毛细管气相色谱法测定米铂原料药中5种有机溶剂残留量

冯光玲，冯爱国，丁文娟，孔祥雨，刘宪华（1.山东省医药工业研究所，济南250101；2.山东省化学药物重点实验室，济南 250101；.山东临沂动植物园，山东临沂 27607）

米铂（Miriplatin）是日本住友公司开发的一种新型脂溶性铂类抗肿瘤药物，于2009年在日本获批准上市，临床上用于治疗肝细胞癌。该原料药国内正处于在研状态。米铂分子式为C34H68N2O4Pt·H2O，相对分子质量为782.01。其在制备工艺中使用了乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈与二氯甲烷等有机溶剂（所用溶剂由本单位合成室依据合成路线提供证实），为保证用药安全，应对上述有机溶剂的残留量进行控制。由于毛细管气相色谱（GC）法[1]具有分析速度快、分离效率高、灵敏度高的优点，被广泛用于药物有机溶剂残留量测定。为此，笔者建立了毛细管气相色谱法测定5种有机溶剂残留量的方法。由于米铂极微溶于水，故以N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂。结果表明，建立的方法快速、灵敏，可用于米铂原料药中有机溶剂残留量的测定。

1 材料

6890气相色谱仪、7694E自动顶空进样器（美国Agilent公司）。

米铂原料药（本所合成室提供，批号：120901、120902、120903，纯度：99.71%、99.82%、99.78%）；乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈、二氯甲烷和DMF均为分析纯（含量：＞99.0%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent毛细管柱（6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液）（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；柱温采用程序升温：40℃保持6 min，再以50℃/min的速率升温至180℃，保持10 min；氢火焰离子化检测器温度：250℃；载气：高纯N2，流速：10 ml/min；进样口温度：200 ℃；分流比：20∶1；采用顶空进样法测定，顶空进样条件：加热温度：90℃；加热时间：30 min；进样瓶装量：3 ml（顶空气体进样）。

2.2 溶液制备

空白溶液：精密量取DMF 3 ml，置于顶空进样瓶中，作为空白溶液。

标准溶液贮备液：称取乙醇约500 mg、丙酮约500 mg、异丙醇约500 mg、乙腈约41 mg、二氯甲烷约60 mg，置于有适量DMF的100 ml量瓶中，充分振摇使溶解，加DMF稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液贮备液。

标准溶液：精密量取上述溶液5 ml，置于50 ml量瓶中，加DMF至刻度，摇匀，作为标准溶液。

供试品溶液：精密称取米铂0.3 g，置于顶空进样瓶中，分别加DMF 3 ml，作为供试品溶液。

取上述标准溶液和供试品溶液进样，可见各溶剂分离良好，空白溶剂无干扰，详见图1。

图1 气相色谱图A.标准溶液；B.供试品溶液；1.乙醇；2.丙酮；3.异丙醇；4.乙腈；5.二氯甲烷；6.DMFFig 1 GC chromatogramsA.standard solution；B.test sample；1.alcohol；2.acetone；3.isopropanol；4.acetonitrile；5.dichlormethane；6.DMF

2.3 标准曲线的制备

分别精密量取标准溶液贮备液0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 ml，置于10 ml量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀。各取上述溶液3 ml，置于顶空进样瓶中，按“2.1”项下色谱条件分别进样。分别以各有机溶剂质量浓度（c）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，5种有机溶剂均在相应的检测质量浓度范围内线性关系良好，结果详见表1。

表1 5种有机溶剂的线性关系试验结果Tab 1 Linear range results of 5 kinds of organic solvents

2.4 精密度试验

取标准溶液，连续进样6次，记录色谱图，计算含量的RSD。结果，无水乙醇RSD为0.21%，丙酮RSD为0.22%，异丙醇RSD为0.31%，乙腈RSD为0.26%，二氯甲烷RSD为0.36%（n均为6），表明方法精密度符合要求。

2.5 回收率试验

精密称取样品（批号：120901）0.3 g，共10份，其中1份加入3 ml DMF，作为空白溶液。分别制备低（80%）、中（100%）、高（120%）3种质量浓度的标准溶液，分别取上述不同浓度的标准溶液3 ml，加入盛有样品的顶空进样瓶中；以“2.2”项下的标准溶液作为对照，分别进样。计算其回收率，结果见表2。

由表2可知，乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈与二氯甲烷的回收率（99.1%～102.9%）结果均符合要求。

2.6 定量限、检测限试验

将标准溶液逐级稀释，分别取3 ml，置于顶空进样瓶中，进样，记录色谱图，直至信噪比为10∶1和3∶1，即为定量限和检测限。结果，乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈与二氯甲烷的定量限分别为0.1、0.3、0.6、0.16、0.15 ng；检测限分别为0.03、0.1、0.2、0.05、0.05 ng。

表2 5种有机溶剂的回收率试验结果（%%，n＝3）Tab 2 Recovery test results of 5 kinds of organic solvents（%%，n＝3）

2.7 样品中有机溶剂残留量测定

精密量取标准溶液和供试品溶液，分别进样测定，以外标法计算得3批样品中乙醇残留量平均值分别为0.074%、0.067%和0.068%，其余4种有机溶剂均未检出。

3 讨论

毛细管气相色谱法具有分析速度快、分离良好、灵敏度高的优点[2]，因此广泛应用于痕量物质的分析。

目前顶空毛细管气相色谱是药物中残留溶剂测定的理想方法，笔者采用扩大分流比（20∶1）、增加进样量（进样瓶装量3 ml）的方法以尽量提高顶部空气中待测组分的质量浓度。笔者以DMF为溶剂，因该溶剂对待测组分具有良好溶解性且具有热稳定性、低蒸气压的性质，对待测组分具有较小活度系数；另DMF可以与5种有机溶剂达到有效分离，且无干扰，经方法学验证得到满意的结果，精密度符合要求[3]（RSD＜5%，n＝6），从而能更好地检测出米铂原料药中有机溶剂的残留量。

本试验测定的5种有机溶剂沸点有差异，选用中等极性毛细管柱可以进行分离，但一般的填充柱达不到检测要求，故应选用毛细管柱。

本试验采用程序升温的方法，先在40℃保持6 min，使低沸点的溶剂有效分离，然后以50℃/min的速率升温至180℃，保持10 min，使DMF加快出峰，以改善峰形，且缩短了分析时间，提高了工作效率。

笔者根据2010年版《中国药典》[3]的要求，将米铂中无水乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈与二氯甲烷的限度确定为0.5%、0.5%、0.5%、0.041%、和0.06%。

经过上述验证，表明本文建立的方法线性、精密度、回收率、定量限、检测限以及系统适用性试验结果均较好，能够准确、迅速地检测出米铂原料药中残留的乙醇、丙酮、异丙醇、乙腈与二氯甲烷，从而保证用药的安全性。

[1]郭晓玲，钱蔚，杨昌金，等.毛细管气相色谱法测定速效伤风胶囊中对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏的含量[J].色谱，1998，16（2）：164.

[2]栾成章，祝波，王尊文.顶空气相色谱法测定夫西地酸中有机溶剂残留量[J].中国药房，2006，17（7）：535.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录63.