退银汤对寻常性银屑病患者外周血及皮损中CCL17的影响*

2014-05-02刘海琴盛国荣谢勇

药学与临床研究 2014年6期

关键词：组织液稳定期银屑病

刘海琴，盛国荣，谢勇

南通市疾病预防控制中心皮防所，南通 226006

退银汤对寻常性银屑病患者外周血及皮损中CCL17的影响*

刘海琴，盛国荣**，谢勇

南通市疾病预防控制中心皮防所，南通 226006

目的：探讨退银汤对寻常性银屑病外周血及皮损中胸腺和调控活化的趋化因子（thymus and activation regulated chemokine，TRAC，又称CC chemokine ligand 17，CCL17）表达水平的影响。方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测50例寻常性银屑病患者在使用退银汤治疗前后外周血血清CCL17水平，与40例正常对照组进行比较；另检测30例寻常性银屑病患者在使用退银汤治疗前后皮损组织液CCL17水平，与20例正常对照组进行比较。结果：治疗后，寻常性银屑病患者血清和皮损组织液CCL17表达水平分别与治疗前比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）；治疗前、后进行期与稳定期银屑病患者外周血CCL17分别比较，差异也均有统计学意义（P＜0.01），但治疗前进行期与稳定期银屑病患者皮损组织液CCL17表达水平比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；而治疗后比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。以上CCL17表达水平均与患者相应的PASI呈正相关。结论：退银汤可以降低寻常性银屑病血清及皮损组织液中CCL17的表达水平。

退银汤；银屑病；胸腺和调控活化的趋化因子

银屑病是一种慢性炎性反应性皮肤病，其反复发作的红斑鳞屑性皮损严重影响了患者的生活质量，其病因和发病机制目前尚未完全阐明。多种趋化因子及其受体参与了银屑病的发病。为探讨胸腺和调控活化的趋化因子CCL17在银屑病发病中的作用，本研究采用双抗体夹心ELISA法检测50例寻常性银屑病患者在使用退银汤前后外周血血清及皮损组织液中CCL17的表达水平，与40例正常对照组进行比较；另检测30例寻常性银屑病患者在使用退银汤前后皮损组织内CCL17水平，与20例正常对照组进行比较。结果报告如下。

1 材料和方法

1.1 临床资料

选择2010年10月～2012年3月南通市疾病预防控制中心皮肤病性病防治所门诊寻常性银屑病患者50例，PASI评分≥10、且皮损面积＞10%的中/重度银屑病患者[1-2]，其中进行期和稳定期各25例，有典型临床表现，并经组织病理检查确诊。

排除其他内脏疾病，男30例，女20例，年龄18～73岁，平均（41．84±14．07）岁，病程3个月～35年，平均（11．33±9．37）年；排除红斑狼疮、天疱疮、皮肌炎及风湿性关节炎等自身免疫性疾病以及其他严重的系统性疾病，并且在3个月内未曾系统使用免疫抑制剂和皮质类固醇激素等影响免疫功能的药物，无本病外的其他系统性和免疫性疾病；排除孕期、哺乳期的患者。

评估寻常性银屑病病情严重程度采用PASI（Psoriasis Area and Severity Index）：银屑病皮疹面积和严重程度评分法评分[2]。

同期选择正常对照组40人，均来自南通市疾病预防控制中心门诊健康体检者，男22例，女18例，年龄16～63岁，平均（39．23±13．00）岁。

两组患者的年龄、性别均具有可比性。选取进行期及稳定期患者各15例在治疗前后分别收集皮损部位组织液，20例皮损组织液对照组取自局限于颈面部的白癜风患者腹部或臀部正常皮肤处。

