层色谱法，《中国药典》（2010版）试验，分别吸取上述三种溶剂各为1µL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（10∶1）为展开剂，展开，取出，风筒吹干，供试样品溶液色谱在与对照品色谱相应的位置上，日光下呈黄色斑点，紫外光下显蓝色荧光（图2）。

T=21 ℃，RH=90%；1～2：供试样品溶液，3：3，3'-O-二甲基鞣花酸对照品，4：自制3，3'-O-二甲基鞣花酸对照品

3 讨 论

本实验首次从水翁皮中分离鉴定了β-谷甾醇和3，3'-O-二甲基鞣花酸。其中3，3'-O-二甲基鞣花酸含量较大，在大多数植物中不常见，可以作为水翁皮质量评价的指标成分。鞣花酸类化合物具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗菌及增强免疫作用等多种生物活性，有很大的发展前景和研究价值[5]。由于水翁皮的化学成分研究还有很多空白，进一步的成分研究正在进行。

[1] 《中药商品知识》编写组.中药商品知识[M].广州:广东科技出版社,1989:100.

[2] 曾颂,韩秀奇,李书渊*.木槿皮、土荆皮、水翁皮本草考证及现代研究[J].广东药学院学报,2011,27(2):1-4.

[3] 水翁茎皮抗皮肤真菌成分∥生药学杂志,1993,47(4):408-410.

[4] 赵超,陈华国.杠板归的化学成分研究(Ⅱ)[J].中草药,2010,41(3): 365-367.

[5] 郭增军*,谭林.鞣花酸类化合物在植物界的分布及其生物活性[J].天然产物研究与开发,2010,22(3):519-524,540.

Study on Chemical Constituents of Cleistocalyx Operculatus

ZHEN Hui-ping1, HAN Xiu-qi2, HAO Hong1, LI Shu-yuan1*
(1 School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China; 2 The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui 453100, China)

ObjectiveThe chemical constituents of Cleistocalyx operculatus are studied to provide the antibacterial material base and improve its quality standards.MethodsColumn chromatography was used in the isolation and purification.The structures of compounds were elucidated by spectrum data.ResultsTwo compounds were isolated and identified as β-sitosterol and 3,3'-di-O-methylellagic acid.ConclusionTwo compounds are isolated from this plant for the first time

Cleistocalyx operculatus; Constituents; Separate; Identify

R282.710.3

B

1671-8194（2014）27-0033-02

*通讯作者