红元颗粒抗炎镇痛作用的研究

段娟娟 孙建宁 方 芳 何爱先 裴文慧

（北京中医药大学中药学院中药药理系，北京，100102）

红元颗粒抗炎镇痛作用的研究

段娟娟 孙建宁 方 芳 何爱先 裴文慧

（北京中医药大学中药学院中药药理系，北京，100102）

目的：研究红元颗粒的抗炎镇痛作用。方法：观察其对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀、棉球诱导大鼠肉芽肿、冰醋酸致小鼠扭体反应及小鼠热板实验的抑制作用。结果：红元颗粒可以明显抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀（P＜0.05），降低冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加（P＜0.05），减轻角叉菜胶致大鼠足跖肿胀（P＜0.05），抑制棉球肉芽肿增生（P＜0.01或P＜0.05），显著减轻热刺激引起的小鼠疼痛（P＜0.05）；减少小鼠扭体次数（P＜0.01）。结论：红元颗粒具有显著的抗炎镇痛作用。

红元颗粒；抗炎；镇痛

红元颗粒是治疗慢性盆腔炎的临床经验方，由红藤、延胡索等中药配伍组方而成，具有清热利湿，活血化瘀，理气止痛的功效，主要用于治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎。慢性盆腔炎是常见的女性内生殖器及其周围结缔组织和盆腔腹膜发生的炎性反应，可引起不孕不育、异位妊娠和盆腔疼痛[1]。但目前未见红元颗粒抗炎镇痛作用的报道。本研究观察红元颗粒的抗炎镇痛作用，为其治疗慢性盆腔炎的临床应用提供药理学依据。

1 材料

1.1 药物 红元颗粒由北京中医药大学中药制药系提供，每克相当于8.93 g生药，临床人日用量（按生药量）为34 g/d（批号：20121130）。妇科千金片（株洲千金药业股份有限公司，批号：201203010）；醋酸地塞米松片（天津力生制药股份有限公司，批号：1112025）；罗通定片（山西云鹏制药有限公司，批号：A130101）；布洛芬缓释胶囊（中美天津史克制药有限公司，批号：12100010）。

1.2 动物 SD雌性大鼠，体重200～220 g；ICR雌性小鼠，体重18～22 g；昆明种雌性小鼠，体重18～22 g。均为SPF级，由北京市维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号SCXK（京）2012-0001。

1.3 试剂 二甲苯（北京化工厂，批号：20101015）；伊文斯兰（sigma公司）；冰醋酸（北京化工厂，批号：20110531）；角叉菜胶（sigma公司，批号：15750）；注射用青霉素钠（华北制药股份有限公司，批号：Y1206306）。

1.4 仪器 角膜环钻（苏州六六视觉科技股份有限公司）；电子分析天平（美国Ohaus公司）；UNICO2000型分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司）；Labofuge 400R低温离心机（德国Heraeus公司）；YLS-7B足跖容积测量仪（山东省医学科学院设备站）；101FAB-2型电热鼓风干燥箱（上海树立仪表有限公司）；YLS-6B智能热板仪（山东省医学科学院设备站）。

2 方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 将72只ICR雌性小鼠按随机数字表法分为6个组：对照组，地塞米松组（2 mg/kg），妇科千金片组（1.05 g/kg），红元颗粒大、中、小剂量组（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各组ig给药，1次/d，连续7 d。于末次给药1 h后，右耳涂以二甲苯0.05 mL/只，左耳作对照，30 min后处死动物，沿耳廓基线剪下双耳，用直径7 mm角膜钻环将双耳同部位等面积切下，称切下耳片质量，计算鼠耳肿胀率。鼠耳肿胀率＝（右耳片质量-左耳片质量）/左耳片质量×100%。

