高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量

华方波　张秀丽

[摘要] 目的 用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。 方法 色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为28℃。 结果 毛蕊花糖苷进样量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）线性范围内线性关系良好，平均回收率为99.68%，RSD=0.8%（n=6）。 结论 高效液相色谱法方法准确，重复性好，可用于养阴清肺口服液的质量控制。

[关键词] 养阴清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色谱法

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0015-03

养阴清肺口服液收载于原卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，由地黄、麦冬、白芍、薄荷脑等8味药制备而成的口服液，具有养阴清肺、清肺利咽之功效，用于阴虚肺热，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中带血[1-10]。由于原标准没有对其主药进行质量控制，本研究采用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中主药地黄的毛蕊花糖苷含量，结果满意。

1 仪器与试药

岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器，LC solution色谱工作站），毛蕊花糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111530-201208）；养阴清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：2150006，2150007，2150010），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温28℃，进样量为20 μl。理论板数按毛蕊花糖苷计算不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取毛蕊花糖苷对照品适量于100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得10.12 μg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品10 ml，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流提取1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转至5 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液经0.45 μm滤膜滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方及工艺制备不含地黄的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 阴性干扰试验 取“2.2，2.3，2.4”项下3种溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果色谱图中在毛蕊花糖苷峰相应的保留时间附近未检出干扰峰（图1）。

2.5.2 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=178 58X-5417，r=0.9995。结果表明，毛蕊花糖苷对照品进样量的线性范围是10.12～253.00 μg。

2.5.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样6次，测定峰面积。结果毛蕊花糖苷峰面积的RSD为0.78%，说明仪器的精密度良好。

2.5.4 重现性试验 取同一批供试品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号为2150010）样品5份，分别依法处理后测定。结果毛蕊花糖苷含量的RSD为1.22%，说明该方法重复性良好。

2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号为2150010）20 μl，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12 h时注入液相色谱仪，测定峰面积。结果RSD为0.78%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.5.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品（批号2150010，毛蕊花糖苷含量为16.73 μg/ ml）6份，每份5 ml，分别精密加入毛蕊花糖苷对照品适量，按供试品溶液方法制备，依法测定含量并计算回收率（表1）。

表1 回收率试验结果

2.5.7 样品含量测定 精密吸取对照品及供试品溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算，结果3批样品（批号分别为2150010， 2150006，2150007）中的含量分别为16.73、14.92、15.37 μg/ml。

3 讨论

本文对养阴清肺口服液中主药地黄的主要有效成分毛蕊花糖苷建立了含量测定方法，结果可靠，对改进养阴清肺口服液的质量标准有一定意义。

在供试品溶液制备过程中，为了保证样品中毛蕊花糖苷的充分提取，用甲醇对样品进行回流提取1、1.5、2 h，结果显示回流提取1.5 h效果最佳。

将流动相乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%醋酸溶液（16∶84）进行试验，结果显示，乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）分离效果最好。

由毛蕊花糖苷对照品溶液，在200～400 nm范围内进行扫描，结果在波长334 nm处有最大吸收，所以334 nm作为测定波长。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：115.

[2] 周福成.高效液相色谱图集[M].沈阳：辽宁科学技术出版社，2011：76.

[3] 莫迎.裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量测定[J].医药导报，2012，31（2）：245-247.

[4] 朱振兴，段红福.高效液相色谱法测定地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的含量[J].中医学报，2013，28（7）：1023-1024.

[5] 吴竞妮.高效液相色谱法测定消郁舒心胶囊中毛蕊花糖苷含量[J].内蒙古中医药，2013，32（11）：50-51.

[6] 邱广仁，赵向阳.HPLC法测定咳嗽枇杷糖浆中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷[J].安微医药，2013，17（4）：573-574.

[7] 樊琪.左归丸中毛蕊花糖苷含量测定[J].中国科技纵横，2012，（6）：254.

[8] 张贵财，朱旭江，杜兴，等.HPLC法测定兰州肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量[J].中国药事，2010，24（8）：801-803.

[9] 张岩.高效液相色谱法测定宽肠理气汤中松果菊苷和毛蕊花糖苷[J].中草药，2010，41（12）：1994-1995.

[10] 邱倬星，熊学敏，胡晓艳，等.车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的含量测定[J].中国医药科学，2013，3（5）：41-43.

