GC-MS分析驴皮、 牛皮、 马皮的脂肪成分

胡晶红, 李 佳, 张永清

（山东中医药大学, 山东 济南 250355）

GC-MS分析驴皮、 牛皮、 马皮的脂肪成分

胡晶红, 李 佳, 张永清*

（山东中医药大学, 山东 济南 250355）

目的 比较驴皮、牛皮、马皮脂肪酸成分差异，为驴皮、牛皮、马皮的鉴别和驴皮的质量控制提供参考。方法采用石油醚回流提取脂肪酸， 氢氧化钾-甲醇酯化法将提取的脂肪酸甲酯化， GC-MS 分析脂肪酸成分。 结果 3 种样品中均含有饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、芳香羧酸、其他成分等，但是各类组分的具体成分和含有量存在差异。结论驴皮中主要以饱和脂肪酸为主， 主要由棕榈酸、 （E） -9-十八碳烯酸、 硬脂酸和 8-十八碳烯酸构成; 马皮和牛皮主要是由饱和及不饱和脂肪酸构成， 最大量不饱和脂肪酸均为 （E） -9-十八碳烯酸， 其余的大量成分马皮主要含 （ Z） -9-十六碳烯酸、 硬脂酸和十六酸， 而牛皮中主要含 9-十六碳烯酸、 对苯二甲酸和棕榈酸， 可作为区分驴皮与马皮和牛皮的参考依据。

驴皮; 脂肪酸;GC-MS

阿胶属于传统中药， 为马科动物驴 Equus asinus的皮经煎煮、 浓缩制成的固体胶［1］， 其味甘， 性平， 归肺、 肝、肾经，具有补血滋阴、润燥、止血等功效，为滋补上品，在 《神农本草经》、 《本草纲目》 等历代医籍中均有记载。现代药理研究表明，阿胶因具有升高红细胞、白细胞和血红蛋白的 作用而促进造血功能［2-6］; 另 外 具 有 止 血、 抗疲劳、抗休克、滋阴补肾、强筋健骨、利尿消肿及抗肿瘤和增强免疫力等功效［7-11］。

驴皮是加工生产阿胶的基本原料，驴皮的产量与质量直接决定着阿胶的产量与质量，而在阿胶企业的生产过程中，存在的普遍问题是驴皮没有详细、完整的质量标准，因此本课题组致力于驴皮质量控制的系列研究，为保证中药阿胶的质量提供原料的保障。在驴皮的质量控制中一个重要的问题是如何区分混伪品，如马皮、牛皮，甚至是一些混杂皮张。脂肪酸是动物组织的基本组成部分，本实验主要对驴皮、马皮及牛皮中的脂肪酸类进行分析比较，既可为驴皮、马皮及牛皮的鉴别提供参考，也可作为评价驴皮药材质量的重要指标，从而保证阿胶原料的来源纯正。目前还未见有关驴皮脂肪酸鉴别的相关报道。

1 材料和仪器

1.1 实验材料 驴、 马、 牛皮由山东东阿阿胶有限公司提供，经山东中医药大学张永清教授鉴定，确认为马科动物驴 Equusasinus、 马 Equus caballus和 牛 科 动 物 牛 Bos taurus的干燥皮。其中驴皮来自德州无棣乌驴养殖基地，系德州乌驴品种。

1.2 主要仪器 Agilent 7890A/5973N GC-MS 联用仪 （ 美国 Agilent公 司） ; 色谱柱 Agilent 19091N-213 HP-INNOWax Polyethylene Glyco， 30 m×320 μm×0.5 μm （ 美 国 Agilent公司）;SF-130 型高 速中药 粉碎机 （ 中 南制药机械 厂）; DGG-9000 恒温干 燥 箱 （ 合肥 赛 帆 试验设备有限公司）; NH-4 数显 4 孔恒温水浴 （ 成都贝斯达公司）;FA-1004 电子天平 （上海精科公司）。

1.3 主要试剂 石油醚， 氢氧化钾， 甲醇， 苯等有机溶剂均为国产分析纯。

2 实验方法

2.1 样品处理 为保证试验的可对照性， 分别取驴、 马、牛皮的皮张背部正中相同部位 20 cm×20 cm大小， 剪除并刮净表面的毛发，用去离子水将表皮的污垢清洗干净，于40℃恒温干燥箱中烘干至恒定质量。 剪碎皮张， 用粉碎机高速粉碎 5 min， 过 100 目筛。

