药用真菌炭球菌生药学研究

常丽影,周 贤,李爱欣,王淑敏*，白俊武，于江波

(1．长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林敖东延边药业股份有限公司，吉林 敦化 133700)



药用真菌炭球菌生药学研究

常丽影1,周 贤1,李爱欣1,王淑敏1*，白俊武2，于江波2

(1．长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林敖东延边药业股份有限公司，吉林 敦化 133700)

目的：对吉林省药用真菌炭球菌进行生药学研究，为其药用开发提供鉴别依据。方法：采集炭球菌子实体，通过性状鉴别和孢子与菌丝显微特征观察，结合文献资料鉴定种类。利用薄层色谱建立炭球菌专属性薄层鉴别特征，利用高效液相色谱法测定其化学成分含量。结果： 经性状及显微特征研究，确定为药用真菌“炭球菌Daldiniaconcentrica(Bolt.∶Fr.) Ces. & dr Not.”。薄层鉴别研究发现具有多个专属性的薄层色谱斑点，并含有麦角甾醇成分。高效液相色谱法测定其麦角甾醇含量为0.16%。结论：通过炭球菌性状鉴别、光学显微镜和扫描电镜下孢子和菌丝特征、薄层鉴别图谱等，可综合鉴别炭球菌的真伪，为其鉴别提供了参考依据，麦角甾醇含量可作为其质量控制的指标之一。

炭球菌；生药学；药用真菌

炭球菌Daldiniaconcentrica(Bolt.∶ Fr.) Ces. & dr Not.别名炭球、黑轮炭球菌、黑轮层炭壳。隶属于炭角菌科Xylariaceae、炭球菌属Daldinia。该菌会引起树木木质腐朽，导致杨、柳、桦、椴、胡桃、杜鹃等多种树木和枯立木、倒木、木桩、木建筑用材木质腐朽，形成白色腐朽。此菌还常生长在栽培木耳、香菇的段木上，视为“杂菌”。 中国科学院昆明植物研究所刘开吉等[1]研究发现，从炭球菌中提取得到的化合物“炭球菌素”具有预防和治疗艾滋病的作用。河北大学生命科学学院罗都强等[2]研究发现，炭球菌中分离的3种化合物具有较强的抗真菌作用。因此，了解炭球菌特征可为今后其药用提供鉴别依据。

1 仪器与材料

XS-213型生物显微镜(石家庄显微镜艾迪科教设备有限公司)；XL 30 ESEM FEG Scanning Electron MicroscopeFEIcompany.。LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，麦角甾醇对照品购于中国食品药品检定研究院(批号：MUST-11070601)，甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)，水为超纯水(18.2ΩPa)，其它试剂均为分析纯。炭球菌采于吉林省德惠市杨树林带中，由长春中医药大学王淑敏教授鉴定。

2 实验方法

2.1 对照品溶液制备

精密称取麦角甾醇对照品2.50mg，置于5mL量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得(0.50mg/mL)。

2.2 供试品溶液制备

准确称取炭球菌样品1.000 7g ，置干燥具塞试管中，加入5mL甲醇，精密称定重量，超声提取30min，放至室温，称重，补加甲醇至原重量，滤过，取续滤液过0.45μm滤膜，即得供试品溶液，备用。

2.3 色谱条件[3-5]

汉邦ODS-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇，检测波长282nm，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL。理论塔板数以麦角甾醇峰计不得少于3 000。色谱见图1、图2。

图1 麦角甾醇对照品HPLC

图2 炭球菌样品HPLC

2.4 标准曲线建立

分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、14μL，注入液相色谱仪，测定吸收峰面积。以麦角甾醇质量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=130 328X-37 700，r=1，麦角甾醇在0.219 6～1.537 2μg范围内呈良好线性关系。

2.5 样品含量测定

分别精密吸取对照品和供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按色谱条件测定，即得。

3 结果

3.1 性状鉴别[6]

子实体较小, 半球形或近球形，直径1.5～5cm，高1～3.5cm，无柄或近无柄。表面初期土褐或紫褐色，后变褐黑至黑色。内部暗褐色，纤维状，有明显的同心环带。生于阔叶树腐木或树皮上，单生或成群生长在一起。见图3。

图3 子实体

3.2 显微鉴别

孢子淡黄色至灰褐色，呈不等边椭圆形、肾脏形或头盔形，11～16(17.8)μm×6～9(10.2)μm。光学显微镜表面纹饰呈网纹，扫描电镜照片显示呈多角形网状突起。孢丝较长，不分枝，壁厚，直径25μm～30μm，淡黄色。见图4、图5。

