生、 炙甘草对小鼠 CYP3As及对雷公藤内酯醇解毒的比较

刘星雨, 吴 娜, 张 娇, 吴 瑶, 罗 盼, 王伟男, 魏 渊

（江苏大学药学院, 江苏 镇江 212013）

生、 炙甘草对小鼠 CYP3As及对雷公藤内酯醇解毒的比较

刘星雨, 吴 娜, 张 娇, 吴 瑶, 罗 盼, 王伟男, 魏 渊*

（江苏大学药学院, 江苏 镇江 212013）

目的 研究生、 炙甘草对细胞色素 P450 酶系的调节作用和对雷公藤内酯醇解毒效果。 方法 分别使用生、 炙甘草水提液灌胃 C57BL/6 小鼠达 15 d， Western blot方法检测小鼠肝微粒体中 CYP3As和 CYPOR的水平。 同样水提液灌胃 C57BL/6 小鼠达 10 d， 观察小鼠脏器指数、 血液组织生化指标和病理切片对雷公藤内酯醇的解毒效果。 结果 与雷公藤内酯醇组相比， Western blot凝胶扫描半定量分析表明生甘草 （P＜0.01） 和炙甘草组 （ P＜0.05） 均可明显诱导小鼠肝脏 CYP3As。 血清和组织生化指标， 脏器指数和病理切片显示生、 炙甘草均可降低雷公藤内酯醇毒性， 显著缓解雷公藤内酯醇导致的睾丸萎缩 （P＜0.01）， 降低雷公藤内酯醇组小鼠肝、 肾和睾丸病变程度均有病理变化。 结论 生甘草对 CYP3As诱导和对雷公藤内酯醇的解毒作用比炙甘草显著。

生甘草; 炙甘草; 雷公藤内酯醇;CYP3As; 毒性; 解毒

甘草作为中国传统草药材，使用历史源远流长，根据中药配伍理论中甘草具有 “调和诸药，缓解药物毒性、烈性”的特点，因此大多数中药处方中都有甘草，故而有 “国老”、 “十方九草”的美誉。甘草分为生甘草和炙甘草两种，生甘草性味甘、平，能补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。其药性偏凉，主治泻火解毒、化痰止咳，用于痰热咳嗽，咽喉肿痛，痈阻疮毒，食物中毒及药物中毒。炙甘草性平偏温，主治补脾合胃、益气复脉，用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心动悸，脉结代。

细胞色素 CYP450 是体内内外源性化合物的 I相生物转化中最重要的酶系，在药物代谢和解毒作用方面具有重要作用。 其中 6 种重要的 CYP450 亚型:CYP3A4、 CYP2D6、 CYP2C9、 CYPlA2、CYP2C19、 CYP2EI参与了 90%的临床药物的代谢， 其中以 CYP3A4 代谢范围最为广泛， 约占药物代谢的 50%［1］。 近年来国内外有很多文献报道了中药如黄栀子［2］、 人参［3］和葛根［4］等或中药有效成分如水飞蓟素［5］等对细胞色素 P450 酶存在诱导或抑制作用。就甘草而言，已有文献报道甘草通过诱导肝药酶 CYP3A4、 CYP2B1、 CYP1A2 等起到解毒的作用［6］， 为甘草的解毒机制研究提供了新的思路。然而在实际应用中，究竟是生甘草还是炙甘草的诱导作用更为有效，还没有答案。本研究尝试使用分子生物学的方法给出明确解答，并使用雷公藤内酯醇作为模型药物来验证两者解毒效果的差异。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与设备 TY-80S 脱色摇床 （南京新校园生物技术研究所）;THZ-82B气浴恒温振荡器（江苏省金坛市医疗仪器厂）;HH-S2数显恒温水浴锅 （金坛市医疗仪器厂）;BSA124S 电子天平;赛多利斯科学仪器［（北京） 有限公司］;IKA磁力搅拌器 （ RCT basic） （ 德国 IKA）;FE20 PH计［梅 特 勒-托 利 多 仪 器 （ 上 海 ） 有 限 公 司 ］; DT100G&G精密电子天平 （上海丽度电子科技发展有限公司）;PICO17 离心机 （Thermo Fisher）; SK-1 快速混匀器 （江苏中大仪器厂）;CS-300V稳压电源仪 （英国 CLEAVER）; 电湿转印系统 （英国 CLEAVER）; 垂直电泳槽 （英国 CLEAVER）。