2.2 脂肪酸提取 精密称取 “2.1” 项的皮张细粉 1 g左右， 石油醚 （60 ～90 ℃） 30 mL 60 ℃回流提取 2 h， 提取液挥干溶剂，备用。驴皮、牛皮和马皮的脂肪的提取率分别为 11.23%、 12.15%和 11.56%。

2.3 脂肪酸甲酯化 参照文献中报道的脂肪酸甲酯化的方法［12］， 采用氢氧化钾-甲醇室温酯化法。

称取 “2.2” 项中提取的脂肪 50 mg， 置于 10 mL量瓶内， 加入2 mL石油醚和苯的混合溶剂 （1 ∶1）， 轻轻摇动使之溶解。 再加入 2 mL 0.4 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液， 混匀。 在室温静置 30 min， 加蒸馏水使全部有机相甲酯溶液升至瓶颈上部。澄清后吸取上清液，所得上清液用于气相色谱分析。

2.4 GC-MS 分析

2.4.1 色谱条件 进样口温度， 程序升温， 100 ℃保持 3 min， 10 ℃ /m in 升到 240 ℃， 保持 20 min; 载气 He气体积流量 1.0 mL/min; 手动进样;10 μL注射器进样量 0.2 μL，分流比 5 ∶1， 分流体积流量 10 mL/min。

2.4.2 质谱条件 电子轰击 （EI） 离子源; 电子能量70 eV; 传输线温度 230 ℃; 离子源温度 170 ℃; 离子阱温度 150 ℃， 质量扫描范围 m/z30 ～800。

2.5 数据处理 对总离子流图中各峰经过质谱扫描后， 通过质谱数据系统 （ NIST和 Willey标准图谱数据库） 进行检索，并结合人工解析，鉴定出驴皮、马皮和牛皮脂肪成分，采用积分面积归一化的方法确定各组分的相对百分含有量，匹配度在 70 （满分是 100） 以上的组分才予以报道。

3 结果与分析

3.1 脂肪酸种类及其含有量 提取驴皮、 牛皮和马皮脂肪成分， 经过 GC-MS 分析， 获得各种脂肪酸种类及其含有量， GC-MS 离子流图分别见图 1 ～3， 含有量结果见表1～3。

图 1 德州无棣乌驴基地乌驴皮样品脂肪的 GC-M S离子流图

图 2 牛皮样品脂肪的 GC-MS离子流图

图 3 马皮样品脂肪的 GC-MS离子流图

表 1 ～3 结果显示， 从驴、 牛、 马皮中各获得 27、 36和 37 种成分， 驴皮中共获得 23 种脂肪酸类成分， 占全部检出组分的 85.19%， 其中饱和脂肪酸 17 种， 不饱和脂肪酸2种， 芳香羧酸4种; 在牛皮中共获得22种脂肪酸， 占全部检出组分的 63.89%， 其中饱和脂肪酸 12 种， 不饱和脂肪酸6 种， 5 种芳香羧酸; 从马皮中共获得29种脂肪酸，占全部检出组分的 78.38%， 其中饱和脂肪酸 18 种， 不饱和脂肪酸7种，4种芳香羧酸。另外驴、牛、马皮张中还分别含有 4、 13、 8 种其它成分， 分别占检出组分总数的14.81%、 36.11%和 21.62%， 这些组分主要是烷烃、 烯烃、酚、醛、酮及一些芳香类化合物。

