清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠抗炎作用探析

吴 君，韩 芸，李宝红

(1.山东中医药高等专科学校，山东 烟台 264199；2.滨州医学院，山东烟台 264003；3.广东医学院，广东 东莞 523808)



清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠抗炎作用探析

吴 君1，韩 芸2，李宝红3*

(1.山东中医药高等专科学校，山东 烟台 264199；2.滨州医学院，山东烟台 264003；3.广东医学院，广东 东莞 523808)

目的：考察清胃黄连丸对角叉菜胶诱导的大鼠胸膜炎的影响。方法：采用大鼠胸腔注射0.2mL 1%角叉菜胶诱导胸膜炎模型，根据胸腔渗出液体积、渗出液中白细胞计数、PGE2含量、TNF-α含量评价清胃黄连丸抗急性炎症的作用。结果：清胃黄连丸可显著降低急性胸膜炎大鼠渗出液体积及渗出液中白细胞总数、PGE2含量、TNF-α含量。结论：清胃黄连丸对角叉菜胶所致急性胸膜炎大鼠有明显的保护作用，作用机制可能与降低PGE2、TNF-α的含量有关。

清胃黄连丸；角叉菜胶；急性胸膜炎；PGE2； TNF-α

清胃黄连丸是中国药典(2010版)收载的中成药，由黄连、石膏、桔梗、甘草、知母、玄参、地黄、牡丹皮、天花粉、连翘、栀子、黄柏、黄芪和赤芍十四味中药组成，具有清胃泻火、解毒消肿之效，临床上主要用于治疗口舌生疮、咽喉肿痛等[1]。前期药效学研究发现清胃黄连丸有较好的抗炎作用[2]，本文进一步研究清胃黄连丸对急性炎症的作用，以期为临床应用提供科学依据。

1 材料

1.1 药品及试剂

清胃黄连丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂)，阿司匹林(印尼拜耳公司，德国拜耳药厂监制)，角叉菜胶(Sigma公司)，肿瘤坏死因子-α试剂盒(上海卓康公司产品)，其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器

恒温水浴箱：成都泰盟医疗设备有限公司；电子天平：常熟市双杰测试仪器厂，T1000；RT-2100C酶标仪；XYJ-801型电动离心机：江苏省金坛市医疗仪器厂；可调式移液枪；紫外可见分光光度计；OLYMPUS-IX51倒置显微镜。

1.3 动物

SPF级大鼠，雄性，60只，体重200～220g，购于广东省医学实验动物中心，许可证号：SCXK(粤)2008-0020。

2 方法

2.1 动物分组、给药与致炎[3]

取200～220g SPF级大鼠60只，按体重随机分为6组，每组10只，即：正常组、模型组、阿司匹林组、清胃黄连丸低、中、高剂量组。按照表1中剂量连续灌胃给药6d，给药量均为10mL/kg。正常组和模型组给予等体积蒸馏水。于末次给药后30min，乙醚轻度麻醉，除正常组外，各组大鼠均向右胸腔内注射1%角叉菜胶0.2mL，正常组注入等量生理盐水。致炎8h后将大鼠处死，用剪刀将右侧胸壁肋软骨处剪开一小口，可从该口到达胸腔。用微量移液器将胸腔内全部渗出液吸出并计量，再用冰生理盐水冲洗胸腔，冲洗液与渗出液合并，至离心管内(冰浴)，3 000r/min离心10min，取上清液待测。

2.2 指标检测

2.2.1 大鼠胸腔内渗出液计量和白细胞计数 用移液枪将胸腔内全部渗出液吸出并计量，吸取10μL原渗液用1%盐酸水溶液作为稀释液，在显微镜下用细胞计数板进行白细胞计数[4]。

2.2.2 胸腔渗出液中前列腺素E2(PGE2)含量测定 取胸腔渗液上清液150μL，加0.5mol·L-1KOH-甲醇溶液1mL，50℃水浴异构化20min后，用甲醇稀释至4mL，紫外分光光度计在波长278nm处测定其吸光度(OD)值，代表PGE2的生成量[5]。

2.2.3 胸腔渗出液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量测定 将待测样品和配置好各浓度标准品100μL加入到预先已用抗大鼠TNF-α单克隆抗体包被的酶标板上：将反应板充分混匀后置37℃温箱90min，使标准品、待测样品中的抗原与单抗充分结合；洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4次，在滤纸上印干；每孔(除空白孔外)中加入生物素化的一抗工作液100μL，置37℃温箱60min；洗板；每孔(除空白孔外)加辣根过氧化物酶标记的亲和素抗体工作液100μL，将反应板置37℃温箱60min，使酶标抗体工作液与生物素化一抗结合成复合物；洗板；每孔加入显色剂100μL，置37℃暗处反应10min；每孔加入100μL终止液混匀；在酶标仪上450nm处测各孔吸光值。将所有OD值减除空白值后，根据标准曲线，该曲线图上查出每1mL组织匀浆中TNF-α的含量。

2.3 统计方法

3 结果

3.1 清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠胸腔渗出液和白细胞计数的影响

与正常组相比，模型组大鼠胸腔注射角叉菜胶后出现明显渗出液体积和白细胞总数显著升高(P<0.01)，呈急性炎症表现，说明大鼠胸膜炎造模成功。与模型组相比，阿司匹林组、清胃黄连丸各剂量组可显著抑制胸膜炎大鼠炎性液的渗出及白细胞总数升高(P<0.01或P<0.05)。详见表1。

