金菊解毒颗粒质量考察

丁志军，罗美兰，廖银根，甘慧群 （江西省皮肤病专科医院药剂科，江西 南昌330001）

金菊解毒颗粒（批准文号：赣药制字Z20110033）系江西省皮肤病专科医院中医科专家经十几年临床总结的经验方（专利号：ZL200410033920X），由金银花、菊花、连翘、黄柏、赤芍、大黄、黄芩、天花粉等8味中药组成，具有清热解毒，燥湿行瘀，消肿排脓之功效。临床上主要用于风热湿毒蕴结肌肤所致痤疮、脂溢性皮炎、湿疹、丹毒等皮肤病，疗效确切。为确保制剂的质量，笔者根据处方中所含药物化学成分及剂型的特点，研究制定了连翘、黄柏、赤芍的薄层色谱鉴别及制剂中绿原酸、芍药苷的含量测定方法，用于控制该药品质量。现报道如下。

1 材料

1.1 仪器 Agilent－1100 高效液相色谱仪（美国）；CAMAG TLC SCANNER Ⅲ型 薄 层 扫 描 仪（瑞 士）；CAMAG TLC SAMPLER4型自动点样仪（瑞士）；PBQ－Ⅱ型薄层自动铺板器（重庆南岸实验电器厂）；BP－211D Sartorius电子天平（德国）。

1.2 试药 绿原酸对照品（批号110753－200413，供含量测定用）、芍药苷对照品（批号110736－201035，供含量测定用）、连翘对照药材（批号120908－200915）、黄柏对照药材（批号121510－201105）、赤芍对照药材（批号121092－201003）均购自中国食品药品检定研究院；金菊解毒颗粒（江西省皮肤病专科医院，批号110801，110802，110803）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 连翘的TLC鉴别

（1）供试品溶液的制备：取本品5 g，加稀乙醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

（2）对照药材溶液的制备：取连翘对照药材0.5 g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。

（3）阴性对照溶液的制备：按处方及制法，制成缺连翘的阴性样品，取相当于样品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，使成条带状，以氯仿－甲醇（7∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。连翘的TLC见图1。

图1 金菊解毒颗粒中连翘的薄层色谱图1～3.供试品；4.连翘药材；5.阴性对照Fig 1 TLC of Forsythia in Jinju Jiedu granules1－3.test sample；4.Forsythia；5.negative control

2.1.2 黄柏的TLC鉴别

（1）供试品溶液的制备：取本品5 g，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。

（2）对照药材溶液的制备：取黄柏对照药材0.1 g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。

（3）对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

（4）阴性对照溶液的制备：按处方及制法，制成缺黄柏的阴性样品，取相当于样品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各2μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上使成条带，以正丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。黄柏的TLC见图2。

2.1.3 赤芍的TLC鉴别

（1）供试品溶液的制备：取本品5 g，加水饱和正丁醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。

（2）对照药材溶液的制备：取赤芍对照药材1 g，按供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液。

（3）对照品溶液的制备：取芍药苷对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。

（4）阴性对照溶液的制备：按处方及制法，制成缺赤芍的阴性样品，取相当于样品的量，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

图2 金菊解毒颗粒中黄柏的薄层色谱图1～3.供试品；4.黄柏药材；5.盐酸小檗碱对照品；6.阴性对照Fig 2 TLC of Cortex Phellodendri in Jinju Jiedu granules1－3.test sample；4.Cortex Phellodendri；5.reference substance of Berberine hydrochloride；6.negative control

照薄层色谱法（中国药典2010 年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，使成条带状，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。赤芍的TLC见图3。

图3 金菊解毒颗粒中赤芍的薄层色谱图1～3.供试品；4.赤芍药材；5.芍药苷对照品；6.阴性对照Fig 3 TLC of Red Peony in Jinju Jiedu granules1－3.test sample；4.Red Peony；5.reference substance of Paeoniflorin；6.negative control

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇（A）－1%磷酸溶液（B）梯度洗脱，洗脱条件见表1；DAD检测器，检测波长327 nm（绿原酸），230 nm（芍药苷）；流速：0.8 mL·min－1；柱温：40 ℃；进样量：5μL。

表1 流动相梯度洗脱Tab 1 The mobile phase gradient elution

2.2.2 溶液的制备

（1）对照品溶液的制备 取绿原酸对照品、芍药苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇溶解制成每1 mL分别含0.34、0.11 mg的对照品溶液，即得（10 ℃以下保存）。

（2）供试品溶液的制备 取本品颗粒研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，称定，超声处理30 min，放冷，再称定，用50%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，即得。

