5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黄酮的镇痛抗炎作用研究

2014-04-12易荆丽赵永恒周毅生林丽微

中成药 2014年12期

关键词：龙须冰醋酸热板

易荆丽, 赵永恒, 周毅生, 王嵩, 林丽微

（广东药学院中药学院, 广东广州 510006）

5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黄酮的镇痛抗炎作用研究

易荆丽, 赵永恒, 周毅生*, 王嵩, 林丽微

（广东药学院中药学院, 广东广州 510006）

目的研究 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮的镇痛抗炎作用。方法本实验采用热板法和冰醋酸扭体法观察镇痛作用，采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法和冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高法观察抗炎作用。结果 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮中、高剂量组均能明显延迟小鼠舔后足时间（P＜0.05），并能减少冰醋酸引起的小鼠扭体反应，抑制率分别为 50.94%、 64.55%; 且该化合物中、高剂量组对冰醋酸诱发小鼠腹腔毛血管通透性增高的抑制率分别为38.81%、 49.70%; 对二甲苯诱发的小鼠耳廓肿胀有明显的抑制率分别为 45.00%、 65.27%。结论 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮不具有物理及化学刺激具有镇痛作用，对急性炎症有明显抑制作用。

5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮; 镇痛; 抗炎

5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮是从豆科苏木亚科羊蹄甲属植物龙须藤 Bauhinia championii（ Benth.） Benth.的干燥藤茎中提取分离出的化合物。龙须藤又称为过岗圆龙、九龙藤、羊蹄藤、梅花入骨丹等，味甘、微苦，性温，具有祛风除湿、行气活血的功效［1］，主治风湿痹痛，中风瘫痪，胃脘胀痛，跌打损伤，小儿疳积等症［2］。该药在我国多个少数民族有悠久的用药历史［3］。目前国内外对龙须藤的研究主要集中在化学成分方面［4-7］，关于龙须藤的药效研究鲜见报道，已有的药效研究主要是用龙须藤的提取物来完成的［8-10］。本课题旨在考察从龙须藤中分离得到的高纯度 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮在镇痛抗炎方面的作用，为龙须藤的进一步研究提供理论依据。

1 材料

1.1 实验动物清洁级昆明小鼠，体质量 18 ～22 g，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号为 scxk （粤）2008-0020。动物的喂养条件: 清洁通风环境，相对湿度（50 ±5）%，室温（23 ±1） ℃，光照周期为 12 h。

1.2 药品与试剂 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮（按文献所述方法［11］制备龙须藤乙酸乙酯浸膏，将得到的浸膏进行反复硅胶、凝胶柱层析，得到目标化合物结晶并进行1H-NMR、13C-NMR、 IR鉴定），纯度 96%以上，临用时以10%丙二醇生理盐水溶解。罗通定片（四川康福来药业集团有限公司，批号 110501）; 吲哚美辛（临汾奇林药业有限公司，批号 1307111）; 生理盐水（东莞市普济药业有限公司，批号 12022902）; 伊文斯蓝（国药集团化学试剂有限公司生产，批号 WC201109010），冰醋酸、二甲苯等试剂均为分析纯。

1.3 仪器 UV-2450 紫外可见分光光度计（日本岛津）; AY120 电子天平（日本岛津）; 打孔器;501 型超级恒温水浴（金坛市宏华仪器厂制造）。

2 方法与结果

2.1 镇痛作用

2.1.1 小鼠热板法致痛试验取健康雌性小鼠于（55 ± 0.5）℃热板上，选取不跳跃、 5 ～30 s内舔后足的小鼠 50只，随机分为空白对照组（10%丙二醇生理盐水）、阳性对照组（剂量以罗通定计算， 0.04 g/kg）、 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮低、中、高（剂量以 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮计算， 0.04、 0.08、 0.16 g/kg） 3 个剂量组共 5 组，每组10 只。重复2次测其正常痛阈值，并以平均值作为该鼠给药前痛阈值。各组小鼠均灌胃给药3 d，每天1次，给药剂量 20 mL/kg，末次给药 30、 60、 90、 120 min 后分别测小鼠痛阈值。结果如表1所示，与空白对照组比较，中、高剂量组均能显著抑制热板刺激诱导的小鼠疼痛反应，且中剂量组持续时间长。表现为痛阈值升高，与空白对照组、给药前比较均有统计学意义（P＜0.05）。

2.1.2 对冰醋酸诱发的小鼠扭体反应的影响取健康小鼠50 只，雌雄各半，分组情况及给药方法同 “2.1.1” 项。于末次给药 30 min 后，每只小鼠均腹腔注射 0.6%冰醋酸（10 mL/kg）。立即观察并记录注射冰醋酸 20 min 内各组小鼠出现扭体（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的次数，并计算各药抑制率［13］。结果如表 2 所示， 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮中、高剂量组对冰醋酸引起的小鼠扭体反应均有明显的抑制作用，与空白对照组比较有统计学意义（P＜0.05），表明 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮对醋酸引起的疼痛有一定的镇痛作用。

表 1 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黄酮对小鼠热板法致痛的影响（， n=10）

注:与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01;与给药前痛阈值比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

