气相色谱法测定联苯乙酸原料药中5种有机溶剂残留量

曹翠，卢洁，阎君，林子琦（.吉林修正药业新药开发有限公司，长春300；.长春师范学院初等教育学院，长春 3003）

联苯乙酸（Felbinac）是一种新型的非甾体抗炎药，也是合成联苯乙酸乙酯、联苯乙酰吡啶等中间体的原料[1]。其是非甾体抗炎药芬布芬的活性代谢物，具有很强的抗炎、镇痛作用和良好的透皮性能；用于治疗关节炎和肌肉疼痛，具有速效和安全等特点，如3%联苯乙酸凝胶软膏外用对于变形性关节痛病、肩周炎、腱鞘炎、肌肉痛及外伤后肿胀等疾病具有良好的镇痛和消炎作用[2]。在本公司联苯乙酸原料药的合成工艺中使用了甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和吗啉等5种有机溶剂，2010年版《中国药典》（二部）对上述溶剂均规定了残留限度[3]。为此，本文建立了直接进样法[4]测定联苯乙酸原料药中5种有机溶剂残留量的气相色谱法，结果表明建立的方法具有简便、准确等特点，可满足联苯乙酸原料药中有机溶剂检测的要求。

1 材料

GC-2010气相色谱仪、氢火焰离子化检测器（FID）、GC工作站（日本岛津公司）；GHL-300氢气发生器（北京汇佳精仪工贸有限公司）；双量程分析天平[梅特勒-托利多（上海）仪器有限公司]。

联苯乙酸原料药（吉林修正药业新药开发有限公司药物研究室合成，批号：20120501、20120502、20120503，纯度：99.2%、99.6%、99.5%）；甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、吗啉、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均为分析纯（含量：均≥99.0%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱（30 m×0.53 mm×1.5 μm），6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液；柱温：程序升温，初始温度40℃，以4℃/min升温至100℃，再以20℃/min升温至180℃，保持2 min；进样口温度：200℃；FID检测器温度：250℃；分流比：30∶1；载气：高纯氮气；压力：100 kPa；进样量：2 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液。精密称取甲醇0.6800 g、乙酸乙酯0.4832 g、冰醋酸0.2853 g、吗啉0.4081 g，分别置于50 ml量瓶中；另取三氯甲烷0.1624 g，置于25 ml量瓶中。分别加入适量DMF溶解并稀释至刻度，充分摇匀，作为对照品贮备液；精密移取甲醇贮备液1.0 ml、乙酸乙酯贮备液2.5 ml、三氯甲烷贮备液0.5 ml、冰醋酸贮备液4.5 ml和吗啉贮备液2 ml，置于同一50 ml量瓶中，以DMF稀释至刻度，充分摇匀，作为混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液。精密称取联苯乙酸原料药1.0 g，置于10ml量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度，充分摇匀，即得。

2.3 系统适用性试验

移取混合对照品溶液进样测定，记录色谱图。结果，甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和吗啉的保留时间分别为1.296、3.689、3.962、8.670和9.872 min，各相邻色谱峰的分离度除乙酸乙酯和三氯甲烷为1.1外，其余均大于1.5，理论板数均不低于10000，系统适用性较好，详见图1。

图1 气相色谱图A.对照品；B.供试品；1.甲醇；2.乙酸乙酯；3.三氯甲烷；4.冰醋酸；5.吗啉Fig 1 GC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.methanol；2.acetic ether；3.chloroform；4.glacial acetic acid；5.morpholine

2.4 线性关系试验

精密移取上述对照品贮备液适量，置于同一50 ml量瓶中，加入DMF溶解并稀释至刻度，各对照品的取样量见表1（表中溶剂均指其对照品贮备液）。

表1 线性试验中各对照品溶液的制备Tab 1 Preparation of substance control in linear tests

取表1中制备好的对照品溶液Ⅰ～Ⅴ各2 μl进样，测得峰面积，分别以峰面积（y）对质量浓度（x）进行线性回归，各溶剂的线性方程及相关结果见表2。

表2 各溶剂线性关系试验结果Tab 2 Linear ranges of solvents

2.5 精密度试验

取混合对照品溶液2 μl，连续进样5次，计算各混合对照品溶液中甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、吗啉的峰面积的RSD分别为0.6%、4.9%、4.3%、4.3%、4.6%（n＝5）。结果表明，各溶剂峰面积的RSD均小于5%（n＝5），精密度较好。