1.2 主要试剂 生、 炙甘草购买于安徽海鑫中药饮片有限公司， 合格证号皖 2010019，经江苏大学欧阳臻教授鉴定为为豆科植物光果甘草 Clycyrrhiza glabra L.的干燥根及 根 茎， 药材标本存放于江苏大学药学院生药标本室。雷公藤内酯醇（纯度大于 99%） 购买于 Chroma Dex。 兔抗小鼠CYP3As和 CYPOR抗 体 为 Santa Cruz公 司 产 品。辣根过氧化物酶标记山羊抗兔 IgG、 BCA蛋白浓度试 剂 盒、 BeyoECL Plus发 光 液、SDS-PAGE缓冲液、蛋白分子量标准、TEMED购买于碧云天生物 技 术 研 究 所。 谷 丙 转 氨 酶 （ alanine amin-otransferase， ALT）、 谷 草 转 氨 酶 （ glutamic-oxaloacetic transaminase， AST） 、尿 素 氮 （ blood ureanitrogen， BUN）、 还 原 型 谷 胱 甘 肽 （ glutathione，GSH） 和丙二醛 （ malondialdehyde， MDA） ELISA检测试剂盒均购买于南京建成生物工程研究所。其余为国药集团化学试剂有限公司生产的分析纯或生化级试剂。

1.3 药品的配制

1.3.1 生、 炙甘草药液制备 取生、 炙甘草等量药材， 加 10 倍量水， 浸泡 1 h，回流提取 3 次，第 1 次 1.5 h， 后 2 次 1 h， 合并 3 次滤液，减压浓缩至每毫升药液分别相当于 0.5 g生、 炙甘草生药。

1.3.2 雷公藤内酯醇注射液 精密称取雷公藤内酯醇充分溶解于吐温 80，再以氯化钠注射液稀释至所需浓度， 吐温 80 在终溶液中比例不超过 1%（V/V）， 4 ℃冰箱保存。

1.4 实验动物 本实验应用的 C57BL/6 小鼠购买于南京大学模式动物研究所， 合格证号:SCXK（苏） 2010-0001， 体质量 18 ～22 g， 雄性， 8 周大小。购买后在实验室适应性饲养一周后用于正式实验， 室温22 ～25 ℃， 相对湿度 65%，12 h 明暗交替照明，自由进食、饮水。

1.4.1 甘草灌胃实验 将 C57BL/6 小鼠分别完全随机分为4个实验组，每组3只，分别设为空白对照组，生甘草组、炙甘草组、苯巴比妥诱导组。给药期限为15 d， 给药方式为每 24 h 灌胃给药 1 次，剂量依次为: 空白对照组， 用 0.9%氯化钠注射液作空白对照，按体质量给予相当量的对照液;生甘草组和炙甘草组按 7.5 g/kg分别灌胃给药生甘草和炙甘草溶液; 苯巴比妥组， 按 5 g/kg， 灌胃给药苯巴比妥生理盐水溶液。末次给药后，隔天禁食12 h， 称定质量后用二氧化碳窒息法处死小鼠。