（收稿日期：2013-12-04 本文编辑：郭静娟）

[摘要] 目的 用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。 方法 色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为28℃。 结果 毛蕊花糖苷进样量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）线性范围内线性关系良好，平均回收率为99.68%，RSD=0.8%（n=6）。 结论 高效液相色谱法方法准确，重复性好，可用于养阴清肺口服液的质量控制。

[关键词] 养阴清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色谱法

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0015-03

养阴清肺口服液收载于原卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，由地黄、麦冬、白芍、薄荷脑等8味药制备而成的口服液，具有养阴清肺、清肺利咽之功效，用于阴虚肺热，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中带血[1-10]。由于原标准没有对其主药进行质量控制，本研究采用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中主药地黄的毛蕊花糖苷含量，结果满意。

1 仪器与试药

岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器，LC solution色谱工作站），毛蕊花糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111530-201208）；养阴清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：2150006，2150007，2150010），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温28℃，进样量为20 μl。理论板数按毛蕊花糖苷计算不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取毛蕊花糖苷对照品适量于100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得10.12 μg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品10 ml，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流提取1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转至5 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液经0.45 μm滤膜滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方及工艺制备不含地黄的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 阴性干扰试验 取“2.2，2.3，2.4”项下3种溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果色谱图中在毛蕊花糖苷峰相应的保留时间附近未检出干扰峰（图1）。

2.5.2 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=178 58X-5417，r=0.9995。结果表明，毛蕊花糖苷对照品进样量的线性范围是10.12～253.00 μg。

2.5.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样6次，测定峰面积。结果毛蕊花糖苷峰面积的RSD为0.78%，说明仪器的精密度良好。

2.5.4 重现性试验 取同一批供试品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号为2150010）样品5份，分别依法处理后测定。结果毛蕊花糖苷含量的RSD为1.22%，说明该方法重复性良好。

2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号为2150010）20 μl，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12 h时注入液相色谱仪，测定峰面积。结果RSD为0.78%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.5.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品（批号2150010，毛蕊花糖苷含量为16.73 μg/ ml）6份，每份5 ml，分别精密加入毛蕊花糖苷对照品适量，按供试品溶液方法制备，依法测定含量并计算回收率（表1）。

表1 回收率试验结果

2.5.7 样品含量测定 精密吸取对照品及供试品溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算，结果3批样品（批号分别为2150010， 2150006，2150007）中的含量分别为16.73、14.92、15.37 μg/ml。

3 讨论

本文对养阴清肺口服液中主药地黄的主要有效成分毛蕊花糖苷建立了含量测定方法，结果可靠，对改进养阴清肺口服液的质量标准有一定意义。

在供试品溶液制备过程中，为了保证样品中毛蕊花糖苷的充分提取，用甲醇对样品进行回流提取1、1.5、2 h，结果显示回流提取1.5 h效果最佳。

将流动相乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%醋酸溶液（16∶84）进行试验，结果显示，乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）分离效果最好。

由毛蕊花糖苷对照品溶液，在200～400 nm范围内进行扫描，结果在波长334 nm处有最大吸收，所以334 nm作为测定波长。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：115.

[2] 周福成.高效液相色谱图集[M].沈阳：辽宁科学技术出版社，2011：76.

[3] 莫迎.裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量测定[J].医药导报，2012，31（2）：245-247.

[4] 朱振兴，段红福.高效液相色谱法测定地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的含量[J].中医学报，2013，28（7）：1023-1024.

[5] 吴竞妮.高效液相色谱法测定消郁舒心胶囊中毛蕊花糖苷含量[J].内蒙古中医药，2013，32（11）：50-51.

[6] 邱广仁，赵向阳.HPLC法测定咳嗽枇杷糖浆中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷[J].安微医药，2013，17（4）：573-574.

[7] 樊琪.左归丸中毛蕊花糖苷含量测定[J].中国科技纵横，2012，（6）：254.

[8] 张贵财，朱旭江，杜兴，等.HPLC法测定兰州肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量[J].中国药事，2010，24（8）：801-803.

[9] 张岩.高效液相色谱法测定宽肠理气汤中松果菊苷和毛蕊花糖苷[J].中草药，2010，41（12）：1994-1995.

[10] 邱倬星，熊学敏，胡晓艳，等.车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的含量测定[J].中国医药科学，2013，3（5）：41-43.

