马齿苋水提取物的平喘作用研究❋

王国玉, 王 璐,李 伟,赵 翠,王浩宇,佟继铭

(1. 承德医学院附属医院，河北 承德 067000；2.河北省中药研究与开发重点实验室，河北 承德 )

马齿苋是马齿苋科马齿苋属一年生草本植物，《中华人民共和国药典》收载马齿苋具有清热解毒、凉血止血等作用，对痈肿疔疮、湿疹、丹毒等也具有治疗作用，对于皮肤粗糙干燥、夜盲症、矽肺、肺结核、皮炎、各种痈肿等治疗有效。本试验对马齿苋水提取物(Water Extract of Portulaca oleraceaL，WEPO)平喘作用进行研究，为其临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药物

马齿苋干燥地上部分采自河北省承德市，经承德医学院药用植物研究室鉴定为马齿苋科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。药材标本[1]保存于承德医学院中药研究所药理毒理研究室。

1.2 试剂

磷酸组织胺(Histamine diphospate，His)为上海恒盛生物科技有限公司生产(批号20100224)，氯化乙酰胆碱(Acetylcholine chloride，AchC)为上海蓝源生物科技有限公司生产(批号20101024)，氨茶碱溶液(Aminophylline，Ami)为内蒙古蒙欣药业有限公司生产(批号100904)。

1.3 实验仪器

MacLab/4e 生理记录仪源于澳大利亚，恒温离体浴槽源于澳大利亚，张力换能器(Made in Spain by PRNL，S.L：LE 13206)来自澳大利亚。

1.4 实验动物

昆明种豚鼠，体质量160～180 g、300～350 g，来源于承德医学院动物研究所繁育场。

1.5 方法

1.5.1 WEPO 平喘作用 采用整体豚鼠平喘实验[2]，取白色幼年豚鼠，体质量160～180 g，雌雄兼用，分别置于4000 ml容积的密闭钟罩内，以超声雾化器喷雾2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组织胺等容积混合液15 s，立即取出豚鼠，观察豚鼠的引喘潜伏期(从喷雾开始到哮喘发作、呼吸极度困难，直至抽搐跌倒的时间)，选取引喘潜伏期<120 s豚鼠50只供试验用。第2天将引喘潜伏期合格的豚鼠随机分为WEPO 5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg组和Ami 20 mg/kg组及NS对照组5组各10只，灌胃给药(ig)，空白对照组ig等容积蒸馏水。药后45 min以药前同样方法引喘。观察引喘潜伏期及发生抽搐跌倒动物数，不喘者引喘潜伏期以360 s计。

1.5.2 WEPO平喘机制 采用离体完整气管法(毛细管法)[3]，取体质量300～350 g豚鼠共60只，雄雌兼用，击后脑处死，取下从喉头至气管分叉处的整条气管，快速放入盛有氧饱和Krebs-Henseleit营养液中，轻轻剥去其外周组织，用营养液冲净管腔内容物，按照文献方法将气管固定于离体完整气管描记装置上。用注射器将整个系统充满营养液，排出气泡。将整个描记装置放入20 ml恒温麦氏浴槽内，恒温为37℃，从浴槽底部通入95%O2+5%CO2,15～20个气泡/min，等待毛细管内液面恒定20 min，将此时液面作为原点。分别给予不同剂量的WEPO(终浓度分别为300 μg/ml、150 μg/ml、75 μg/ml)；Ami(终浓度为30 μg/ml)和His(终浓度为 0.01 μg/ml)。观察用药后10 min毛细管内液面高度的变化。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 WEPO对Ach-His诱发豚鼠喘息潜伏期及动物跌倒比率的影响

表1显示，WEPO 1.25 g/kg、2.5 g/kg和5 g/kg剂量组动物引喘潜伏期分别为(108.2±19.1、211.3±45.2和226.9±41.5) s，与NS组(59.5±10.8) s比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。表2显示，中、大剂量组抽搐跌倒动物的比率分别为40%和30%，与NS组(100%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。小剂量组抽搐跌倒动物的比率为70%，与NS组(100%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 WEPO对离体完整气管平滑肌张力影响

表3显示，WEPO 75 μg/ml、150 μg/ml、300 μg/ml剂量组药前离体气管平滑肌装置毛细管内液面高度分别为(25.1±4.5、24.6±3.7、23.9±4.3) mm，药后毛细管内液面高度分别为(20.1±3.2、15.8±4.1、13.6±3.1) mm，用药前后比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)，提示WEPO具有松弛气管平滑肌作用。

表1 WEPO对Ach-His诱发豚鼠喘息潜伏期的影响

注：WEPO 各组与Dw对照组比较：*P<0.05,**P<0.01

表2 WEPO对Ach-His诱发豚鼠喘息动物跌倒比率的影响

注：WEPO 各组与Dw对照组比较：*P<0.05；WEPO 各组与氨茶碱组比较：△P<0.05

表3 WEPO 对豚鼠离体气管平滑肌张力的影响

注：药前与药后比较：*P<0.05，**P<0.01；与His比较：△△P<0.01

3 讨论

支气管哮喘是一种常见病、多发病，近年来发病率逐渐增加，严重危害人类健康。文献报道，马齿苋具有抗菌、抗炎、抗过敏等作用，且经试验证明其具有明显的镇咳作用。本实验对新型平喘药物研制进行了初步探讨，并通过制备整体豚鼠喘息模型及离体完整气管法观察WEPO的平喘疗效。联合应用His 和Ach诱发哮喘是一种常用的评价药物平喘作用的喘息模型，His和Ach雾化喷雾诱发豚鼠支气管痉挛，使动物窒息，导致抽搐跌倒。具有松弛气管平滑肌作用的药物可减轻由于支气管痉挛引起的动物窒息、抽搐跌倒动物的比率。本研究结果显示，WEPO延长引喘潜伏期，减少抽搐跌倒动物数，证明WEPO可抑制His、Ach诱发的支气管痉挛，其作用机制尚需进一步研究。以豚鼠离体气管平滑肌的液面高度为指标，直接观察用药前后液面高度的变化。结果显示，用药后气管平滑肌液面的高度明显低于用药前，WEPO可降低气管平滑肌张力，说明其可抑制气管平滑肌的兴奋性，对正常完整离体气管平滑肌有松弛作用，松弛气管平滑肌是其平喘作用的重要环节，说明WEPO具有平喘作用，但其具体机制有待进一步研究。

[1] 贺圣文,尤敏,苗乃法,等.野生马齿苋对PHA诱导的家兔淋巴细胞增殖的影响[J].廊坊医学院报,1996,18(3):206-207.

[2] 陈安山,刘志超,夏婷,等.地枇杷水煎液对小鼠镇咳作用的实验研究[J].右江民族医学院报,2009,5:784-785.

[3] 张会宇，向绍杰，孟莉，等.中药细辛不同提取物平喘活性分析[J].辽宁中医杂志，2011,38(3)：551-552.