1.4.2 甘草灌胃对雷公藤内酯醇的解毒实验 将C57BL/6 小鼠完全随机分为 4 个实验组组， 每组10只， 分别设为空白对照组， 生甘草组、 炙甘草组、雷公藤内酯醇组。对生甘草组、炙甘草组每24 h灌胃给生甘草、 炙甘草 1 次，给药期限为10 d。随后生甘草组、 炙甘草组、 雷公藤内酯醇组每48 h腹腔注射给药雷公藤内酯醇 1 次， 同时生甘草组、 炙甘草组每48 h灌胃给生甘草、 炙甘草1次， 与雷公藤内酯醇注射每 24 h间隔。雷公藤内酯醇溶液剂量: 按 300 μg/kg（3/10 LD50） 腹腔注射。空白对照组、甘草给药剂量与处死方法同上。

1.5 观察指标和方法

1.5.1 Western blot测 定 肝 微 粒 体 中 CYP3As和CYPOR水平 甘草灌胃实验中小鼠于末次给药的次日二氧化碳窒息法处死，开腹后迅速摘除肝脏并用生理盐水清洗，滤纸吸干水分，剪碎肝组织并称重，加 入 50 mmol/L PBS 溶 液 （ 含 KCl 150 mmol/L，蔗糖250mmol/L， pH 7.5）， 制成 5% 组织匀浆。 匀浆液在 9 000 ×g 离心 20 min; 上清液100 000 ×g 超速离心 60 min， 得到肝微粒体沉淀。以上操作均在低温 （4℃）下进行。 于肝微粒体蛋白中加入 80 mmol/L PBS 溶液 （含 20%甘油， pH 7.5） 溶液悬浮， 贮藏于 -80 ℃冰箱中备用。

1.5.2 血清生化指标的测定 实验结束后， 将 4组小鼠每只小鼠以二氧化碳窒息法处死。心脏取血， 室温血液自然凝固 2 h， 离心 20 min （900 × g） 收集上清， 放于 -80 ℃保存直至分析。 测定血清 ALT、 AST、 MDA及 BUN， 分别用于了解肝功能、肾功能及睾丸功能。

1.5.3 组织中的生化指标的测定 处死后的小鼠，取其各脏器称定质量后， 将肝脏 （3/4）、 肾 （1/ 2）、 睾丸 （1/2） 冻于 -80 ℃冰箱中待用。 准确称取各组织的质量，按质量体积比加9倍的生理盐水制成 10%的匀浆， 900 ×g 离心 10 min， 取上清待测。 测定各组织中的 ALT、 AST、 MDA及 GSH值进一步了解各组织功能。

1.5.4 脏器指数的测定 实验结束后， 称取所有动物的体质量，并将肝脏、脾脏、肾及双侧睾丸称定质量，求脏器指数，计算公式如下:脏器比（%） = （个体脏器质量/个体质量） ×100。 观察药物对各脏器的影响，进行初步的毒性判断。

1.5.5 病理组织切片观察 实验结束后， 将各组织器官剔除脂肪组织及筋膜后称定质量后，取肝脏、 肾、 睾丸 3 个器官， 随即放入装有 10%中性福尔马林固定液的标本瓶中浸泡固定， 48 h后作病理组织学检查，常规取材，脱水，石蜡包埋，制片 （5 μm厚）， H&E染色， 光镜观察各个器官组织形态学变化及黏膜、黏膜下间质形态学的改变。

2 结果

2.1 生、 炙 甘 草 对 CYP3As的 诱 导 作 用 从Western blot结果 （图 1， 表 1 ～2） 可见， 生、 炙甘草对 CYP3As均有诱导作用， 但对 CYPOR （细胞色素 P450 氧化还原酶） 无明显作用。 对其进行凝胶扫描半定量分析可知生甘草对 CYP3As诱导明显， 炙甘草对 CYP3As诱导较明显， 两者均同 CYP3As强诱导剂苯巴比妥存在显著差别。 对于 CYPOR， 生甘草、 炙甘草和苯巴比妥无明显差别。