详细记录入选患者病史；患者及正常对照人群均签署知情同意书，并经南通市疾病预防控制中心医学伦理委员会批准。

1.2 仪器及试剂

酶标仪（ELx-800，美国宝特）；TGL-16C台式离心机（上海医疗器械厂）；HH-W21-600恒温水浴箱（上海医疗恒温设备厂）。

人CCL17双抗体夹心ELISA试剂盒（上海蓝基生物科技有限公司，批号：20120319）。

1.3 处方与治疗方法

退银汤处方：生地30 g，土茯苓30 g，当归15 g，何首乌15 g，白蒺藜15 g，女贞子10 g、黄精10 g，麦冬10 g，乌梢蛇10 g，蜈蚣10 g，金银花10 g，丹皮10 g，桃仁10 g，红花10 g，甘草5 g。共煎煮2次，每次煎出液200 mL。

内服，每日2次，每次200 mL，连服6日停1日，共12周。

治疗过程中，出现明显的过敏反应，如红斑、丘疹或较为严重的腹泻即暂时停止治疗，并按不良反应处理。治疗过程中停用其他任何内服或外用药物。记录患者一般病史资料，并在治疗后再次进行PASI评分和观察不良反应。

1.4 检测方法

1.4.1 血液标本采集对照组人员、银屑病患者于治疗前及治疗后分别抽取外周静脉血各3．0 mL，使用不含热原和内毒素的试管收集血液，离心后将血清和红细胞迅速进行分离，移至离心管中，-70℃冻存待用，并避免反复冻融。

1.4.2 皮损处组织液采集对照组人员、银屑病患者于治疗前及治疗后采用负压吸疱法采取组织液。负压装置为PFJ-LA型表皮细胞分离机（山东郓城康思达电子医疗器械厂），负压范围为-80～0 kPa，吸盘孔径为1 cm，由单孔至8孔不等。分别选取患者皮损处起疱的组织液及对照组二三处正常皮肤的起疱液（选取均匀饱满的水疱），收集的疱液于2．0 mL Ep微型离心管中，-70℃冻存待用，并避免反复冻融。

1.4.3 血清及组织液CCL17水平检测严格按照ELISA试剂盒说明书操作。

1.5 疗效判定标准

根据PASI评分标准，病情改善率（%）=[（治疗前PASI评分-治疗后PASI评分）/治疗前PASI评分]×100%。治愈为病情改善率≥90%；显效为病情改善率60%～89%；好转为病情改善率25%～59%；无效为病情改善率＜25%。有效率以治愈加显效所占的百分比计算。

1.6 统计学处理

所有统计学处理在（Statistical Product and Service Solutions）SPSS17．0及电子表格Excel2007软件中完成，分析数据用均值加标准差（±s）；组内差异检验采用配对样本t检验，组间差异检验方差齐时采用最小有意义差异法（LSD）-t检验进行分析，方差不齐时采用非参数检验，并对血清及皮损组织液中CCL17的表达水平与PASI指数的关系采用相关性线性分析。P＜0．05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床疗效

银屑病患者治疗前、后PASI评分分别为29．97±6．94、7．56±2．94（见表1），差异有统计学意义（t=21．771，P＜0．01）。其中治愈8例，显效33例，好转9例，无效0例，有效率为82%。

治疗过程中有3例患者出现红斑、丘疹反应，经减少药量并给予抗过敏治疗后好转；6例出现轻度腹泻，减少药量后逐渐好转。所有患者均能坚持完成疗程。

2.2 银屑病患者外周血中CCL17在治疗前后的变化

治疗前，银屑病患者血清中CCL17的表达水平高于正常对照组（t=32．757，P＜0．01）。经退银汤治疗后，银屑病患者血清中CCL17的表达水平明显下降，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0．01），并接近正常对照组。进行期及稳定期银屑病患者治疗前、后血清CCL17的表达水平差异也均有统计学意义（P＜0．01），且进行期银屑病患者外周血CCL17表达水平高于稳定期银屑病患者，差异有统计学意义（P＜0．01）。将CCL17的检测结果与患者PASI评分进行Penson相关性分析，显示银屑病患者以及进行期、稳定期银屑病患者治疗前、后血清CCL17的表达水平与PSAI之间均具有正向的线性相关性，均具有统计学意义（P＜0．05 or P＜0．01）。见表1。