给药后不同时间痛阈值/s 30min 60 min 90 min 120 min空白对照组 ——组别剂量/（g·kg-1）给药前痛阈值/ s 21.07 ±2.80 22.43 ±5.69 18.58 ±4.47 21.15 ±6.38 18.18 ±5.22低剂量组 0.04 22.32 ±2.87 22.80 ±4.76 24.33 ±5.03 21.50 ±5.53 16.38 ±3.88中剂量组 0.08 21.15 ±2.27 31.30 ±6.92 35.02 ±5.70**△ 34.70 ±5.13*△ 32.83 ±6.70*△高剂量组 0.16 22.88 ±2.31 31.95 ±6.39*△ 36.38 ±6.70**△△ 36.78 ±7.88**△△ 30.28 ±7.88罗通定组 0.04 20.15 ±2.37 36.42 ±7.11**△△ 32.13 ±5.50**△26.55 ±4.30 28.55 ±6.20

表 2 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黄酮对冰醋酸致小鼠疼痛的影响（，n=10）

注:与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别剂量 /（ g·kg-1）扭体次数 /次抑制率 /%空白对照组 —— 28.21 ±4.81——低剂量组 0.04 20.80 ±5.13 26.27中剂量组 0.08 13.84 ±3.29* 50.94高剂量组 0.16 10.00 ±3.17** 64.55罗通定组 0.04 8.13 ±2.1**71.18

2.2 抗炎作用

2.2.1 对二甲苯诱导小鼠耳肿胀的影响取健康小鼠 50只，雌雄各半，随机分为空白对照组（10%丙二醇生理盐水）、阳性对照组（剂量以吲哚美辛计算，0.007 5 g/kg）、5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮低、中、高（剂量以 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮计算，分别为 0.04、0.08、0.16 g/kg）3 个剂量组共 5 组，每组 10 只。阳性药物仅第 3 天给药，其余各组均连续给药 3 d，每日 1 次，末次给药 60 min 后，在小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯 20 μL/只致炎，左耳不涂作为正常耳，30 min 后脱颈椎处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径 9 mm的打孔器在左右耳相同位置打下圆耳片，称量左右耳的质量并计算其差值（肿胀度）及抑制率［14］。结果如表 3 所示，5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮中、高剂量组及阳性对照组均能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀率，与空白对照组比较有统计学意义（P＜0.05），表明 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮可对抗二甲苯所致的急性炎症反应，具有抗炎作用。

表 3 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黄酮对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（，n=10）

注: 与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别剂量 /（ g·kg-1）肿胀度 /mg 抑制率 /%空白对照组 —— 9.30 ±2.60——低剂量组 0.04 7.53 ±2.46 19.00中剂量组 0.08 5.12 ±1.31* 45.00高剂量组 0.16 3.23 ±0.90* 65.27吲哚美辛组 0.007 5 2.30 ±0.80**75.27

2.2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性的测定取健康小鼠 50只，雌雄各半，分组情况及给药方法同 “2.2.1” 项，于末次给药 1 h 后，尾静脉注射 0.5%伊文斯蓝生理盐水溶液10mL/kg， 5min 后腹腔注射 0.6%冰醋酸生理盐水溶液 10 mL/kg， 20 min 后脱颈椎处死小鼠，剖腹，用 6 m L生理盐水分数次冲洗腹腔，收集冲洗液于10 mL离心管中，离心，取上清液，用 UV-2450 紫外可见分光光度计于波长 590 nm处测定吸光度［15］。结果如表 4 所示，与空白对照组比较，5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮中高剂量组能显著降低冰醋酸所引起的小鼠腹腔毛细血管通透性升高（P＜0.05），显示了 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮具有较好的抗炎效果。

表 4 5，7，3'，4'，5'-五甲氧基黄酮对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（， n=10）

注: 与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别剂量 /（ g·kg-1） A 抑制率 /%空白对照组 —— 0.505 ±0.18——低剂量组 0.04 0.324 ±0.13* 35.91中剂量组 0.08 0.309 ±0.15* 38.81高剂量组 0.16 0.254 ±0.16** 49.70吲哚美辛组 0.0075 0.227 ±0.13**55.05

3 讨论

本实验采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法及冰醋酸致小鼠毛细血管通透性增高两种急性炎症模型观察了 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮对急性炎症的实验性渗出、肿胀的影响，并采用热板法及冰醋酸扭体法观察 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮对疼痛的抑制作用。

结果表明， 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮可抑制炎症早期的水肿与渗出，同时对化学物质引起的小鼠扭体反应及热板法致痛反应也有较好的抑制作用。本实验为开发 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮化合物的临床应用提供了药理学实验依据。

风湿性关节炎是一种常见的急性或慢性结蹄组织炎症，临床以关节和肌肉游走性酸楚、疼痛为特征，属变态反应性疾病。炎症因子在风湿性关节炎的发生发展过程中发挥关键作用，因此 5，7，3′，4′，5′-五甲氧基黄酮的镇痛抗炎的作用机制——能否抑制炎症因子（如前列腺素、白三烯等）的产生，阻断或抑制由它们所介导和激发的炎症过程，是否为龙须藤药材中治疗风湿性关节炎的主要有效成分还有待进一步研究。

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