图 1 空白组、 生甘草组、 炙甘草组和苯巴比妥组 CYP3As和 CYPOR蛋白表达的 Western blot检测结果 （每孔10 μg）Fig.1 W estern blot results of CYP3As and CYPOR expressions in vehicle， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma，honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma.phenobarbital treatments（10 μg per punch）

表 1 ImageJ2x 扫 描 空 白 组、 生 甘 草 组 和 苯 巴 比 妥 组W estern blot检 测 结果的数 据 分析 （n=3，）Tab.1 W estern b lot results measured by ImageJ2x including vehicle， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and phenobarbital treatments（n=3，）

表 1 ImageJ2x 扫 描 空 白 组、 生 甘 草 组 和 苯 巴 比 妥 组W estern blot检 测 结果的数 据 分析 （n=3，）Tab.1 W estern b lot results measured by ImageJ2x including vehicle， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and phenobarbital treatments（n=3，）

注: 与空白对照组比较，**P＜0.01

CYP3As CYPOR空白组组别28.8 ±5.6 173.1 ±12.8生甘草组 53.2 ±3.3** 161.9 ±8.5苯巴比妥组 84.9 ±6.1**163.2 ±10.7

表 2 ImageJ2x 扫 描 空 白 组、 炙 甘 草 组 和 苯 巴 比 妥 组W estern blot检 测 结果的 数 据 分析 （n=3，）Tab.2 Western b lot resultsmeasured by ImageJ2x including vehicle， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and phenobarbital treatments（n=3，）

表 2 ImageJ2x 扫 描 空 白 组、 炙 甘 草 组 和 苯 巴 比 妥 组W estern blot检 测 结果的 数 据 分析 （n=3，）Tab.2 Western b lot resultsmeasured by ImageJ2x including vehicle， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and phenobarbital treatments（n=3，）

注: 与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

CYP3As CYPOR空白组组别42.5 ±7.6 140.7 ±20.1炙甘草组 66.4 ±3.4* 139.8 ±25.3苯巴比妥组 88.8 ±8.6**134.6 ±11.7

2.2 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠血清生化指标的影响 生、炙甘草同时雷公藤内酯醇给药对 C57BL/6 小 鼠 血 清 肝 功 能 指 标 ALT， AST，GSH， MDA和肾脏功能指标 BUN的影响， 见表 3。与溶剂对照组相比， 生甘草组除 BUN外均无显著差异; 炙甘草血清中的 ALT、 MDA有显著上升（P＜0.05）， BUN有极显著上升 （P＜0.01）; 雷公藤内酯醇组 ALT， AST有显著上升， MDA、BUN有极显著上升。说明雷公藤内酯醇给药已明显导致小鼠肝功能代谢受损，肾小球尿素氮滤过率降低，而生、炙甘草在一定程度上对这两个组织起到解毒保护作用，且生甘草强于炙甘草。

2.3 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠肝脏组织生化指标的影响 生、炙甘草同时雷公藤内酯醇给药对 C57BL/6 小鼠肝脏组织中 ALT、 AST、 GSH和 MDA的影响， 见表 4。与溶剂对照组相比， 生甘草组除 MDA外均有显著降低; 炙甘草组的 ALT、GSH有显著降低， AST有极显著降低; 雷公藤内酯醇组各指标均极显著降低。

表 3 生、 炙 甘 草 对雷公 藤 内酯醇给 药 小 鼠血清 ALT， AST， GSH， M DA及 BUN水 平的影响 （n=10，）Tab.3 E ffects of G lycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and trip tolide treatm ents on serum biochem ical parameters in the C57BL/6 m ice（n=10，）

表 3 生、 炙 甘 草 对雷公 藤 内酯醇给 药 小 鼠血清 ALT， AST， GSH， M DA及 BUN水 平的影响 （n=10，）Tab.3 E ffects of G lycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and trip tolide treatm ents on serum biochem ical parameters in the C57BL/6 m ice（n=10，）