2.3 银屑病患者皮损组织液中CCL17在治疗前后的变化

治疗前，银屑病患者皮损组织液内CCL17表达水平高于正常对照组（t=28．644，P＜0．01）。经退银汤治疗后，银屑病患者皮损组织液内CCL17表达水平明显下降，与治疗前比较差异有统计学意义（P＜0．01），并接近正常对照组。进行期及稳定期银屑病患者治疗前、后患者皮损组织液CCL17的表达水平的差异也均有统计学意义（P＜0.01），但进行期银屑病患者皮损组织液CCL17表达水平与稳定期银屑病患者两者间差异无统计学意义（P＞0.05）。将CCL17的检测结果与患者PASI评分进行Penson相关性分析，同样显示银屑病患者以及进行期、稳定期银屑病患者治疗前、后皮损组织液内CCL17的表达水平与PSAI之间均具有正向的线性相关性，均具有统计学意义（P＜0.05 or P＜0.01）。见表2。

表1 正常对照组、银屑病患者治疗前、后血清CCL17水平比较(±s，pg·mL-1）及与PASI评分相关性比较

表2 正常对照组、银屑病患者治疗前、后皮损内CCL17水平比较（±s，pg·mL-1）及与PASI评分相关性比较

3 讨论

CCL17属于CC类趋化因子家族，一般在胸腺组织中表达，特殊情况下外周的单个核细胞也会分泌CCL17，其主要通过与趋化因子受体-4和趋化因子受体-8的结合，只对T淋巴细胞发挥专一的趋化作用，同时CCL17在T细胞发育及成熟T细胞活化方面发挥重要功能[3]，其曾被认为是Th2细胞的特异性趋化因子，能将Th2细胞从外周血募集至炎症部位，参与局部的炎症反应。近年来发现，CCL17也可以趋化Th17细胞和调节T细胞，使病变局部的免疫调节更加复杂[4]。

以往的研究结果表明，银屑病较为公认的是T细胞介导的一种自身免疫反应性炎症机制[5]，银屑病皮损内皮细胞CCL17表达上调，斑块状皮损内浸润的淋巴细胞高表达其受体CCR4，而且银屑病患者外周血T淋巴细胞CCR4表达也增加[6]，表明CCL17/CCR4在T细胞迁移到银屑病皮肤中发挥重要作用。在银屑病皮损发病中，CCL17与受体CCR4结合参与了CCR4+T细胞（主要是皮肤固有T淋巴细胞和Th17细胞）在真皮的募集，并能显著增强角质形成细胞的迁移。在皮肤的炎症反应中，CCL17/ CCR4可刺激角质细胞产生白细胞介素-12p40亚基、粒-巨噬细胞集落刺激因子和神经生长因子[7]，进一步说明CCL17/CCR4在银屑病发病中发挥了重要作用。

本实验研究发现，寻常性银屑病进行期及稳定期患者血清和皮损组织液中CCL17的水平均有不同程度的提高，且在皮损组织液中表达水平高于外周血清中，与正常人群均存在显著性差异。在使用退银汤治疗12周后，患者血清及皮损组织液中CCL17表达水平呈现明显下降趋势，与治疗前比较，差异均有统计学意义，皮损组织液中下降程度高于外周血清中，进行期患者下降程度高于稳定期患者，其外周血及皮损组织液中CCL17表达水平与银屑病病情活动指数呈良好的正向线性关系。表明退银汤能显著降低银屑病患者血清及皮损组织液中CCL17的表达水平。CCL17可能参与了银屑病的发生、发展过程，并发挥重要作用。

