HPLC法测定肾康胶囊中大黄酚、大黄素含量

顾崇梅，段贵宝，杨 铖

(1.酒泉市药品检验检测中心，甘肃 酒泉 735000；2.酒泉市中医院，甘肃 酒泉735000)



HPLC法测定肾康胶囊中大黄酚、大黄素含量

顾崇梅1，段贵宝1，杨 铖2

(1.酒泉市药品检验检测中心，甘肃 酒泉 735000；2.酒泉市中医院，甘肃 酒泉735000)

目的：建立肾康胶囊中大黄酚、大黄素的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定肾康胶囊中大黄酚、大黄素含量。色谱条件为：Thermo C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)；以甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)为流动相；流速为1.0mL·min-1；检测波长为254nm；柱温为30℃。结果：大黄酚在0.02～0.64μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为97.18%，RSD为1.13%(n=6)；大黄素在0.016～0.512μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9994)，平均回收率为96.77%，RSD为1.62%(n=6)。结论：该方法准确、重现性好、专属性强,可为肾康胶囊的质量控制提供参考。

肾康胶囊；HPLC法；大黄酚；大黄素

肾康胶囊是酒泉市中医院协定处方，由大黄、黄芩、半夏、柴胡、太子参等中药材组成，具有和解脏腑、益气降浊之功效。对慢性肾功能不全、慢性肾炎、症见头晕乏力、恶心、呕恶、血肌苷及尿素氮升高等症有较好的临床疗效。本实验对肾康胶囊中大黄素、大黄酚进行含量测定和方法验证，为肾康胶囊的质量标准制定提供参考。

1 仪器与试药

LC-20A 高效液相色谱仪(UV检测器)；AE240电子天平；KH-250DB型超声波清洗器。

大黄素(110756-200110)、大黄酚(110796-200716)均购自中国食品药品检定研究院，肾康胶囊样品及阴性对照均由酒泉市中医院制剂室提供。甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司化工分公司)，纯化水由大得利制药有限公司提供，其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80∶20)；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；理论塔板数按大黄酚峰计不低于3 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加甲醇制成含大黄素、大黄酚分别为10μg/mL、8μg/mL的溶液即可。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品内容物适量(约相当于5g)，加甲醇50mL，加热回流提取40min，滤过，取滤液50mL，挥去甲醇，残渣加10%的盐酸溶液10mL，超声提取，加氯仿10mL，回流提取1h，分取氯仿层，酸液用8mL氯仿提取2次，合并氯仿液，残渣加甲醇溶解并稀释至25mL即可。

2.2.3 阴性对照溶液制备 取阴性样品，按供试品溶液制备方法操作，即可。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适应性试验 按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液10μL进行测定。供试品溶液色谱在与对照品溶液主峰的保留时间处有色谱峰，阴性对照在大黄酚、大黄素保留时间处无干扰，大黄素、大黄酚与其他组分达到完全分离效果。见图1。

图1 大黄酚、大黄素HPLC色谱

2.3.2 线性关系 分别精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液各2、4、8、16、32、64μL，按“2.1” 色谱条件进样测定，记录色谱图及峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，分别计算大黄酚与大黄素的回归方程。结果表明：进样量大黄酚在0.02～0.64μg之间，大黄素在0.016～0.512μg之间时，进样量与峰面积之间线性关系呈良好，r分别为0.9996、0.9994。

2.3.3 精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液，在“2.1” 色谱条件下连续进样5次，记录峰面积，计算大黄素与大黄酚含量，结果5次进样RSD分别为0.97%和1.36%。表明该方法精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 精密量取供试品溶液10μL，按“2.1” 色谱条件，在0、3、6、9、12h时间进行测定，记录色谱图及峰面积，大黄素测定的RSD为2.48%；大黄酚RSD为2.87%。结果表明，大黄素与大黄酚在12h内比较稳定。

2.3.5 重复性试验 取同一批号样品5份，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1” 色谱条件测定，结果本批样品的平均含量为：大黄素0.2228mg/g，RSD为1.12%；大黄酚0.1367mg/g，RSD为1.56%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 取本品共6份(含大黄酚、大黄素分别为0.1367mg/g、 0.2228mg/g)，精密称定，分别精密加入定量的大黄酚和大黄素对照品，按“2.2.2”项下方法制备，进样10μL，计算平均回收率,结果见表1。

表1 大黄素、大黄酚加样回收率试验结果

试验结果表明：本处方样品中大黄素的加样回收率为96.77%，RSD为1.62%；大黄酚的加样回收率为97.18%，RSD为1.13%。

2.3.7 样品含量测定 称取3 批样品各3 份，按“2.2.2”项下方法制备，照“2.1” 色谱条件测定，并根据测得峰面积计算出每批样品的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

本处方中大黄为主药，选用HPLC对大黄中大黄酚、大黄素进行定量分析。在样品的提取过程中，曾分别用回流提取法和超声提取法，结果大黄酚、大黄素不能达到完全分离的效果，且杂质峰较多，采用本法进行提取， HPLC结果表明样品提取完全，杂质峰较少，效果较为理想。本试验的HPLC图谱表明阴性对照液无干扰,重现性好,专属性强,可以在同一色谱条件下测定大黄酚、大黄素两种成分的含量，为该制剂中酸枣仁质量控制提供参考。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010:22.

[2] 王洁，张嫱，张一鸣，等.超声提取合HPLC 测定三黄片中大黄素和大黄酚的含量[J].辽宁中医药大学学报,2010,12(11):62-64.

[3] 赵晨.HPLC 法测定四黄泻火片中大黄素及大黄酚的含量[J].中国药师,2010,13((10):101-103．

[4] 孙新建,李志浩,吴进,等.RP-HPLC 测定小儿化毒散中大黄素和大黄酚的含量[J].中医药导报,2010,16(10):99-101.

(责任编辑：魏 晓)

Determination of Emodin and Chrysophanol in Shenkang Capsules by HPLC

Gu Chong mei1,Duan Gui bao1,Yang Cheng2

(1.Jiuquan city drug inspection test center, Jiuquan 735000,China；2.Jiuquan city hospital of traditional Chinese medicine，Jiuquan 735000,China)

Objective:To establish a determination method of Emodin andchrysophanol of Shenkang Capsules.Methods:To determine chrysophanol and emodin of Shenkang capsule by HPLC. Thermo C18was used with Methanol -0.1% phosphoric acid (80∶20) as the mobile phase, The flow rate was 1.0 mL/min, detective wavelength was 254 nm, column temperature was 30 ℃.Results:Chrysophanol showed a good linear relationship in the range of 0.02～0.64μg (r=0.9996) The average recovery(n=6)97.18%，RSD为1.13%. and Emodin showed a good linear relationship in the range of 0.016μg～0.512μg (r=0.9994). The average recovery(n=6)96.77%，RSD为1.62%. Conclusion:The method was accurate,good reproducibility,specificity,and can control the quality of this preparation.

Shenkang Capsules ；HPLC； Chrysophanol；Emodin

2014-40-30

顾崇梅(1973-)，女，甘肃省酒泉市药品检验检测中心副主任药师，研究方向为药品检验。

R284

A

1673-2197(2014)17-0039-02