注: 与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01; 与雷公藤内酯醇组相比，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 ALT/（ U·L-1） AST/（ U·L-1） GSH/（ μmol·L-1） MDA/（ nmol·m L-1） BUN/（ mmol·L-1）27.5 ±3.8 24.2 ±8.3 24.8 ±3.1 7.2 ±0.4 6.1 ±0.2生甘草 +雷公藤内酯醇组 31.6 ±5.3 27.7 ±3.7 33.8 ±6.8 7.4 ±1.5# 6.8 ±0.3*##炙甘草 +雷公藤内酯醇组 36.5 ±4.0* 31.2 ±7.0 34.8 ±6.1 8.1 ±0.2*# 8.2 ±0.5**##雷公藤内酯醇组 42.1 ±6.4* 34.2 ±3.6* 44.8 ±9.6* 9.9 ±1.0** 11.3 ±1.3空白组**

表 4 生、 炙 甘 草对雷公 藤 内酯醇给 药 小鼠肝脏 组 织 ALT， AST， GSH及 M DA水 平的影响 （n=10，）Tab.4 E ffects of G lycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and triptolide treatmentson liver homogenates in the C57BL/6 m ice（ n=10，）

表 4 生、 炙 甘 草对雷公 藤 内酯醇给 药 小鼠肝脏 组 织 ALT， AST， GSH及 M DA水 平的影响 （n=10，）Tab.4 E ffects of G lycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and triptolide treatmentson liver homogenates in the C57BL/6 m ice（ n=10，）

注: 与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01; 与雷公藤内酯醇组相比，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 ALT/（ U·L-1） AST/（ U·L-1） GSH/（ μmol·g prot-1） MDA/（ nmol·mg prot-1）50.5 ±0.9 74.2 ±5.8 15.2 ±1.7 6.0 ±0.4生甘草 +雷公藤内酯醇组 46.5 ±2.3*## 62.9 ±3.5*# 12.1 ±1.5* 6.0 ±0.2##炙甘草 +雷公藤内酯醇组 46.0 ±5.3*# 57.1 ±1.7** 11.7 ±2.1* 6.3 ±1.5#雷公藤内酯醇组 41.2 ±0.9** 55.1 ±4.4** 10.8 ±1.4* 7.5 ±0.2空白组**

2.4 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠肾脏、睾丸生化指标的影响 生、炙甘草同时雷公藤内酯醇给药对 C57BL/6 小鼠肾、 睾丸功能指标 GSH、MDA的影响见表 5。 与溶剂对照组相比， 生甘草组均无显著差异; 炙甘草组仅睾丸组织中 GSH有极显著降低; 雷公藤内酯醇组肾脏组织中 GSH有显著降低，睾丸组织中两者均极显著减低。

2.5 脏器指数的比较 雷公藤内酯醇亚慢性中毒及通过生、炙甘草解毒对 C57BL/6 小鼠各脏器指数的影响， 见表6。雷公藤内酯醇组睾丸有极显著萎缩，且脾脏极显著增大。生、炙甘草组与溶剂对照组相比，睾丸有显著性萎缩，但萎缩程度显著小于雷公藤内酯醇组，脾脏相对溶剂组未有明显变化。

表 5 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠肾脏、 睾丸 GSH及 MDA水平的影响 （n=10，）Tab.5 Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and trip tolide treatments on kidney and testis homogenates in the C57BL/6 m ice（ n=10，）

表 5 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠肾脏、 睾丸 GSH及 MDA水平的影响 （n=10，）Tab.5 Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and trip tolide treatments on kidney and testis homogenates in the C57BL/6 m ice（ n=10，）

