肤美康胶囊的质量控制研究

戴 军

（湖南省溆浦县中医院，湖南 溆浦 419300）

肤美康胶囊是由地黄、柴胡、当归、牡丹皮、山药、茯苓、山茱萸等中药加工制成的内服胶囊剂，处方源于临床经验方，具有疏肝养阴、补血化瘀的功效，用于治疗黄褐斑、雀斑及色素沉着等症。为保证该制剂的内在质量，笔者采用薄层色谱法对其中的当归、牡丹皮、山药、茯苓进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱(HPLC)法对牡丹皮中丹皮酚的含量进行测定[1－4]，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪，包括LC－20AT输液泵、SPDM20AVP检测器、LCsolution工作站（日本）；9906A型超声仪（上海）；硅胶G（青岛海洋化工厂）。丹皮酚、阿魏酸对照品（供含量测定用，批号分别为 110708－200506和 110773－200611），山药、茯苓对照药材（批号分别为121137－200402和121117－200605），均由中国药品生物制品检定所提供；肤美康胶囊（湖南溆浦县中医院，批号为 20120821，20130109，20130918）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 薄层色谱鉴别

当归：取本品内容物15 g，加1%碳酸氢钠溶液50 mL，超声处理 10 min，离心，取上清液，用稀盐酸调节 pH至 2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺当归的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》（一部）》附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以苯 －乙酸乙酯－甲酸（4∶1∶0．1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视[1，5]。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而缺当归的阴性对照品溶液则无此斑点 (图1 A)。

牡丹皮：取本品内容物10 g，加乙醚 40 mL，加热回流1 h，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮0．5 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺牡丹皮的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1 mL含1 mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷 －乙酸乙酯（3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%酸性三氯化铁乙醇溶液（5%三氯化铁乙醇溶液10 mL，加盐酸2 mL，混匀），在105℃加热至斑点显色清晰[1－2]。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而缺牡丹皮的阴性对照品溶液则无此斑点 (图1 B)。

山药：取本品内容物 25 g，加二氯甲烷 30 mL，加热回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加二氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺山药的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。另取山药对照药材5 g，同法制备成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典（一部）》附录Ⅵ B]试验，吸取上述 3种溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－浓氨试液（9 ∶1 ∶0．5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10% 磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰[1，6－7]。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，而缺山药的阴性对照品溶液则无此斑点 (图1 C)。

茯苓：取本品内容物8 g，加乙醚30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺茯苓的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。另取茯苓对照药材4 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚 －石油醚（60～90℃，1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视[1，8－9]。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点，而缺茯苓的阴性对照品溶液则无此斑点(图1 D)。

图1 薄层色谱图

2．2 丹皮酚含量测定

2．2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱： DiamonsilTMC18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 －水（80 ∶20）；检测波长：274 nm；柱温：室温；流速：1．0 mL／min。按丹皮酚峰计算，理论板数不少于4 000。

2．2．2 溶液制备

称取丹皮酚对照品10．45 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（质量浓度209 μg／mL）；精密吸取对照品贮备液 5 mL，置 50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL含丹皮酚20．9 μg的对照品溶液。取本品内容物，研细，混匀，取约0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率250 W，频率 33 kHz）45 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液即得供试品溶液[2，7－8]。取除牡丹皮外的其余处方量药材，同样品制备方法制备阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

干扰试验：分别精密吸取 2．2．2项下 3种溶液各 10 μL，按拟订色谱条件分别进样测定。色谱图见图2。供试品溶液色谱中，在与丹皮酚对照品溶液色谱相应位置上有色谱峰，而阴性对照品溶液色谱中则无此峰，说明阴性无干扰。

线性关系考察：精密吸取质量浓度为20．9 μg／mL的丹皮酚对照品溶液，分别进样 2．0，5．0，10．0，20．0，30．0，40．0 μL，测定峰面积，以进样量(μg，X)为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归(n＝6)，得回归方程 Y＝4．759 729×106X －3．798×103，r＝0．999 7（n ＝6）。结果表明，丹皮酚进样量在 0．041 8 ～0．836 μg范围内与峰面积线性关系良好。

图2 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定其峰面积积分值。结果的 RSD为0．23%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：分别精密吸取同一供试品（批号为20120821）溶液 10 μL，于 0，2，4，6，8，10，12，14，16，24 h 时进样，测定其峰面积积分值。结果的 RSD为0．93%(n＝10)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品（批号为 20120821）6份，按供试品溶液制备方法平行处理并测定。结果丹皮酚平均含量为2．007 9 mg／g，RSD 为 0．73% （n ＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量为 2．007 9 mg／g（批号为20120821）的样品细粉约 0．25 g，精密称定，共 6份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入丹皮酚对照品溶液贮备液 1．9，1．9，2．4，2．4，2．9，2．9 mL，按供试品溶液制备方法处理并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 丹皮酚加样回收试验结果(n＝6)

2．2．4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件依法进样测定，计算丹皮酚的含量。结果批号为20120821，20130109，20130918的样品中每粒含丹皮酚分别为 0．9980，1．0238，1．0617 mg。

3 讨论

肤美康胶囊处方共有12味中药。本次质量控制研究中，对处方中的地黄、柴胡、当归、牡丹皮、山药、茯苓、山茱萸等进行了薄层色谱鉴别，在柴胡、地黄、山茱萸的薄层鉴别方法摸索中，虽然供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，但阴性对照有干扰，故最终确定了当归、牡丹皮、山药、茯苓4味药材专属性强的薄层鉴别方法。

该制剂中牡丹皮用量较大，成分清楚，且有丹皮酚对照品，故决定采用HPLC法测定制剂中丹皮酚的含量。方法学考察结果表明，HPLC法重复性好、回收率高、快速简便、准确可行，可作为该制剂的定量方法。供试品溶液的制备中，为保证样品中丹皮酚的充分提取，对提取时间和提取功率进行了考察（时间为15，30，45，60 min，功率为 200，250，300 W），结果功率 250 W、频率33 kHz、时间45 min时即能将样品中丹皮酚提取完全。

所建立的方法能很好鉴别该制剂中的当归、牡丹皮、山药、茯苓，测定牡丹皮中丹皮酚的含量，可作为该制剂的质量控制方法。

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