复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德含量测定

贾燕花，刘皈阳，马建丽，王晓青，李翔

(解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京 100048)

复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德含量测定

贾燕花，刘皈阳，马建丽，王晓青，李翔

(解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京 100048)

目的 建立测定复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德含量的高效液相色谱法。方法用Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(60∶40);流速为1.0 mL·min-1;检测波长为240 nm。结果醋酸曲安奈德在12～32 μg·mL-1的浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数为0.999 9;日内精密度为0.33%(n=6);平均回收率为99.8%(n=9)。结论该方法快捷方便,结果可靠,可作为复方醋酸曲安奈德搽剂的质量控制标准。

曲安奈德,醋酸；搽剂；色谱法,高效液相；含量测定

复方醋酸曲安奈德搽剂由解放军总医院第一附属医院制备,为无色澄明的液体,具有消炎、抗免疫反应、止痒和镇痛的作用,主要用于神经性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹等皮肤病,其主要成分为醋酸曲安奈德和盐酸普鲁卡因。文献报道该制剂中醋酸曲安奈德含量测定的方法有分光光度法[1];同时醋酸曲安奈德为单一制剂时,测定的方法有高效液相色谱法[2-3]。笔者未见关于高效液相色谱法测定醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德含量的报道。参考文献[4-7],笔者在本实验中采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德含量,方法简便、快速,结果满意,可用于复方醋酸曲安奈德搽剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪(VWD检测器,美国安捷伦科技有限公司),HITACHI U3000型紫外分光光度仪,AE204型十万分之一电子分析天平(瑞士梅特勒托利多科技公司)。

1.2 试剂 对照品醋酸曲安奈德(批号:100125-201105)和曲安奈德(批号:100055-201103)由中国食品药品检定研究院提供,醋酸曲安奈德含量97.8%;复方醋酸曲安奈德搽剂由解放军总医院第一附属医院提供[批准文号:总制字(2001)F02001,批号:130109, 130130,130218]。实验用水为双蒸水,甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备 醋酸曲安奈德对照品溶液:精密称取醋酸曲安奈德对照品50 mg,置50 mL量瓶,加甲醇定容,作为对照品储备液A;精密量取1 mL,置50 mL量瓶,加流动相定容,即得醋酸曲安奈德对照品溶液。

曲安奈德对照品溶液:精密称取曲安奈德对照品50 mg,置50 mL量瓶,加甲醇定容,作为对照品储备液B;精密量取1 mL,置50 mL量瓶,加流动相定容,即得曲安奈德对照品溶液。

系统适用性溶液:精密量取对照品储备液A和对照品储备液B各0.5 mL,置50 mL量瓶,加流动相定容,即得混合对照品溶液。

供试品溶液:精密量取复方醋酸曲安奈德搽剂1 mL,转入50 mL量瓶,加流动相稀释到刻度,摇匀即可。

阴性样品溶液:按照处方配置不加醋酸曲安奈德的空白对照。

2.2 色谱条件 色谱柱:Welch Materials Ultimate XBC8(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(60∶40),流速1.0 mL·min-1,检测波长240 nm,进样量20 μL。

2.3 系统适用性实验与专属性实验 在上述色谱条件下,取对照品溶液、供试品溶液和系统适用性溶液各20 μL,分别进样HPLC分析。制剂中醋酸曲安奈德有效分离,出峰顺序为曲安奈德峰、醋酸曲安奈德峰,曲安奈德峰与醋酸曲安奈德峰的分离度＞10.0,实验结果表明色谱峰分离度高,系统适应性良好。

取复方醋酸曲安奈德搽剂阴性样品溶液和供试品溶液,按“2.2”项条件分别测定,记录色谱图,醋酸曲安奈德的保留时间为18.2 min,而阴性样品溶液在该处无色谱保留行为,表明阴性样品对醋酸曲安奈德色谱峰不构成干扰,本方法专属性良好。

2.4 线性关系考察 精密量取对照品储备液A0.6, 0.8,1.0,1.2,1.6 mL,分别置于50 mL量瓶,用流动相稀释至刻度,摇匀;分别取上述溶液20 μL注入液相色谱仪,记录色谱图。以浓度(C,μg·mL-1)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标进行一元线性回归。醋酸曲安奈德的回归方程为:A=3.648 8×104C+20.823,r= 0.999 9。结果显示:在进样量为20 μL时,醋酸曲安奈德进样浓度在12～32 μg·mL-1范围内,与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验 精密吸取对照品溶液,按照上述色谱条件连续进样6次,每次进样量20 μL,以醋酸曲安奈德峰面积计算RSD。计算得醋酸曲安奈德的日内精密度RSD为0.33%,表明实验方法精密度良好。

2.6 重复性实验 取同一批样品(批号:130218,含量0.095%),按照“2.1”项供试品溶液配制方法,制备6份供试品溶液,按照上述色谱条件进样分析,以醋酸曲安奈德峰面积计算RSD为1.3%。表明该实验方法重复性良好。

