对《中国药典》2010年版利巴韦林注射液有关物质检查方法的探讨

王丽，申兰慧，陈国清

江苏省无锡药品检验所，无锡 214028

对《中国药典》2010年版利巴韦林注射液有关物质检查方法的探讨

王丽，申兰慧，陈国清

江苏省无锡药品检验所，无锡 214028

目的：对利巴韦林注射液有关物质检查方法进行探讨。方法：按照《中国药典》2010年版二部利巴韦林注射液有关物质检查的方法，对利巴韦林注射液进行破坏性试验，同时对利巴韦林的降解产物进行考察。结果：利巴韦林杂质峰与氯化钠峰难以分开。因此，利巴韦林注射液处方中如有氯化钠的存在，将干扰利巴韦林注射液有关物质的检查。结论：建议有关物质检测时扣除氯化钠峰的影响，或者企业在利巴韦林注射液的处方中标注氯化钠的量或不加氯化钠。

利巴韦林；有关物质；氯化钠

利巴韦林（三氮唑核苷病毒唑，Ribavirin，结构式见图1）是一种广谱强效抗病毒药物，广泛用于治疗呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎与支气管炎、皮肤疱疹病毒感染[1]。《中国药典》2010年版二部收载了利巴韦林原料及利巴韦林注射液，标准规定利巴韦林原料及其注射液中单个杂质的峰面积应不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍（0.25%），各杂质峰面积的和应不得大于对照溶液的主峰面积（1.0%）[2]。但标准中没有对利巴韦林注射液的处方进行规定。市售的利巴韦林注射液处方不一，处方中除主药利巴韦林和溶剂注射用水外，有的厂家处方标示添加了氯化钠，但未标明氯化钠的浓度。笔者对有关厂家生产的利巴韦林注射液进行检测,发现处方中若加有氯化钠，因利巴韦林杂质峰与氯化钠峰难以分开，对有关物质检查干扰很大，故在有关物质检测时应排除氯化钠峰的影响，或者建议企业在利巴韦林注射液的处方中标注氯化钠的量或不加氯化钠以利于检测。

图1 利巴韦林化学结构

1 材料

1.1 药品与试剂

利巴韦林注射液：①A厂，批号：120710；②B厂，批号：1303136411；③C厂，批号：1306016421；④D厂，批号：1201311；⑤E厂，批号：1308141；规格均为1 mL∶0.1 g，其中厂家D和厂家E的利巴韦林注射液标明处方中含有氯化钠；其余试剂均为分析纯；试验用水为超纯水。

1.2 仪器

安捷伦1200高效液相色谱仪，DAD检测器（美国Agilent公司）；Milli-Q超纯水器（美国Millopore公司）；Mettler AE 240电子天平（美国Mettler-Toledo公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：磺化交联的苯乙烯二乙烯苯共聚物的氢型强阳离子交换树脂柱（型号：Rezex，美国Phenomenex公司）；流动相：水（用稀硫酸调节pH值至2.5±0.1）；流速：0.6 mL·min-1；检测波长：207 nm；柱温：35℃；进样量：20 μL。理论塔板数按利巴韦林峰计不得低于2000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液精密量取利巴韦林注射液1 mL，加流动相稀释至250 mL，即得。

2.2.2 对照溶液精密量取供试品溶液1 mL，加流动相稀释至250 mL，即得。

2.3 专属性试验

在“2.1”色谱条件下，取供试品溶液（厂家A）的未破坏样品和破坏性样品（酸破坏：加入1 mol·L-1盐酸，振摇，室温放置2 h后，用1 mol·L-1氢氧化钠中和；碱破坏：加入1 mol·L-1氢氧化钠，振摇，室温放置2 h后，用1 mol·L-1盐酸中和；高温破坏：90℃水浴放置4 h后，放冷至室温），分别注入色谱仪，记录色谱图，见图2。另取0.9%氯化钠注射液1 mL，加流动相稀释至250 mL，取20 μL注入色谱仪，记录色谱图，见图2。供试品溶液未破坏样品主要有两杂质峰即1和2，相对保留时间约为主峰的0.3与0.6。酸破坏后利巴韦林主峰面积显著减小，杂质1的峰面积显著增大，且峰形分裂为双峰。碱破坏后利巴韦林主峰面积同样显著减小，杂质2峰面积显著增大。高温破坏后两个杂质的峰面积也有所增大。同时发现，氯化钠在利巴韦林的杂质1处，也出现吸收峰，且保留时间非常接近，难以分开。

图2 有关物质检查方法专属性试验色谱图

2.4 有关物质检查方法和结果

取各利巴韦林注射液对照溶液20 μL，分别注入色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的25%。另取各供试品溶液20 μL，分别注入色谱仪，记录供试品色谱图至主成分峰保留时间的2倍，见图3。考虑到处方中含有氯化钠的利巴韦林注射液未对氯化钠的浓度进行标注，参照《中国药典》2010年版二部葡萄糖氯化钠注射液中氯化钠含量测定的方法[3]，对厂家D和厂家E的利巴韦林注射液中氯化钠的浓度进行测定，结果均为0.9%。因此，配制相应的氯化钠溶液注入色谱仪，有关物质考察时扣除氯化钠的峰面积后进行计算。采用不加校正因子的主成分自身对照法，供试品溶液中杂质A量、其他杂质量和杂质总量见表1。