注: 与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01; 与雷公藤内酯醇组相比，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 （GSH/肾脏） /（ μmol·g prot-1）（MDA/肾脏）/（ nmol·mg prot-1）（GSH/睾丸） /（ μmol·g prot-1）（MDA/睾丸） /（ nmol·mg prot-1）16.9 ±2.6 2.6 ±0.8 8.7 ±0.8 3.5 ±0.4生甘草 +雷公藤内酯醇组 14.5 ±2.4## 2.8 ±0.5 7.6 ±0.4 3.3 ±0.8#炙甘草 +雷公藤内酯醇组 17.8 ±0.2 2.2 ±0.4 6.6 ±0.8** 3.3 ±1.3雷公藤内酯醇组 19.4 ±1.3* 2.4 ±0.5 6.4 ±0.9** 4.2 ±0.1空白组**

表6 生、炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠各脏器指数的影响Tab.6 Viscera index of the C57BL/6m ice adm inistered with Glycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and trip tolide by intraperitoneal or intragastic injection for 50 days

2.6 病理组织切片观察 在光学显微镜下观察各组织病理切片，可见雷公藤内酯醇给药组小鼠的肝细胞发生水变性，细胞呈气球样，汇管区慢性炎伴纤维结缔组织增生，周围小胆管增生，结合肝脏组织生化指标来看， 肝脏可能产生慢性炎症 （见图2）。 而雷公藤内酯醇组小鼠睾丸组织也发生了明显的病理变化，与正常组相比小鼠睾丸组织生精小管中原本可见的大量椭圆形精子仅残余部分，睾丸间质细胞受损， 显示出局灶性生精小管萎缩 （见图 3）。 雷公藤内酯醇组小鼠肾组织中被大量炎性细胞浸润， 肾小球病变梗死 （见图 4）。 生、 炙甘草组对两组织病理变化均有一定程度上的症状缓解，且生甘草缓解程度强于炙甘草。

3 讨论

图2 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠肝脏组织病理学检查 （ ×100）Fig.2 M icrograph of livers from a C57BL/6 rat treated w ith vehicle（ A）， G lycyrrhizae Radix et Rhizoma &triptolide（ B） ， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma&triptolide（ C） and 300 μg/kg triptolide（ D） （ ×100）

图3 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠睾丸组织病理学检查 （ ×100）Fig.3 M icrograph of testis from a C57BL/6 rat treated with vehicle（ A） ， Glycyrrhizae Radix etRhizoma& triptolide（ B） ， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma&triptolide（ C） and 300 μg/kg triptolide（D） （ ×100）

图4 生、 炙甘草对雷公藤内酯醇给药小鼠肾脏组织病理学检查 （ ×100）Fig.4 M icrograph of kidney from a C57BL/6 rat treated w ith vehicle（ A） ， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma& triptolide（ B） ， honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma&triptolide（ C） and 300 μg/kg triptolide（D） （ ×100）

甘草是中药配伍方剂中最常用的解毒中草药，本实验通过采用标准自交系 C57BL/6 小鼠研究生、炙甘草对肝微粒体中 CYP3As的影响。 研究结果可见生甘草对 CYP3As的诱导效应要强于炙甘草， 此结果第一次直接在分子水平上比较了生、炙甘草对CYP3As的诱导作用。 本实验中的 Western blot无法使 用 β-Actin， Tubulin， GAPDH 等 常 见 细 胞 内参，因为提取肝微粒体的过程中使得细胞破裂，胞质内的其他细胞器和蛋白等丢失导致没有合适的物质作为内参。 不过在微粒体中 CYPOR （细胞色素P450 氧化还原酶） 表达均一， 不易受药物影响，实验结果亦显示4 组样本中 CYPOR没有显著差异，侧面了反映实验精度高，均一性和可重复性好。

