脊索瘤组织中Brachyury 表达与预后的关系

张琳琳，张 展#，段震峰

1)郑州大学第三附属医院检验科 郑州 450052 2)哈佛大学麻省总医院骨肉瘤分子生物学实验室 波士顿 02114

脊索瘤是一种罕见的局部恶性侵袭性骨肿瘤,占所有恶性骨肿瘤的1%～4%。脊索瘤约50%发生于骶尾骨，由于发病部位隐蔽，肿瘤生长缓慢，早期很难被发现[1]。脊索瘤总体预后较差，术后局部复发率高，患者多死于局部肿瘤病灶的反复复发。据统计，脊索瘤患者的病死率在63%左右，5 a生存率为50%，10 a生存率约为28%[2]，因此亟须寻找到特异的分子标志物为脊索瘤的预后判断提供帮助。Brachyury是T-box基因家族的表达产物，是一种重要的转录因子。目前已发现Brachyury在80%的脊索瘤组织中有表达[3-4]，近来被认为是诊断脊索瘤的特异性标志物。作者利用组织芯片技术对脊索瘤组织中Brachyury的表达进行了分析，探讨 Brachyury作为脊索瘤临床预后分子标志物的可能性。

1 材料与方法

1.1组织标本搜集美国麻省总医院骨科1941年至2010年期间的78例脊索瘤组织、7例脊索瘤癌旁正常组织和6例胚胎脊索的存档组织蜡块，均经2名病理医生再次确认。71例患者年龄31～87岁，≤45岁14例，46～岁25例，≥61岁32例。74例患者性别信息完整，其中男56例，女18例。63例患者可查阅到发病部位，其中21例于活动脊柱发病，42例于骶骨发病。61例患者生存状态信息完整，至随访结束时，27例存活，34例死亡。57例患者疾病状态信息完整，至随访结束时，无瘤存活27例，带瘤存活7例，因病死亡23例。

1.2Brachyury的检测①组织芯片的制备：每例存档组织蜡块被钻取3个点，每个点直径0.6 mm，按照预先设计的位置将所有钻取的组织点转移到一个空白蜡块中，切片用于免疫组化染色。②免疫组化染色：采用R&D Systems公司(美国)细胞和组织染色试剂盒，依照试剂盒说明进行免疫组化染色。Brachyury抗体购自美国Santa Cruz公司。经2名病理医生采用双盲法读片，对于不一致的结果，再次判读，直至取得一致结果，记录在案。在良好的组织结构和清晰的背景下，以细胞核内显现棕色为阳性细胞。结果判读采用阳性细胞计数法：计数100个细胞，无阳性细胞计为0分，阳性细胞百分比<30%、30%～60%、>60%分别记为1、2、3分。

1.3统计学处理采用Graphpad PRISM进行数据分析。不同组织中Brachyury阳性表达水平的比较采用秩和检验，2组比较采用Mann-Whitney检验，多组比较采用Kruskal-Wallis检验。利用Kaplan-Meier法对脊索瘤不同疾病状态及存活时间与Brachyury阳性表达的关系进行分析，生存时间记录的起点为临床诊断，终点为临床追踪结束。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1胚胎脊索瘤、癌旁正常及脊索瘤组织中Brachyury的表达结果见图1、表1。

2.2Brachyury的表达与脊索瘤临床参数的关系不同临床参数脊索瘤组织中Brachyury的表达见表2。结果表明，Brachyury的表达与脊索瘤患者的性别、年龄均无关，但发病于骶骨者的阳性表达水平高于发病于活动脊柱者。

图1 Brachyury在脊索组织中的表达(免疫组化，×40)A：癌旁正常组织；B：胚胎脊索组织；C：脊索瘤组织。

例

H=22.669，P=0.263。

表2 不同临床参数脊索瘤组织中Brachyury的表达 例

2.3Brachyury的表达与脊索瘤不同疾病状态及存活时间的关系Kaplan-Meier生存曲线见图2。不同Brachyury表达水平的脊索瘤患者的生存曲线差异无统计学意义(χ2=0.432，P=0.933)。不同疾病状态的脊索瘤患者Brachyury表达的差异亦无统计学意义，见表3。

图2 不同 Brachyury 表达水平的脊索瘤患者的生存曲线

组别n0分1分2分3分无瘤存活2771136带瘤存活70241因病死亡237844

H=2.605，P=0.272。

3 讨论

Brachyury是T-box基因转录产物，在胚胎脊索组织中大量表达,调控中胚层形成和细胞分化基因的转录，对于脊索细胞的增殖分化异常重要[5-6]，其表达受Wnt信号传导通路的调控。由于脊索瘤被认为是来源于胚胎脊索组织残余物的恶性骨性肿瘤，Brachyury在脊索瘤组织中表达较高，因此许多研究认为Brachyury与脊索瘤密切相关，因而Brachyury一向被认为是诊断脊索瘤的特异性标记物[3，7-8]，多用于脊索瘤的鉴别诊断[7-8]等。但是近年来的研究显示Brachyury并非特异性表达于脊索瘤，在多种恶性肿瘤(如肺癌和结直肠癌[9]等)和正常组织(如肾、肺、脑、骨髓等)中均有Brachyury的表达。该研究中，胚胎脊索组织中Brachyury阳性表达率达6/6，脊索瘤癌旁正常组织中4/7存在Brachyury的阳性表达，而脊索瘤组织中Brachyury的阳性表达率为75.64%，也并非100%。Oakley 等[10]的研究亦显示88%的脊索瘤组织中有Brachyury的表达。

在Brachyury与肿瘤临床进展相关性方面，仅见Brachyury与结直肠癌的报道，结果显示Brachyury在晚期结直肠癌组织中的阳性表达率要远高于早期结直肠癌，但是即便是在阳性表达率较低的早期结直肠癌组织中，Brachyury的表达也达到了80%以上[10]，并因此认为Brachyury不适合作为评价结直肠癌临床进展和预后的分子标志物。也有研究[11]显示Brachyury可以通过促进上皮间质转化而促进肿瘤进展。该研究发现，Brachyury的表达与脊索瘤患者的疾病状态及生存时间均无关，仅与脊索瘤发生部位有关。同样，Presneau等[5]报道，在181例散发脊索瘤病例中，虽然 39%出现6p27的拷贝数变异，但是未发现这些变异与临床参数之间的相关性。

综上所述，作者认为，虽然脊索瘤组织中Brachyury高表达，但是Brachyury并不能作为预测脊索瘤临床预后的特异性分子标志物。

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