中医学认为，银屑病由发生至后期迁延，由轻至重，由皮肤至关节内脏，病位无不涉及卫、气、营、血，其核心为血分有热，血热而诸症衍生[8]，治当以清热解毒、祛风除湿、活血化瘀、宣肺透表为大法。退银汤组方中，生地、丹皮清热凉血养阴，土茯苓、金银花清热解毒，为君药；当归补血活血，何首乌、女贞子、黄精滋阴养血，麦冬益气养阴，桃仁、红花活血化淤，为臣药；蜈蚣、乌梢蛇搜风、通络、止痒，白蒺藜祛风止痒为佐药；甘草调和诸药为使药。退银汤全方具有清热解毒、益气养阴、补血活血之功。本实验显示，退银汤能从病因学上抑制银屑病的炎症反应，从而使血清及皮损中的CCL17下降，改善银屑病患者的症状。但退银汤是如何通过CCL17及其受体CCR4抑制局部的炎症反应，达到缓解银屑病患者的炎症反应并进一步影响角质形成细胞增殖，以及CCL17在银屑病的增殖、分化、炎症调控中的具体机制还有待进行系统的综合研究。

[1] 何渊民，钟桂韦，黎昌强，等.白芍总苷联合阿维A治疗中、重度银屑病32例临床观察[J].中国皮肤性病学杂志，2012，26（2）：185-6.

[2] 中华医学会皮肤性病学分会银屑病学组.中国银屑病治疗指南（2008版）[J].中华皮肤科杂志，2009，42（3）：213-4.

[3] Stutte S,Quast T,Gerbitzk I,et al.Requirement of CCL17 for CCR7-and CXCR4-dependent migration of cutaneous dendritic cells[J].Proc Natl AcadSci USA,2010,107(19):8736-41.

[4] Jakiela B,Sanak M,Szczeklik W,et al.Both Th2 and Th17responsesareinvolvedinvolvedinthe pathogenesis of Churg-Strauss syndrome[J].Clin Exp Rheumatol,2011,29(1):S23-24.

[5] 赵辨.临床皮肤病学[M].3版.南京：江苏科学技术出版社，2001：759.

[6] Fujimoto S,Uratsuji H,Saeki H,et al.CCR4 and CCR10 are expressed on epidermal keratinocytes and are involved in cutaneous reaction[J].Cytokine,2008, 44(1):172-8.

[7] Homey B,Meller S.Chemokines and other mediators astherapeutictargetsinpsoriasisvulgaris[J].Clin Dermatol,2008,26(5):539-45.

[8] 张建波，王乐秋，古朝霞.中药针剂在银屑病治疗中的辨证应用[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（10）：287-8.

Effect of Tuiyin Soup on CCL17 in Peripheral Blood and Lesions of Psoriasis

LIU Hai-qin,SHENG Guo-rong,XIE Yong
Department of Dermatology,Nantong Center for Disease Contol and Prevention of Jiangsu Province,Nantong 226006

Objective：To study the expression level of thymus and activation regulated chemokine (which is also called as CCL17)in peripheral blood and lesions of patients with psoriasis vulgaris who received Tuiyin Soup therapy.Methods：Double antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay was used to detect peripheral blood levels of CCL17 in 50 cases of psoriasis vulgaris before and after treatment with Tuiyin Soup,and 40 cases of the control group were also detected.Besides,the levels of CCL17 in lesions of 30 psoriasis vulgaris were detected before and after treatment with Tuiyin Soup,and 20 cases of the control group were also detected.Results：Before treatment,the expression levels of CCL17 in the serumandthelesionswereboth higherthanthoseofthecontrol groups.After treatment,the serum and lesion levels of CCL17 in the psoriasis vulgariscasesdecreasedsignificantly (P＜0.01）,and the levels of CCL17 werecorrelatedwiththeareasand severity index(PASI)of the patients. Before treatment,the levels of CCL17 betweenthestableandtheserious patients showed significant differences (P＜0.01）,while after treatment,there was no difference(P＞0.05).Conclusion：TuiyinSoupcanreducethe level of CCL17 in the serum and the lesions of patients with psoriasis vulgaris.

Tuiyin Soup;Psoriasis;CCL17

R969.4

1673-7806（2014）06-495-04