冠心七味片中丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛的测定

2013-11-01吴一振董娟妮王世祥刘勤社郑晓晖

中成药 2013年11期

吴一振，杨洋，董娟妮，王世祥，郑静，刘勤社，2，郑晓晖，3*

(1.西北大学生命科学学院，陕西西安 710069;2.陕西省人民医院，陕西西安 710068;3.深圳清华大学研究院，广东深圳 518057)

蒙成药冠心七味片由丹参、檀香、降香、山柰、肉豆蔻、广枣和沙棘七味药材制成［1-4］。活血化瘀、强心止痛，具有调节血脂和可抗动脉粥样硬化的作用［5-6］。吴燕红等对冠心七味片中的丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和对甲氧基桂皮酸乙酯进行了测定［7-9］，张丽华等对水溶性成分丹参素(DSS)进行了测定［10-11］。但对冠心七味片中的没食子酸(GA)、原儿茶酸(PA)、原儿茶醛(PHA)的同时测定尚未见报道。为了更全面地控制药物质量，本实验对冠心七味片中丹参素、没食子酸、原儿茶酸、原儿茶醛进行同时测定，旨在为全面评价冠心七味片质量提供参考方法。

1 材料

1.1 仪器 Agilent1100系列四元高效液相色谱仪(美国Agilent公司);Sartorius BP221S型万分之一电子天平(德国Sartorius公司);KQ5200DE型数控超声波清洗仪(江苏省昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 药品与试剂冠心七味片样品由辽宁康博士公司生产，片剂的规格为0.3 g/片。丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为:110855-200504，1100831-200302，110809-200503和 110800-200506);色谱纯甲醇(美国Fisher公司)，其他试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件 Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5μm);检测波长275 nm，流动相为甲醇-0.2%甲酸水线性梯度洗脱(0 min，8%甲醇);30 min，30%甲醇;体积流量0.7 mL/min;柱温25℃。图1为对照品、供试品和阴性样品色谱图。

图1 HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

2.2 对照品溶液的配制精密称取丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛对照品 1.2 mg、1.4 mg、1.6 mg和1.8 mg，分别置10 mL的量瓶中，用30%甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液，4℃ 储存备用。

2.3 供试品溶液的配制取样品，研细，精密称取冠心七味片0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50 mL 30%甲醇，密塞，称定质量，超声处理(功率300 W，频率60 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用30%甲醇补足减失的质量。摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液，4℃ 储存备用。

2.4 阴性供试品溶液的制备按照冠心七味片生产工艺制备［12］，制备缺丹参、广枣的阴性制剂，并按照供试品溶液的制备方法制备阴性供试品溶液。

2.5 线性关系考察精密吸取2.2项下对照品溶液适量，将其配成丹参素质量浓度为1.25、5、12.5、25、50和120μg/mL，没食子酸质量浓度为8.75、17.5、35、87.5、175和350μg/mL的系列对照品溶液。原儿茶酸质量浓度4、8、10、25、50、125和250μg/mL，原儿茶醛质量浓度为2.5、10、25、75、125、250和 375μg/mL的系列对照品溶液。在拟定色谱条件下测定，进样量为50μL，以进样量为横坐标，对应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛标准曲线分别为 Y=3.6504 X－17.805(r2=0.9998)、Y=26.178X －148.39(r2=1.0000)、Y=18.535X－102.42(r2=0.9996)和Y=19.529X－7.92(r2=0.9999)。结果表明，丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛分别在1.25～ 120μg/mL、8.75 ～350μg/mL、4.0 ～ 250μg/mL和2.5～375μg/mL质量浓度范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验精密吸取对照品溶液50μL(丹参素 12μg/mL，没食子酸 14μg/mL，原儿茶酸16μg/mL，原儿茶醛18μg/mL)分别连续进样5次，丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛峰面积的RSD值分别为1.9% 、1.2%、1.4%和1.7%，结果表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验取冠心七味片样品(批号20101204)5份，分别按2.3项下方法制备供试品溶液，并进行测定，丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛峰面积的RSD值分别为1.3%、2.8%、2.1%和1.1%。结果表明检测方法重复性良好。

2.8 稳定性试验精密吸取供试品溶液50μL(批号 20101204)，室温下放置 0、2、4、6、8、10、12、24 h分别进样，丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛峰面积的RSD值分别为1.6%、1.9%、1.3%和1.1%。表明样品在24 h内稳定性良好。

2.9 回收率试验取已知量的冠心七味片样品(批号20101204)0.5 g，平行6份，置50 mL量瓶中，分别加入丹参素(120μg/mL)、没食子酸(140μg/mL)、原儿茶酸(160μg/mL)、原儿茶醛(180μg/mL)对照品溶液10 mL，用30%甲醇稀释至刻度，按2.3项下供试品溶液制备方法进行制备，分别测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验Tab.1 Results of recovery tests

由表1可知，丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛的平均回收率分别为99.5%、96.3%、94.8%和97.5%。结果表明方法回收率良好。

2.10 样品测定按2.3项下的方法制备供试品溶液，进样量均为50μL，每批样品平行测定3次，记录峰面积，代入标准曲线，按照标准曲线法计算丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛的量。测定结果见表2。

结果发现，冠心七味片六个批次的样品中，丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛的平均质量分数分别为1.36 mg/片、0.73mg/片、0.20 mg/片和 0.14mg/片。与其他批号比较，批号为20081107的丹参素含有量较低，而原儿茶酸和原儿茶醛的量较高;其他批号各测定成分相对比较稳定。

3 讨论

药物内在的质量与疗效直接相关［13］，科学的质量标准是药物疗效的保证［14］，作为中药和中成药质量常规检测的分析技术，HPLC法极其重要［15］。本实验首先对冠心七味片的提取方法进行了考察，比较了纯水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇，75%甲醇以及100%甲醇。结果表明，30%甲醇对丹参素、没食子酸、原儿茶酸和原儿茶醛的提取效率最高，因此本实验选择30%甲醇作为提取溶剂。同时对提取时间也进行了考察，比较超声处理20、30、40、50 min。结果表明，超声30 min时所测定成分量基本达到最大，因此选择对样品超声提取30 min。