2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性实验 将ICR雌性小鼠按随机数字表法分为7个组：对照组，模型组，地塞米松组（2 mg/kg），妇科千金片组（1.05 g/kg），红元颗粒大、中、小剂量组（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各组ig给药，1次/d，连续7 d。实验前动物禁食12 h，末次给药1 h后各组小鼠ip 0.6%的冰醋酸0.1 mL/10 g，空白对照组ip生理盐水。30 min后，尾iv 1%的伊文斯兰生理盐水溶液0.1 mL/10 g。20 min后，小鼠脱颈椎处死，剪开腹腔，用6 mL生理盐水分数次冲洗腹腔，收集冲洗液定容至10 mL。将腹腔冲洗液按3 000 r/min，离心10 min，取上清，在590 nm处测吸光度，计算毛细血管通透性的抑制率。毛细血管通透性抑制率＝（模型组腹腔冲洗液吸光度-给药组腹腔冲洗液吸光度）/模型组腹腔冲洗液吸光度×100%。

2.3 角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验 将60只SD雌性大鼠按随机数字表法分为6个组：对照组，地塞米松组（1.4 mg/kg），妇科千金片组（0.735 g/kg），红元颗粒大、中、小剂量组（7.93 g/kg、3.97 g/kg、1.98 g/kg）。各组ig给药，1次/d，连续7 d。实验前动物禁食12 h，末次给药后，测量每只大鼠右下肢足跖容积的基础值，给药1 h后，按无菌操作法从大鼠右后足掌心向踝关节方向进针，ih 1%角叉菜胶0.1 m L/只致炎。测定致炎后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h内的足跖容积变化。计算足跖肿胀百分率。足跖肿胀百分率＝（致炎后足跖容积-致炎前足跖容积）/致炎前足跖容积×100%。

2.4 大鼠棉球肉芽肿实验 将60只SD雌性大鼠按随机数字表法分为6个组：对照组，地塞米松组（0.7 mg/kg），妇科千金片组（0.735 g/kg），红元颗粒大、中、小剂量组（7.93 g/kg、3.97 g/kg、1.98 g/kg）。腹部脱毛，无菌操作下每只大鼠沿下腹中线切开腹壁，将2粒灭菌棉球（每粒50±1 mg）分别植入两侧腹股沟皮下，缝合皮肤切口。次日开始各组ig给药，1次/d，连续14 d。末次给药1 h后取出大鼠两侧腹股沟皮下棉球称重，于80℃烘箱中干燥24 h再次称重，分别记录棉球干、湿重，减去棉球重量，即为肉芽的干、湿重，计算肉芽肿形成抑制率。抑制率＝（对照组肉芽肿重量-给药组肉芽肿重量）/对照组肉芽肿重量×100%。

2.5 小鼠热板实验 将雌性ICR小鼠置于热板上（55℃±0.5℃），记录自放入热板至小鼠舔后足所需要的时间，为该鼠痛阈值，筛选痛阈为5～30 s的小鼠。按照痛阈值均等的原则分为6个组：对照组，罗通定组（60 mg/kg），妇科千金片组（1.05 g/kg），红元颗粒大、中、小剂量组（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各组ig给药，1次/d，连续7 d。于末次给药后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h分别测量小鼠的痛阈值，若小鼠在60 s内仍无痛觉反应，取出，按60 s计算，观察药物的镇痛作用。

2.6 小鼠冰醋酸扭体实验 将90只昆明种雌性小鼠按随机数字表法分为6个组：对照组，布洛芬组（0.1 g/kg），妇科千金片组（1.05 g/kg），红元颗粒大、中、小剂量组（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各组ig给药，1次/d，连续7 d。实验前动物禁食12 h，末次给药1 h后各组小鼠ip 0.6%的冰醋酸0.1 mL/10 g，诱导小鼠扭体反应。记录注射致痛剂后出现扭体反应的时间和20 min内各鼠扭体次数，观察药物镇痛作用。

2.7 统计方法 运用SPSS 17.0进行统计分析，数据使用（±s）进行记录。组间比较采用Oneway-ANOVA进行检测。方差齐者用LSD检验，不齐者用Dunnett's T3检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 红元颗粒对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

3 结果

3.1 红元颗粒对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 对照组小鼠在给予二甲苯致炎后，右耳明显肿胀，肿胀率达到104.63%。与对照组相比，阳性药地塞米松、妇科千金片对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均具有显著的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05），肿胀抑制率分别为45.30%、30.25%；红元颗粒大、中、小剂量均可显著抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀（P＜0.05），抑制率分别为34.49%、33.71%、28.44%。结果见表1。