（收稿日期：2013-12-04 本文编辑：郭静娟）

[摘要] 目的 用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中毛蕊花糖苷的含量。 方法 色谱柱为Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为28℃。 结果 毛蕊花糖苷进样量在10.12～253.00 μg（r=0.9995）线性范围内线性关系良好，平均回收率为99.68%，RSD=0.8%（n=6）。 结论 高效液相色谱法方法准确，重复性好，可用于养阴清肺口服液的质量控制。

[关键词] 养阴清肺口服液；毛蕊花糖苷；高效液相色谱法

[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（a）-0015-03

养阴清肺口服液收载于原卫生部药品标准中药成方制剂第十五册，由地黄、麦冬、白芍、薄荷脑等8味药制备而成的口服液，具有养阴清肺、清肺利咽之功效，用于阴虚肺热，咽喉干痛，干咳少痰，或痰中带血[1-10]。由于原标准没有对其主药进行质量控制，本研究采用高效液相色谱法测定养阴清肺口服液中主药地黄的毛蕊花糖苷含量，结果满意。

1 仪器与试药

岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器，LC solution色谱工作站），毛蕊花糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111530-201208）；养阴清肺口服液（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号：2150006，2150007，2150010），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84），检测波长为334 nm，流速为1.0 ml/min，柱温28℃，进样量为20 μl。理论板数按毛蕊花糖苷计算不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取毛蕊花糖苷对照品适量于100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得10.12 μg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品10 ml，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，加热回流提取1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转至5 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液经0.45 μm滤膜滤过，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方及工艺制备不含地黄的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 阴性干扰试验 取“2.2，2.3，2.4”项下3种溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，测定。结果色谱图中在毛蕊花糖苷峰相应的保留时间附近未检出干扰峰（图1）。

2.5.2 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、5、10、15、20、25 μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程为Y=178 58X-5417，r=0.9995。结果表明，毛蕊花糖苷对照品进样量的线性范围是10.12～253.00 μg。

2.5.3 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μl，连续进样6次，测定峰面积。结果毛蕊花糖苷峰面积的RSD为0.78%，说明仪器的精密度良好。

2.5.4 重现性试验 取同一批供试品（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号为2150010）样品5份，分别依法处理后测定。结果毛蕊花糖苷含量的RSD为1.22%，说明该方法重复性良好。

2.5.5 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号为2150010）20 μl，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12 h时注入液相色谱仪，测定峰面积。结果RSD为0.78%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.5.6 加样回收率试验 精密称取已知含量的供试品（批号2150010，毛蕊花糖苷含量为16.73 μg/ ml）6份，每份5 ml，分别精密加入毛蕊花糖苷对照品适量，按供试品溶液方法制备，依法测定含量并计算回收率（表1）。

表1 回收率试验结果

2.5.7 样品含量测定 精密吸取对照品及供试品溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算，结果3批样品（批号分别为2150010， 2150006，2150007）中的含量分别为16.73、14.92、15.37 μg/ml。

3 讨论

本文对养阴清肺口服液中主药地黄的主要有效成分毛蕊花糖苷建立了含量测定方法，结果可靠，对改进养阴清肺口服液的质量标准有一定意义。

在供试品溶液制备过程中，为了保证样品中毛蕊花糖苷的充分提取，用甲醇对样品进行回流提取1、1.5、2 h，结果显示回流提取1.5 h效果最佳。

将流动相乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%醋酸溶液（16∶84）进行试验，结果显示，乙腈-0.1%醋酸溶液（16∶84）分离效果最好。

由毛蕊花糖苷对照品溶液，在200～400 nm范围内进行扫描，结果在波长334 nm处有最大吸收，所以334 nm作为测定波长。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：115.

[2] 周福成.高效液相色谱图集[M].沈阳：辽宁科学技术出版社，2011：76.

[3] 莫迎.裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量测定[J].医药导报，2012，31（2）：245-247.

[4] 朱振兴，段红福.高效液相色谱法测定地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的含量[J].中医学报，2013，28（7）：1023-1024.

[5] 吴竞妮.高效液相色谱法测定消郁舒心胶囊中毛蕊花糖苷含量[J].内蒙古中医药，2013，32（11）：50-51.

[6] 邱广仁，赵向阳.HPLC法测定咳嗽枇杷糖浆中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷[J].安微医药，2013，17（4）：573-574.

[7] 樊琪.左归丸中毛蕊花糖苷含量测定[J].中国科技纵横，2012，（6）：254.

[8] 张贵财，朱旭江，杜兴，等.HPLC法测定兰州肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量[J].中国药事，2010，24（8）：801-803.

[9] 张岩.高效液相色谱法测定宽肠理气汤中松果菊苷和毛蕊花糖苷[J].中草药，2010，41（12）：1994-1995.

[10] 邱倬星，熊学敏，胡晓艳，等.车前子超微速溶饮片中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的含量测定[J].中国医药科学，2013，3（5）：41-43.

（收稿日期：2013-12-04 本文编辑：郭静娟）