实验采用雷公藤内酯醇作为模型药物比较生甘草和炙甘草的解毒效果。雷公藤内酯醇是卫矛科属植物雷公藤的主要有效成分，药理和临床试验表明其具有抗肿瘤、 免疫抑制、抗炎［7］及抗生育［8］等生物活性。雷公藤内酯醇具有较强的毒性，临床不良反应的发生频率高达 45%［9］。 其不良反应主要发生在消化系统、泌尿系统、生殖系统、心血管系统、骨髓及血液系统，此外还可引起水肿、血糖升高、 复视等［10］。 报道已证实在人类和大鼠中肝脏CYP3As是导致雷公藤内酯醇羟化的主要 P450酶［11］， 大鼠中 CYP3As的表达量与其对的雷公藤内酯醇解 毒 效果 正 相 关［12-13］。本 实 验 结果 已 初 步揭示生、 炙两种甘草能够诱导 CYP3As表达， 因此选用雷公藤内酯醇作为比较两者解毒效果的药物。

生、炙甘草与雷公藤内酯醇同步给药对C57BL/6 小鼠血清中生化指标的影响结果和病理组织切片观察也可以看出两种甘草均能在一定程度上中和雷公藤内酯醇毒性。与刘良等通过昆明种小鼠研究雷公藤内酯醇毒性［14］相比， 本实验发现雷公藤内酯醇亚慢性中毒除了对 C57BL/6 小鼠睾丸、肝脏、肾脏各有损伤外，还导致小鼠脾脏肿大，该区别可能系品种差异导致。本研究结果与吴娜等人均采用同一品系小鼠［15］相比，除肝脏损伤明显可能缘由给药时间增长、剂量加大以外其余均一致。本实验结果证明生甘草对雷公藤内酯醇的解毒效果明显由于炙甘草，在一定程度上解释了传统中医理论中生甘草偏重于泻火解毒、化痰止咳等作用，而炙甘草侧重补脾和胃，益气复脉等作用，为生、炙甘草的临床用药提供了新的参考依据。

［ 1 ］ Guengerich FP.Reaction and significance of cytochrome P-450 enzymes［ J］ .JBiol Chem， 1991， 266（16 ）:l0019-22.

［ 2 ］ Kim H J， Chun Y J， Park ， et al.Protection of rat livermicrosomes against carbontetrachloride-induced lipid peroxidatian by red ginseng saponin through cyrochrome P450inhibition ［ J］ . Planta Med， 1997， 63（5） :415-418.

［ 3 ］ Chang T K， Chen J， Benetton SA.In vitro effect of standardized ginseng extracts and individualgingsanosides on the catalytic activity of human CYP1A1， CYPlA2， andCYPlB1 ［ J］. Drug Metab Dispos， 2002， 30（4）:378-384.

［ 4 ］ Kang J J， Wang H W， Liu T Y ， et al.Modulation of cyro-chrome P-450-dependentmonooxygenases， glutathione and glutatbione S-mmgferase in rat liver by oenposide from Cardenia jasminoldes［ J］ .Food Chem Toxicol， 1997， 35 （ 10/11 ） : 957-965.

［ 5 ］ Guerra M C， Speroni E， Broccoli M ， et al.Comparison between Chinesemedical herb Pueraria lobata crude extract and itsmain isoflavone puerarin antioxidant properties and effecton rat liver CYP-catalysed drugmetabolism［ J］ .Life Sci， 2000，67（24）:2997-3006.

［ 6 ］ PaoliniM ， Pozzetti L， Sapone， etal.Effect of licorice and glycyrrhizin on murine liver CYP-dependent monooxygenases［J］ .Life Sci， 1998， 62（6） :571-82.

［ 7 ］ 夏志林， 郑幼兰.雷公藤内酯醇的药理和临床研究［J］.中国药理学通报， 1992， 8（6）:427-431.

［ 8 ］ Lue Y， Sinha Hikim AP， Wang C， etal.Triptolide:a potentialmale contraceptive［J］ .JAndrol， 1998， 19（4）:479-86.

［ 9 ］ Jiang M.Pharmacologicaland clinical study on polyglycoside of T ripterygium wilfordii Hook f［ J］ .Chin Med J（ Taipei） ， 1996， 57（4）:S35.