2.6 重复性试验

精密称取同一批号的样品，分别制备成1.0 g/ml的供试品溶液6份，进样分析，记录色谱图，按外标法计算残留溶剂的含量。结果甲醇含量的RSD＝1.6%（n＝6），其他溶剂均未检出，表明方法重复性良好。

2.7 检测限和定量限试验

取各对照品贮备液，逐级进行稀释进样，记录色谱图。以信噪比为3计算检测限，以信噪比为10计算定量限。结果，甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、吗啉的检测限分别为0.816、1.598、0.773、12.855、1.712 μg/ml，定量限分别为 2.72、5.25、3.09、36.73、5.71 μg/ml。

2.8 回收率考察

精密称取样品1.0 g，置于10 ml量瓶中，精密移取对照品贮备液，制得相当于各溶剂限度80%、100%、120%的溶液。根据峰面积计算回收率，测得5种溶剂的平均回收率为97.5%～100.2%，RSD为0.25%～1.39%，均小于5%（n＝3），结果见表3。

表3 回收率试验结果（n＝3）Tab 3Results of recovery tests（n＝3）

2.9 稳定性试验

取混合对照品溶液，于室温下放置0、2、4、8、12 h后分别进样，结果甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸、吗啉在12 h内测得的峰面积的RSD分别为3.8%、2.2%、3.4%、1.5%、0.6%（n＝5），表明本溶液在室温放置12 h内稳定。

2.10 样品中有机溶剂残留量的测定

量取混合对照品溶液和3批供试品溶液各2 μl进样，记录气相色谱图。按外标法以峰面积计算样品中残留溶剂的含量。结果表明，样品中只检出甲醇，且残留量均＜0.3%，其他溶剂均未检出。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

气相色谱的常用溶剂有水、乙醇、DMF、二甲基亚砜（DMSO）等，因联苯乙酸不溶于水，因此选择DMF作为溶剂。结果证明，DMF不但可以很好地溶解联苯乙酸，且对5种待测溶剂无干扰。

3.2 色谱柱的选择

考虑到冰醋酸的残留，本试验初期选择了极性柱HPFFAP[5]，但由于甲醇和乙酸乙酯的极性相近，经改变柱温、分流比、载气流速等条件仍很难分开。按2010年版《中国药典》（二部）附录ⅧP[3]方法，采用气相色谱法分离甲醇和乙酸乙酯，在极性色谱柱中二者的保留时间也仅相差0.2 min。因此尝试用中等极性的色谱柱Agilent DB-624[6]，结果在本文设定的色谱条件下，采用该色谱柱能将5种有机溶剂较好地分离。

3.3 5种残留溶剂限度的确定

甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、冰醋酸和吗啉均是生产过程中引入的对人体有害的有机溶剂。《中国药典》[3]规定，甲醇、三氯甲烷均为第二类毒性试剂，其限度分别为0.3%和0.06%；乙酸乙酯、冰醋酸均为第三类毒性试剂，其限度为0.5%；而吗啉尚未收入《中国药典》中，故本试验参考文献[4]中甲醇的限度，将其限度定为0.3%。

[1]陈芬儿.有机药物合成法[M].北京：中国医药科技出版社，1999：365-367.

[2]沙静姝.解热消炎镇痛药研究进展[J].国外医药合成药、生化药、制剂分册，1989，10（3）：143.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：63.

[4]李子静.顶空气相色谱法测定托伐普坦原料药中的4种残留溶剂[J].中国药房，2012，23（41）：3916.

[5]范毅颖，于海龙，崔振辉.头孢唑肟钠残留溶剂的气相色谱测定[J].黑龙江医药，2007，20（2）：105.

[6]陈汝红，杨春巧，张轶华.顶空气相色谱法检测苄星青霉素原料药中的5种残留溶剂[J].中国药房，2012，23（45）：4287.