（3）阴性对照液的制备 按处方工艺分别制备缺金银花、菊花和赤芍的金菊解毒颗粒阴性样品，按“2.2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.2.3 专属性试验 按上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。结果，供试品在与对照品色谱图相应的位置上有相同的绿原酸峰、芍药苷峰，而阴性对照无干扰。色谱图见图4。

图4 金菊解毒颗粒高效液相色谱图A.绿原酸对照品；B.金菊解毒颗粒提取液；C.阴性（缺金银花、菊花）；D.芍药苷对照品；E.金菊解毒颗粒提取液；F.阴性（缺赤芍）1－绿原酸；2－芍药苷Fig 4 HPLC chromatogram of Jinju jiedu granulesA.reference substance of chlorgenic acid；B.Jinju Jiedu granules extract；C.negative（lack chrysanthemun，Honeysuckle）；D.reference substance of paeoniflorin；E.Jinju Jiedu granules extract；F.negative（lack of Radix Paeoniae Rubra）1－chlorogenic acid；2－paeoniflorin

2.2.4 线性范围的考察 精密吸取混合对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL分别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，进行线性回归，绿原酸的回归方程为：Y＝119 381.86 X＋0.47，线性范围为0.68～3.40μg（r2＝0.999 8）；芍药苷的回归方程为：Y＝554 197.55 X＋0.34，线性范围为0.22～1.10 μg（r2＝0.999 6）。

2.2.5 精密度试验 取对照品溶液，注入液相色谱仪，连续进样6次，每次5μL，测得绿原酸、芍药苷平均峰面积值，RSD 分别为0.28%，0.17%，表明精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 精密吸取对照品溶液，分别在0、2、4、6、8 h进样，进样量为5μL，测得绿原酸、芍药苷吸收平均峰面积值，RSD 分别为0.37%（n＝5）和0.30%（n＝5），结果表明绿原酸、芍药苷在8 h内稳定。

2.2.7 重复性试验 取同一批样品6 份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为5μL，测得峰面积值，计算绿原酸、芍药苷含量，RSD 分别为0.80%，0.49%，结果表明此法重复性良好。

2.2.8 回收率试验 取同一批已知含量的样品（批号110801）6份，分别精密加入一定量的绿原酸、芍药苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为5μL。结果见表2。

2.2.9 样品测定 取本品3批，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，进样量为5μL。结果见表3。

由试验结果可知，仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重复性和加样回收率等均较好，符合定量要求。根据测定结果，暂定每1 g金菊解毒颗粒中含金银花、菊花以绿原酸计，不得少于5.51 mg；含赤芍以芍药苷计，不得少于3.68 mg（取3批平均含量的80%为其下限）。

表2 金菊解毒颗粒加样回收率试验结果（n＝6）Tab 2 Results of recovery test of Jinju Jiedu granules（n＝6）

表3 金菊解毒颗粒样品含量测定结果（n＝3）Tab 3 Results of content determination of Jinju Jiedu granules（n＝3）

3 讨论

金菊解毒颗粒处方中的药味较多，成分复杂，薄层鉴别有较大困难。笔者对处方中每味药材都进行了TLC 鉴别方法实验条件摸索，经过反复试验，进行多因素实验条件的比较，制定出本制剂中连翘、黄柏和赤芍的薄层鉴别方法。在赤芍的薄层鉴别中，曾参考文献［1］，用乙醇处理样品，展开后斑点分离不理想，后改用水饱和正丁醇提取，结果斑点显色清晰，分离效果好。

金银花作为金菊解毒颗粒中的君药，其主要活性成分绿原酸含量较高，且为臣药菊花所共有成分，故选其为制剂含量测定的指标成分之一；臣药赤芍投料量较大，因此选择其所含主要有效成分芍药苷作为含量测定的另一指标。在指标成分含量测定考察时，笔者曾参考文献［2－3］色谱条件以HPLC法同时测定金菊解毒颗粒中绿原酸、芍药苷含量，分离结果均不理想；改用甲醇－1%磷酸溶液梯度洗脱可将2个组分完全分离（分离度均大于1.5），且分析速度快，重现性好，供试品制备方法简单，可作为该制剂定量的指标。

综上所述，所建方法可用于金菊解毒颗粒的质量控制。

［1］ 中国药典.一部［S］.2010：147.

［2］ 褚文静，张雪，王伟，等.HPLC法测定抗感胶囊中绿原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁［J］.中草药，2010，41（1）：66－68.

［3］ 刘元媛，卢静华，郭伟英，等.RP－HPLC法测定抗感颗粒中芍药苷和绿原酸的含量［J］.中国药房，2011，22（40）：3820－3821.