［10］ 梅之南， 杨祥良， 徐辉碧.雷公藤内酯醇的药理研究［J］.中国医院药学杂志， 2003， 23（9）:557-558.

［11］ LiW， Liu Y， He YQ， etal.Characterization of triptolide hydroxylation by cytochrome P450 in human and rat liver microsomes［ J］ .Xenobiotica ， 2008 ， 38（12） :1551-1565.

［12］ Ye X， LiW， Yan Y， etal.Effects of cytochrome P4503A inducer dexamethasone on themetabolism and toxicity of triptolide in rat［ J］.Toxicol Lett， 2010 ， 192（2） :212-20.

［13］ Liu L， Jiang Z， Liu ， etal.Sex differences in subacute toxicity and hepatic microsomal metabolism of triptolide in rats［ J］. Toxicology， 2010， 271（1/2） :57-63.

［14］ 刘 良， 王战勇， 黄光照， 等.雷公藤甲素亚慢性中毒对昆明种小鼠肾脏及睾丸的影响［J］.同济医科大学学报，2001， 30（3）:214-217.

［15］ 吴 娜， 刘星雨， 王笃军， 等.雷公藤内酯醇对 C57BL/6小鼠亚慢性毒性作用的研究［J］.中成药， 2014， 36（5）: 904-908.

Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and honey-fried Glycyrrhizae Radix et Rhizoma on m ouse liver CYP3As and detoxification of triptolide

LIU Xing-yu， WU Na， ZHANG Jiao， WU Yao， LUO Pan， WANGWei-nan， WEIYuan*

（ School of Pharmacy， Jiangsu University， Zhenjiang 212013， China）

ABSTRACT:AIM To study the effects of Clycyrrhizae Radix et Rhizoma and honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma on the induction ofmouse liver CYP3As and their detoxification of triptolide.METHODS The aqueous extracts of Clycyrrhizae Radix et Rhizoma and honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma were administrated to C57BL/6 mice by gastric gavage for 15 days， respectively.The expression ofmouse liver CYP3As and CYPOR were studied using Western blot.The detoxification of triptolide with Clycyrrhizae Radix et Rhizoma， honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma aqueousextracts for ten dayswere observed with regular approaches including viscera index，histopathologymethods，and biochemical indexes in blood and tissues.RESULTS The Western blot results showed thatmouse liver CYP3Aswere significantly induced in both Clycyrrhizae Radix et Rhizoma group （P＜0.01 ） and honey-fried group （ P＜0.05） as compared with triptolide group.The biochemical indexes in mouse serum and tissues showed that both Clycyrrhizae Radix et Rhizoma and honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma could relief the toxicity of triptolide.Viscera index， the histopathological analysis and pathological examination indicated thatboth Clycyrrhizae Radix et Rhizoma and honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma could markedly alleviate the testicular atrophy caused by triptolid （ P＜0.01） and reduce the pathological changes.CONCLUSION Clycyrrhizae Radix et Rhizoma is better than honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma in inducing CYP3As and detoxification of triptolide.

Clycyrrhizae Radix et Rhizoma;honey-fried Clycyrrhizae Radix et Rhizoma;triptolide;CYP3As; toxicity;detoxification

R285.5

:A

1001-1528（2014）12-2451-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.002

2013-11-08

国家自然科学基金青年项目（81102522）; 江苏省自然科学基金项目 （BK2011473）

刘星雨 （1990—）， 女， 硕 士 生， 研 究 方 向: 中药药理毒 理， 药物基因组学。 Tel: （ 0576 ） 88827187， E-mail:liuxingyu. 0406@163.com

*通信作者: 魏 渊 （1981—）， 男， 博士， 副教授， 研究方向: 细胞色素 P450 酶系相关的药物代谢与毒理， 药物基因组学。 Tel:（0511） 88791526 ， E-mail:ywei@ujs.edu.cn