2.7 稳定性实验 取相同的供试品溶液(批号: 130218),分别在0,2,4,6,8,12 h进样测定醋酸曲安奈德的峰面积,计算RSD。结果醋酸曲安奈德峰面积的RSD为0.20%,表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收率实验 精密量取对照品储备液A 0.3,0.5和0.7 mL各3份,分别置50 mL量瓶,每份分别精密加入已准确测定含量的样品0.5 mL(批号: 130218,含量:0.095%),用流动相稀释至刻度,摇匀。按照上述色谱条件,分别量取20 μL进样测定。结果表明,醋酸曲安奈德平均回收率为99.8%,RSD为1.24%(n=9)。本标准确定的复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德的含量测定方法的平均回收率符合含量测定要求。见表1。

表1 醋酸曲安奈德回收率实验结果Tab.1 Recovery of triamcinolone acetonide acetate μg

2.9 样品含量测定 精密量取本品适量,用流动相定量稀释制成每毫升含醋酸曲安奈德约0.02 mg溶液,摇匀,精密量取20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图;另精密称取对照品适量,加甲醇溶解并用流动相定量稀释制成每毫升约含0.02 mg的溶液,精密量取1 mL,置50 mL量瓶,用流动相稀释至刻度,摇匀,同法测定,按外标法以峰面积计算,即得。批号130109,130130, 130218醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德含量测定结果分别为0.094%,0.096%,0.095%,RSD分别为0.07%,0.23%,0.41%。

3 讨论

3.1 色谱柱的选择 笔者考察了C8色谱柱和C18色谱柱的影响。醋酸曲安奈德在C18色谱柱上28.4 min出峰,在C8色谱柱上约18.2 min出峰,同时发现C8色谱柱的色谱图优于C18色谱柱,因此选择C8色谱柱。

3.2 检测波长的选择 由测得的紫外吸收图谱可知,醋酸曲安奈德最大吸收波长为240 nm;高效液相色谱中醋酸曲安奈德在约18.2 min出峰,而阴性对照品在该波长处无吸收,表明醋酸曲安奈德在240 nm处不受处方中其他组分的影响。因此选择240 nm作为检测波长。

3.3 流动相、检测浓度以及溶剂的选择 由于醋酸曲安奈德在水中不溶解,根据《中华人民共和国药典》(2010年版)中醋酸曲安奈德和《日本药典》(16版)中曲安奈德的含量测定方法,确定流动相为甲醇-水(60∶40),浓度约为0.02 mg·mL-1。同时经过实验发现在制备样品时先用甲醇溶解,再用流动相进一步稀释可以获得良好的色谱峰。

该方法快捷方便,结果可靠,可用于复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德的含量测定。

[1] 陈新善,刘玉波,张波,等.分光光度法测定复方醋酸曲安奈德搽剂中醋酸曲安奈德的含量[J].解放军药学学报, 2001,17(4):227-229.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:1122-1123.

[3] http://jpdb.nihs.go.jp/jp15e/(第16改正日本药局方, English version):1525-1526.

[4] 王玉,王铁杰.反相高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德溶液中醋酸曲安奈德和氯霉素含量[J].中国医院药学杂志,2000,20(7):415-417.

[5] 郭江红,赵亚萍,姜红,等.RP-HPLC法测定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有关物质[J].药物分析杂志,2012,32 (2):323-326.

[6] 吕应年,吴怡,吴铁.HPLC法同时测定炎菌清搽剂中水杨酸、醋酸曲安奈德和利福平的含量[J].药物分析杂志, 2008,28(12):2062-2064.

[7] 王吉华,丁华,张迪.高效液相色谱法测定复方醋酸曲安奈德滴耳液的含量[J].中国医药导报,2009,6(21):48-50.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.030

Content Determination of Triamcinolone Acetonide Acetate in Compound Tri-amcinolone Acetonide Acetate Liniment

JIA Yan-hua,LIU Gui-yang,MA Jian-li,WANG Xiao-qing,LI Xiang
(Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish a HPLC method to determine triamcinolone acetonide acetate in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.MethodsHPLC was used with Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm) as chromatographic column with a mobile phase of methanol-water(60∶40).The detection wavelength was 240 nm,and the flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe concentration of triamcinolone acetonide acetate was linear within the range of 12-32 μg·mL-1(r=0.999 9).The intra-day precision RSD(n=6)was 0.33%.The average recovery(n=9)was 99.8%.ConclusionThe method is simple,rapid,accurate and reproducible.The method is suitable for determination of the content of triamcinolone acetonide acetate in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.

Triamcinolone acetonide,acetate;Liniment;HPLC;Content of determination

R977.1;R927.1

A

1004-0781(2014)03-0378-03

2013-05-10

2013-06-12

贾燕花(1982-),女,河南焦作人,主管药师,博士,主要研究方向:药物分析。电话:010-66867088,E-mail：yanhuajia@163.com。

刘皈阳(1972-),男,副主任药师,主要研究方向:医院药学。电话:010-66867081,E-mail：liuguiy@live.cn。