表 1 驴皮脂肪 GC-MS成分分析

表 2 牛皮脂肪 GC-MS成分分析

续表2

表 3 马皮脂肪 GC-MS成分分析

续表3

3.2 不同动物皮脂肪酸类成分的类别分布 驴、 牛、 马皮中的成分在总脂肪酸中的种类百分数及含有量质量分数见表4。

表4 驴、 马、 牛皮中的各类脂肪成分数目和含有量

3.3 不同动物皮脂肪中的主要成分与特有成分分析 驴、马、 牛皮脂肪中占所有检出组分百分含有量超过2%的成分按照含有量高低顺序排列如下:①驴皮，棕榈酸25.00%;8-十八碳烯酸 16.65%; 硬脂酸 12.64%; （E） -9-十八碳烯酸 7.64%; （Z） -9-十六碳烯酸 6.48%; 二十四酸 4.53%;18-十九碳烯酸 3.11%; 二十二酸 2.99%; 十四 酸 2.39%;9-cis-11-trans-十 八 酸 2.04%。 ② 马 皮，（E） -9-十八碳烯酸 38.89%; 十六烷酸 22.09%; 硬脂酸9.34%; （ Z） -9-十 六 碳 烯 酸 7.61%; 十四酸 6.05%。③牛皮， （ E） -9-十八碳烯酸 28.88%; 棕榈酸 23.85%;对苯 二 甲 酸 11.34%;9-十 六 碳 烯 酸 8.16%; 硬 脂 酸3.96%; 十四酸 3.62%。 驴皮脂肪主要以饱和脂肪酸为主，主要由棕榈酸、 （E） -9-十八酸、 硬脂酸和 8-十八酸构成;马皮和牛皮最大量不饱和脂肪酸均为 （E） -9-十八碳烯酸，其余大量成分马皮主要含 （Z） -9-十六碳烯酸、 硬脂酸和十六烷酸， 而牛皮主要含 9-十六碳烯酸、 对苯二甲酸和棕榈酸，依此可将驴皮与马皮、牛皮区分开。

［ 1 ］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010 年版一部［S］.北京: 中国医药科技出版社， 2010:175-176.

［2］ 郑筱祥， 杨 勇，叶剑锋， 等.东阿阿胶的升白作用及机制研究 ［ J］.中国现 代应 用药学杂志， 2005， 22 （2）: 102-105.

［3］ 魏 东， 王 瑛，张 涛， 等.大剂量阿胶治疗晚期肿瘤化疗后血小板减少症的临床研究［J］.成都中医药大学学报， 2002， 25（1）:23-24.

［4］ 苏晓妹， 魏 东，张 涛， 等.阿胶对血虚证动物模型的作用［ J］ .中国药师， 2006， 9（7） :597-599.

［ 5 ］ 赵铁英， 陶贵源.张仲景运用阿胶治疗血证浅析［J］.中国中医基础医学杂志， 2010， 16（12）:1146-1147.

［6］ 吴宏忠， 杨 帆，崔书亚， 等.阿胶酶解成分对贫血小鼠造血系统的保护机制［J］.华东理工大学学报: 自然科学版， 2008， 34（1）:47-52.

［7］ 吴长虹， 王若光.阿胶的止血功效与硫酸皮肤素的关联性分析［ J］ .湖南中医药大学学报， 2010， 30（10） :9-11.

［ 8 ］ Wang D， Liu M， Cao J， et al.Effect of Colla Corii asini（ E' jiao） on D-galactose induced agingmice［ J］ .Biol Pharm Bull，2012， 35（12）:2128-2132.

［ 9 ］ Wu H， Yang F， Cui S， et al.Hematopoietic effect of fractions from the enzyme-digested Colla Corii asini on mice with 5-fluorouracil induced anemia［J］ .Am JChin Med， 2007， 35（5 ）: 853-866.

［10］ 栗 敏， 马洪宇， 沈继朵， 等.复方阿胶浆对 H22 肝癌荷瘤小鼠 5-FU化疗的增效减毒作用［J］.中国实验方剂学杂志， 2012， 18（20） :216-219.

［11］ 李 志， 陈壁锋， 黄俊明， 等.阿胶口服液对小鼠细胞免疫和体液免疫功能的影响［J］.中国卫生检验杂志， 2008， 18（7）:1426-1427+1437.

［12］ 寇秀颖， 于国萍.脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究［J］.食品研究与开发， 2005， 26（2）:46-47.

R284.1

:B

1001-1528（2014）12-2648-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.050

2013-12-23

山东省科技发展计划项目 （2008GG2NS02022）

胡晶红 （1974—）， 女， 讲师， 博士， 从事中药资源及其质量控制研究。 E-mail:hujinghong97@126.com

*通信作者: 张永清 （1962 —） ， 男， 教授， 博士生导师， 从事中药资源及其质量控制研究。 E-mail:zyq622003@126.com