表1 清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠胸腔

注：与模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01。

3.2 清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠胸腔渗出液中PGE2含量的影响

与正常组相比，急性胸膜炎大鼠渗出液中PGE2含量显著升高(P<0.01)，阿司匹林组、清胃黄连丸各剂量组可显著降低渗出液中炎症介质PGE2含量(P<0.01或P<0.05)。详见表2。

表2 清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠胸腔

渗出液中PGE2含量的影响

组别剂量(g·kg-1)PGE2含量(OD)正常组-0.247±0.0222)模型组-0.642±0.075清胃黄连丸1.50.423±0.0471)30.355±0.0232)60.292±0.0332)阿司匹林0.20.327±0.0312)

注：与模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01。

3.3 清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠胸腔渗出液中TNF-α含量的影响

与正常组相比，急性胸膜炎大鼠渗出液中TNF-α含量显著升高(P<0.01)，与模型组相比，阿司匹林组、清胃黄连丸各剂量组可显著降低渗出液中TNF-α含量(P<0.01或P<0.05)。详见表3。

表3 清胃黄连丸对急性胸膜炎大鼠

胸腔渗出液中TNF-α含量的影响

组别剂量((g·kg-1)TNF-α含量(ng·mL-1)正常组-0.559±0.0762)模型组-1.352±0.196清胃黄连丸1.50.968±0.1511)30.881±0.1422)60.818±0.2322)阿司匹林0.20.938±0.1682)

注：与模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01。

4 讨论

角叉菜胶诱导的大鼠胸膜炎模型是以炎性渗出和白细胞游走为主要改变的急性炎症模型。炎性刺激可引起大量血浆蛋白质(如酶类和炎性介质等)的分泌，导致炎性渗出液中蛋白含量大大增加。故大鼠胸膜炎炎性渗出液量、渗液中的白细胞游走数可作为衡量炎症的重要指标。

PGE2由环氧合酶(COX)催化花生四烯酸合成，COX存在两种异构体，即COX-1及COX-2。COX-l是结构酶，在正常生理情况下具有活性，催化生成的PGE2具有多种重要生理功能；COX-2是诱导酶，生理状况下活性很低，当受到某些因子刺激后，在炎症细胞中高表达，水平急剧增加，进而引起炎症部位PGE2等产物大量增加,促进炎症反应及组织损伤[6]。本实验中清胃黄连丸可减少大鼠胸膜炎渗出液中PGE2含量，提示其抗炎作用可能与其抑制COX-2的活性，进而阻断炎性介质PGs的合成与释放有关。

TNF-α是一种由活化的单核-巨噬细胞分泌的促炎症因子，是导致炎性介质级联反应的始发因子。其可通过多种生物学途径诱发或激活体内产生多种炎症介质，它们又相互作用，相互影响，加重组织的损伤和炎症[7]。本实验中清胃黄连丸可显著抑制炎症时细胞因子TNF-α的大量产生，从而达到抗炎的效果。细胞因子之间的作用是复杂的网络结构，还有许多细胞因子在炎症中发挥重要的作用。如IL-2、IL-8、IL-10、IL-19等都在炎症发生发展过程中发挥或拮抗或促进作用。清胃黄连丸对这些因子是否有影响，还有待进一步研究。

[1] 国家药典委员会.中国药典[M].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:444.

[2] 李宝红,吴君,邓妙丽,等.清胃黄连丸抗炎作用的实验研究[J].西北药学杂志,2011,26(3):192-193.

[3] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,1994:714.

[4] 李东晓,陈东辉,罗霞,等.鹿角菜胶所致小鼠胸膜炎模型[J].中药药理与临床,2000,16(5):46-47.

[5] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993:370-371.

[6] 唐秀能,黄建春,贺敏,等.月光花豆乙醇提取物对大鼠急性胸膜炎的作用及其机制的研究[J].北京中医药,2009,28(8):641-643.

[7] 吴洪福，耿排力.炎症细胞因子网络与疾病[J].青海医学院学报,2003,24(4):267.

(责任编辑：魏 晓)

Anti-inflammatory Effects of Qingwei Huanglian Pill on Rats With Acute Pleurisy

Wu Jun1, Han yun2，Li Baohong3*

(1.Shan Dong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264199,China；2.Binzhoiu Medical University Yantai 264003,China; 3. Pharmaceutical School of Guangdong Medical College，Dongguan 523808,China)

Objective:Studying effects of Qing wei Huanglian Pill on rats pleurisy induced by carrageenan. Methods:Pleurisy model was induced by injection of carrageenan 0.2mL1% into rat pleural.The anti-acute inflammation effects of Qingwei Huanglian Pill was evaluated by detection of pleural effusion volume，exudate leukocyte count，the contents of TNF-α and PGE2.Results:Qingwei Huanglian Pill significantly reduces the pleural effusion volume of rats with acute pleurisy，the white blood cell count of exudates and the contents of TNF-α and PGE2.Conclusion:Qingwei Huanglian Pill have a significant protective effect on rats with acute pleurisy induced by carrageenan.Mechanism of action may be related to lower levels of PGE2, TNF-α.

Qingwei Huanglian Pill；Carrageenateacute Pleurisy；PGE2；TNF-α

2014-05-04

吴君(1981-)，男，山东中医药高等专科学校讲师，研究方向为中药复方药理学。

李宝红(1968-)，男，广东医学院药学院副研究员，研究方向为药物载体与控制释放。

R561.1

A

1673-2197(2014)17-0008-02