表2 红元颗粒对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

3.2 红元颗粒对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 与对照组相比，模型组小鼠在腹腔注射冰醋酸后毛细血管通透性明显增加，表现为腹腔炎性渗出液的吸光度显著增加（P＜0.01）。与模型组相比，阳性药地塞米松和妇科千金片可明显抑制冰醋酸诱导的毛细血管通透性增加（P＜0.01或P＜0.05），抑制率分别为32.29%、28.70%；红元颗粒的大、中、小剂量均可降低腹腔毛细血管通透性（P＜0.05），抑制率分别为28.70%、25.56%、28.70%。结果见表2。

3.3 红元颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响大鼠足跖皮下注射角叉菜胶后，鼠爪呈红、肿、热、痛等早期急性炎性反应反应，注射后3～5 h为肿胀高峰期。与对照组相比，阳性药地塞米松对角叉菜胶致大鼠足跖炎性肿胀全程均具有显著地抑制作用，表现为足跖肿胀率显著降低（P＜0.01或P＜0.05）；阳性药妇科千金片在给药后1 h、2 h、4 h、5 h、6 h可显著抑制炎性肿胀（P＜0.01或P＜0.05）；红元颗粒大、中剂量组给药后均可显著减轻致炎后2 h、4 h、6 h的炎性反应反应（P＜0.05）。结果见表3。

表3 红元颗粒对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响

表4 红元颗粒对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响

3.4 红元颗粒对棉球致大鼠肉芽肿形成的影响 灭菌棉球在植入大鼠两侧腹股沟皮下14 d后产生肉芽增生现象。与模型组相比，阳性药地塞米松和妇科千金片均可显著抑制棉球肉芽肿形成，表现为肉芽的湿重、干重显著降低（P＜0.01或P＜0.05），对湿肉芽肿的抑制率分别为26.27%、11.40%，对干肉芽肿的抑制率分别为43.68%、15.26%；红元颗粒的大、中、小剂量均可显著抑制棉球肉芽肿的形成（P＜0.05或P＜0.01），对肉芽湿重的抑制率分别为12.61%、 11.80%、10.26%，对肉芽干重的抑制率分别为17.50%、17.11%、16.18%。结果见表4。

3.5 红元颗粒对小鼠热板法痛阈值的影响 与对照组相比，阳性药罗通定可以显著提高热致痛小鼠的痛阈值（P＜0.05），药效可维持4 h；阳性药妇科千金片可缓解热刺激导致的疼痛，但未出现显著的抑制作用；红元颗粒的3个剂量组均可不同程度缓解热刺激带来的疼痛，其中大剂量组在给药3 h后，表现出显著的镇痛作用（P＜0.05），药效达到最高峰。结果见表5。

表5 红元颗粒对小鼠热板法痛阈值的影响

3.6 红元颗粒对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响 同对照组相比，阳性药布洛芬可显著延长冰醋酸致小鼠内脏疼痛的痛反应潜伏时间（P＜0.05），并减少小鼠在10 min内及10～20 min内的扭体次数（P＜0.01）；阳性药妇科千金片可显著减少小鼠在10 min内的扭体次数（P＜0.05）及10～20 min内的扭体次数（P＜0.01）；红元颗粒各个剂量组均可延长潜伏时间，但无统计学意义，红元颗粒的大剂量能显著减少10 min内及10～20 min内的扭体次数（P＜0.01），中剂量能显著减少小鼠在10～20 min的扭体次数（P＜0.01）。结果见表6。

表6 红元颗粒对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响

4 讨论

炎性反应是具有血管系统的活体组织对局部损伤的防御反应，可将其病理过程概括分为早、中、晚3期，早期主要表现为毛细血管扩张、通透性增强、渗出和水肿；中期主要是白细胞向炎灶聚集；晚期以炎灶屏障形成和组织增生为特点。本实验采用各种急、慢性炎性反应模型观察红元颗粒的抗炎作用。二甲苯涂于小鼠耳廓，引起局部组织损伤，炎性递质释放，如组胺、缓激肽和纤维蛋白溶解酶等，使得局部毛细血管通透性增加，炎性细胞浸润，造成耳部急性渗出性炎性水肿。尾静脉注射的染料伊文斯兰可与血浆蛋白结合，当腹腔注射冰醋酸诱导毛细血管通透性增高时，在一定范围内，染料的渗出量可反映毛细血管渗出的血浆蛋白量，从而指示毛细血管的通透性。大鼠足跖注射角叉菜胶，造成致炎局部白细胞浸润，引发PGE2合成增加以及补体系统的激活，可模拟炎性反应肿胀的病理变化。棉球埋入大鼠局部皮下后，病灶处主要有T与B淋巴细胞、浆细胞和单核巨噬细胞浸润，并释放多种炎性反应递质，同时毛细血管、淋巴管以及成纤维细胞和单核巨噬细胞增殖，可产生与临床某些炎性反应后期病理变化相似的肉芽增生，属于慢性炎性反应模型[2]。

