嗜酸乳杆菌抑菌能力的试验

【摘 要】 选择一株嗜酸乳杆菌优良菌株为研究对象，用牛津杯法测定嗜酸乳杆菌对6种细菌的抑菌作用，根据抑菌圈的大小来判断抑菌效果。实验表明嗜酸乳杆菌对6种细菌起抑菌作用的并非菌体本身而是其代谢产物，且抑菌作用并非由于pH的变化引起的。

【关键词】嗜酸乳杆菌；牛津杯法；抑菌圈；发酵液

文章编号：ISSN1006—656X（2013）09 -0100-01

【前言】嗜酸乳杆菌是人体肠道内的重要益生菌，能调节肠道微生态平衡，抑制病原微生物生长，缓解乳糖不耐症，降低胆固醇和抑制肠道腹泻等作用，被视为第三代酸乳发酵剂菌种[1]。研究嗜酸乳杆菌对不同病原菌的抑菌效果、探讨其抑菌因素，对嗜酸乳杆菌产品的应用具有一定的意义。

一、材料与仪器

（一）材料：

（1）实验菌株：嗜酸乳杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、八叠球菌、枯草芽孢杆菌（实验室保存的菌株）

（2）培养基：PCA培养基、LB培养基、MRS培养基

13%牛奶培养基（用脱脂乳粉配制成13%水溶液，115℃10min灭菌）

（3）设备名称、型号、厂家

YXQ-LS-50SL型高压蒸汽灭菌锅（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）

PYX-DHS型隔水式点热恒温培养箱（上海市跃进医疗器械厂）

JT-5003型精密电子天平（深圳市华恒仪器有限公司）

微生物实验常规玻璃仪器

（二）实验方法

（1）嗜酸乳杆菌发酵菌悬液、发酵液抑菌效果试验

将加有溴钾酚紫指示剂的PCA培养基分装于试管中，每管约15mL，可确保每个平板的营养成分基本相同，添加指示剂有利于观察抑菌圈，然后于121℃灭菌20min。分别吸取1mL指示菌的10-1稀释液于冷却至45-50℃培养基中，这一稀释度生长的菌落能够均匀的布满整个平板，确保实验的准确度，混匀后倒入9cm的灭菌平板中。培养基凝固后，在无菌条件下将3个灭菌的牛津杯均匀地放置在平板上，轻轻按压，使其与平板培养基接触面无空隙。在3个杯中分别加入0.1mL的嗜酸乳杆菌菌悬液、嗜酸乳杆菌培养上清液、MRS液体培养基，37℃培养24h，测定抑菌圈直径。每个样品做两个重复，结果取平均值。

（2）牛奶发酵物抑菌效果试验

13%牛奶培养基，115℃10min灭菌，冷却40℃左右，按5%的接种量接入嗜酸乳杆菌菌种，42℃恒温培养约4h至牛奶凝固，即牛奶发酵物。用牛奶发酵物及其析出的上清液分别进行抑菌实验，以13%牛奶培养基作对照，观察抑菌效果。

（3）酸度对嗜酸乳杆菌抑菌作用影响试验

嗜酸乳杆菌的发酵物pH值呈酸性，说明其代谢产物中含酸性物质，而pH值对细菌生长都有一定的影响，为了验证嗜酸乳杆菌代谢产物的抑菌作用是否是由于pH变化引起的，用1mol/LHCL、1mol/LNaCL将MRS培养基、嗜酸乳杆菌培养上清液、牛奶发酵物析出液的pH进行调整，然后做抑菌实验，观察酸度是否影响抑菌作用。MRS培养基的pH调整到培养后的pH，嗜酸乳杆菌培养上清液pH调整到培养前的pH，牛奶发酵物析出液的pH调整到发酵前的pH。

嗜酸乳杆菌MRS培养液制备：将实验室保存在牛奶培养基中的嗜酸乳杆菌以5%的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃恒温培养18h，即为嗜酸乳杆菌MRS培养液。静置乳酸菌培养液，待其菌体完全沉淀后取其上清液，再经0.22um膜过滤即为嗜酸乳杆菌培养上清液 。

实验菌株培养液制备：将试管斜面保存的实验菌株接种到LB培养基中，37℃恒温培养24h，为指示菌培养液。

二、结果

（一）嗜酸乳杆菌发酵液的抑菌结果

表1 嗜酸乳杆菌培养物对6种细菌的抑菌作用/mm（如下表）

由表1可知

1、嗜酸乳杆菌菌悬液和嗜酸乳杆菌培养上清液对6种细菌都有抑制作用；

2、二者的抑菌能力无明显差别，说明起到抑菌作用的并非菌体本身而是其代谢产物；

3、调整pH值后的嗜酸乳杆菌培养上清液、MRS培养基的抑菌结果与未调整的结果一致，说明其抑菌作用并非是pH值的变化引起的；同时也说明嗜酸乳杆菌培养物pH值变化幅度均在这6种细菌的适应范围内；

4、从抑菌圈直径可以看出嗜酸乳杆菌培养菌悬液和嗜酸乳杆菌培养上清液对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、八叠球菌的抑制能力较强，对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制能力相对弱些，对副溶血性弧菌的抑制能力最弱。

（二）嗜酸乳杆菌牛奶发酵物的抑菌结果

表2 嗜酸乳杆菌发酵物对6种细菌的抑菌作用/mm

1、牛奶发酵物及析出液对6种细菌具有一定的抑制作用，但抑菌效果比嗜酸乳杆菌培养物差，这可能是由于发酵物与培养物的原培养基成分不同因而代谢产物成分不同、两者培养发酵时间不同因而代谢产物数量也不同引起的，嗜酸乳杆菌培养物培养18h大大超过牛奶发酵的时间约4h；

2、牛奶发酵物及析出液的抑菌效果无明显差别，也说明牛奶发酵物中对细菌的抑制作用并非菌体而是其代谢产物；

3、调整pH值后的析出液、牛奶培养基抑菌效果与未调整的效果无明显差别，也说明其抑菌作用并非是pH值的变化引起的；同时也说明嗜酸乳杆菌牛奶发酵物pH值变化幅度均在这6种细菌的适应范围内。

三、结论

被视为第三代乳酸发酵剂的嗜酸乳杆菌，其真正起到抑菌作用的是它的代谢产物的某些物质而非菌体本身也不是代谢产物中酸的因素；嗜酸乳杆菌的代谢产物对不同细菌抑菌能力也不同；由嗜酸乳杆菌发酵的牛奶产品同样具有抑制作用，所以多喝酸奶可调节肠道健康。

参考文献：

[1]张帆，王建华，刘立恒等.嗜酸性杆菌的培养条件及其生物学特性[J].食品与发酵工业，2005（31）3：43-47.

[2]程秀云，罗玉芳.嗜酸乳杆菌生物抗性研究[J].食品工业科技，2011，06：232-233转237

[3]徐登峰，曹国文，戴荣国.植物乳酸菌对致病性大肠杆菌的抑制试验[J].四川畜牧兽医，2005（9）：36转38。

[4]张辉华，曹永长，毕英佐. 6株乳酸菌体外抑菌实验[J].中国兽医杂志，2001，37（7）：8-10。

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