结果厂家C的利巴韦林注射液的单个杂质的峰面积大于对照溶液主峰面积的0.25倍（0.25%），按照药典规定可能判定有关物质检查不符合规定。厂家D和E的利巴韦林注射液在扣除氯化钠峰后，有关物质符合规定。

3 讨论

图3 利巴韦林注射液（厂家C）有关物质色谱图

表1 不同厂家生产的利巴韦林注射液有关物质测定结果

3.1 利巴韦林在《欧洲药典》5.0版中也有收载，采用同《中国药典》2010年版二部利巴韦林检查相同的色谱条件，对相对保留时间约为主峰0.3处的杂质峰进行了严格控制，限度为0.1%[4]。该杂质峰与《中国药典》2010年版二部方法测定的利巴韦林杂质1的相对保留时间相同，故推测杂质1为利巴韦林的5-O-乙酰化产物，是化学合成利巴韦林的中间产物[5]。

3.2 苯乙烯系强酸性阳离子交换树脂，是通过在苯乙烯-二乙烯苯共聚物的苯环上引入磺酸基团制备的，适用于阳离子的分离。利巴韦林为三氮唑核苷，在pH 2．5的流动相条件下呈质子化碱，故可通过置换色谱柱上的氢离子而有所保留[6]。试验发现，采用《中国药典》2010年版二部规定的方法检查利巴韦林注射液的有关物质时，对于加有氯化钠的利巴韦林注射液而言，氯化钠会在利巴韦林的杂质峰处同样出现吸收峰。文献报道，氯离子在200～220 nm范围内有较弱的紫外吸收[7-8]，而且氯离子在磺酸型阳离子交换柱上存在离子排斥，故氯化钠在色谱柱的接近死时间处出峰。从试验结果可以看出，若不扣除氯化钠色谱峰面积，有关物质检查难以判定是否符合规定。同时，标准中未对处方中氯化钠的浓度进行规定或考察，而氯化钠的浓度的高低与峰面积大小直接相关，故含有氯化钠的利巴韦林注射液应当对氯化钠的含量进行标注。

3.3 考虑到《中国药典》2010年版利巴韦林测定所使用的流动相中未加甲醇一类的有机相，具有不可调节、选择性差等缺点，笔者曾尝试减低流动相的流速或选择水作为溶剂稀释供试品溶液，但是氯化钠色谱峰仍难以与杂质1的峰分开。有文献采用常规C18柱，以水为流动相对利巴韦林注射液进行有关物质的检查，氯化钠同样会干扰其有关物质的检查[9]。故建议将《中国药典》利巴韦林有关物质的规定进行修订，判定结果描述为供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，扣除溶剂及辅料峰，单个杂质峰面积应不得大于对照溶液主峰面积的0．25倍（0．25%），各杂质峰面积的和应不得大于对照溶液的主峰面积（1．0%）。或建议企业在利巴韦林注射液处方中标注氯化钠的量或不加氯化钠。

[1] 吴宏富，刘放．反相高效液相色谱法测定利巴韦林注射液的有关物质[J]．药物鉴定，2009，18（7）：17-8．

[2] 国家药典委员会．中华人民共和国药典：二部[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：353-4．

[3] 国家药典委员会．中华人民共和国药典：二部[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：929．

[4] Directorate for the quality of medicines of the council of Europe(EDQM)．European pharmacopoeia fifth edition[S]．2004:2364-5．

[5] 龙潭，汤芝平，廖洪，等．利巴韦林合成概述[J]．广州化学，2008，33（3）：56-60．

[6] L．R．施奈德，J．L．格莱吉克．实用高效液相色谱方法的建立[M]．第2版：科学出版社，1998：360-1．

[7] 吕伟，吴介达．紫外光度检测离子色谱法测定高浓度氯离子样品中的痕量溴、碘离子[J]．色谱，1990，8（5）：333-5．

[8] 傅厚暾，赵俐敏，张艳丽．离子色谱法分析加碘食盐中的微量碘[J]．分析化学研究简报，1999，27（6）：684-6．

[9] 梁翠荣，毕同香，孙吉令．利巴韦林注射液中氯化钠对有关物质检查的影响[J]．2000，1（2）：24-5．

Discussion of Related Substance Test Method for Ribavirin Injection in Chinese Pharmacopoeia VolumeⅡ(2010 Edition)

WANG Li,SHEN Lan-hui,CHEN Guo-qing
Wuxi Institute for Food and Drug Control of Jiangsu Province,Wuxi 214028

Objective：To discuss the related substance test method for ribavirin injections．Methods：The related substance test method for ribavirin injections in Chinese Pharmacopoeia VolumeⅡ(2010 Edition)was employed to determine the related substances in ribavirin injections of different manufacturers．Meanwhile,ribavirin injections were subjected to forced degradation studies under different conditions,and the degradation products of ribavirin were detected．Results：The HPLC of this related substance test method could not effectively separate the degradation product of ribavirin from sodium chloride．Conclusion：It is suggested that the peak area of sodium chloride should be deducted in the related substance test for ribavirin injections．In addition,the content of sodium chloride should be described in the prescriptions of ribavirin injections,or sodium chloride should not be included in ribavirin injections．．

Ribavirion;Related substance;Sodium chloride

R927.11

A

1673-7806（2014）06-506-03

王丽（1984-），女，硕士，主管药师，从事质量检验和标准的研究 E-mail:wangli1984121@163.com

2014-04-14

2014-05-07