本研究结果显示，红元颗粒可以明显抑制急性期毛细血管扩张及渗出、炎性反应和中期炎性水肿、慢性肉芽肿，表明其具有明显的抗炎作用。研究表明，方中红藤具有很强的抗炎、免疫、抑菌、活血等生物活性[3]，临床上用于治疗慢性盆腔炎，取得很好的疗效[4-5]。根据各种模型的作用机制，推测其抗炎作用机制可能与抑制组胺、缓激肽、纤维蛋白溶解酶、PGE2合成与释放，抑制白细胞游走，调节机体的免疫功能有关，也可能依赖于垂体-肾上腺系统，还有待进一步研究。

热板法是将小鼠放置于一定温度热板上，通过足部温度感受器感受热刺激，疼痛信息经躯体神经传入，在高位中枢参与下完成躯体缩爪反应的中枢疼痛模型[6]。扭体法将刺激性化学物质冰醋酸注入小鼠腹腔内，刺激脏层和壁层腹膜，产生大量的炎性因子，如5-HT、组胺、缓激肽、PGE等，刺激与非甾体抗炎药敏感的痛觉神经，是一种非选择性外周疼痛模型[7]。红元颗粒可以明显减轻小鼠热刺激引起的疼痛，显示其可能有中枢镇痛的作用。红元颗粒组方中所含延胡索具有活血化瘀，行气止痛的功效。有文献证实延胡索中的延胡索乙素为中枢多巴胺受体阻滞剂，可通过抑制中脑网状结构和下丘脑的诱发电位，减少交感神经节后末梢释放应激性物质，产生镇痛作用[8-9]，据此，红元颗粒的中枢镇痛作用可能与此有关。此外，红元颗粒可显著减少醋酸引起的扭体次数，提示其具有外周镇痛作用，在抗炎实验中，红元颗粒对冰醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加有显著的抑制作用，表明其外周镇痛作用可能与降低毛细血管通透性，减少炎性反应递质释放有关。

综上所述，红元颗粒具有良好的抗炎、镇痛作用，与妇科千金片的抗炎、镇痛作用差异无统计学意义，但其确切的作用机制还需深入研究。

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（2014-09-22收稿 责任编辑：曹柏）

Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Hongyuan Granule

Duan Juanjuan，Sun Jianning，Fang Fang，He Aixian，PeiWenhui
（Department of Traditional Chinese Medicine Pharmacology，School of Chinese Pharmacy，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

Objective：To study anti-inflammatory and analgesic effects of Hongyuan granule.Methods：The inhibitory effects were studied by observing xylene-induced swelling ear inm ice，acetic acid-induced increase of abdominal capillary permeability inmice，carrageenin-induced paw edema and cotton ball-induced proliferation of granuloma in rats，hot-induced pain and acetic acid-induced writhing inmice.Results：Hongyuan granule significantly reduced swelling ear inmice（P＜0.05），decreased abdominal capillary permeability inmice（P＜0.05），evidently relieved paw edema in rats（P＜0.05），and remarkably inhibited proliferation of granuloma in rats（P＜0.01 or P＜0.05），notably alleviated pain induced by hot plate（P＜0.05），as well as obviously reduced the writhing times in mice（P＜0.05）.Conclusion：Hongyuan granule has obvious anti-inflammatory and analgesic effects.

Hongyuan granule；Anti-inflammatory；Analgesic

R285.6

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.04.024

北京中医药大学科研创新团队资助项目（编号：2011-CXTD-12）

方芳，副教授，从事中药药理研究，E-mail：fangf1166＠126.com