图4 菌丝及孢子(光学显微镜10×40)

图5 孢子(扫描电镜20 000×)

3.3 薄层鉴别[7]

取炭球菌1g，加二氯甲烷40mL，回流提取1h，滤过，滤液挥干，残渣加二氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。另取麦角甾醇对照品2mg，加入2mL二氯甲烷溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，置以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(7∶4∶0.3)为展开剂的展开缸内饱和20min，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，有如图6所示的专属性荧光斑点。喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并显示如图7所示的其它专属性斑点。

图6 炭球菌薄层色谱荧光

图7 炭球菌薄层色谱

3.4 样品中麦角甾醇含量

按“2.3”项下色谱条件测定，平行样品的吸收峰面积分别为263 297 、239 622，计算样品中麦角甾醇的平均含量为0.01%。

4 结论

通过炭球菌性状鉴别、光学显微镜和扫描电镜下孢子和菌丝特征、薄层鉴别图谱等，可综合鉴别炭球菌的真伪，为其鉴别提供了参考依据。薄层鉴别研究表明，炭球菌含有麦角甾醇成分，经高效液相色谱法测定，其含量为0.01%，可作为炭球菌质量控制的指标之一。在炭球菌的应用开发方面，可以利用现代生物技术，筛选优良的炭球菌菌株，通过发酵的方法生产菌丝体和发酵液，从菌丝体或发酵液中分离抗真菌和抗艾滋病病毒的有效物质，为开发新型农药和治疗艾滋病药提供原材料。

[1] 刘吉开，郑永唐，秦向东，等.炭球菌素及其制备方法和应用[P].中国专利：1238357，2006.

[2] 罗都强，唐宏亮，杨小龙，等.从子囊菌炭球菌中分离的活性成分L-696，44和CytochalasinD对植物病原真菌的活性[J].植物保护学报，2007,34(2)：113-122.

[3] 张方英，方保梅，张静．灵芝制品中麦角甾醇的检测方法[J]．江苏农学院学报，1997(19)：22.

[4] 张丽,王瑜杰,丁安伟. HPLC法测定灵芝孢子油中麦角甾醇的含量[J].江苏中医药，2009,41(6)：52-53.

[5] 谷学新，赵红帅，邹洪，等.高效液相色谱法测定功能性红曲米粉中的麦角甾醇[J].现代科学仪器，2006(1):78-79.

[6] 卯晓岚.中国大型真菌[M].郑州：河南科学技术出版社，2000：576.

[7] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010.

(责任编辑：宋勇刚)

Research Pharmacognostics on Medicinal FungiDaldiniaConcentrica

Chang Liying1,Zhou Xian1,Li Aixin1,Wang Shumin1*，Bai Junwu2，Yu Jiangbo2

(1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117, China；2.Jilin Aodong Yanbian pharmaceutical co.ltd , Jilin 133700, China)

Objective:Research pharmacognostics on medicinal fungiDaldiniaconcentricain JiLin province to provide a identifying basis for medicinal development.Methods:The sporophore of Daldinia concentrica was collected so that its species was identified by researching morphological and microscopic characteristics of spore and mycelium as well as literature. Use TLC to establishDaldiniaconcentricaspecific characteristics,determine chemical composition content by HPLC.Results:The collected Daldinia concentrica was identified as medicinal fungi Daldinia concentrica (Bolt. ∶ Fr.) Ces. & dr Not.through the study of characters and microscopic characteristics.Ergosterol and a plurality of specific TLC spots were found in TLC study .HPLC shows the content of ergosterol in Daldinia concentrica is 0.16%.Conclusion:Though the identification of characters,observing the characteristics of spore and mycelium by optical microscope and scanning electron microscope,and TLC atlas, reference can be provided for the identification ofDaldiniaconcentrica.The content of ergosterol can be selected as a quality control component in Daldinia concentrica.

DaldiniaConcentrica；Pharmacognostics

2014-05-07

常丽影(1967-)，女，长春中医药大学副教授，研究方向为中药炮制学。

王淑敏(1965-)，女，博士，长春中医药大学教授，博士生导师，研究方向为中药分析。E-mail: minshuw@sina.com.cn。

R93

A

1673-2197(2014)17-0021-03