壮药妇雅净颗粒质量标准研究

王志萍，黎 芳，陈 勇，王 勤，贺 颖，黄 欢

(广西中医药大学药剂教研室，广西南宁 530001)

壮药妇雅净颗粒原方是广西壮医的经验方，由火炭母(拉丁名Polygonum chinensis;壮语名Gaeumei)、大血藤(拉丁名Phellodendri Cortex;壮语名Gaebengzlaz)、虎杖(拉丁名Polygoni cuspidate Rhizoma et Radix;壮语名Godienggangh)、蛇床子(拉丁名Cnidii Fructus;壮语名Gosezcangzswj)等壮药材为主，组成一个清热毒、除湿毒、灭虫毒、止瘙痒、消肿痛的壮药复方，在壮医临床实践中，用于子宫寒冷不孕，隆白呆(带下)，歇唅(阴痒)，能唅能累(湿疹)、京尹(痛经)，诺吟尹(筋骨酸痛)，林得叮相(跌打损伤)，痂(廯)，呗叮(疔疮)及呗农(痈疮)等症［1］，有很好的疗效。但由于汤剂形式不利于患者使用和贮存，本课题组在广西科技厅的大力支持下，拟把该汤剂研制成颗粒剂——壮药妇雅净颗粒。为了确保壮药妇雅净颗粒的质量，参考相关文献［2-8］，加上综合分析该颗粒的处方组成，方中的虎杖、蛇床子为主要组分，而虎杖苷和蛇床子素又是这两味药材的活性成分，故采用高效液相色谱法对颗粒中的虎杖苷和蛇床子素进行定量测定;考虑方中火炭母、大血藤、黄柏等也是较重要的组分，故采用薄层色谱法对颗粒中的火炭母、大血藤、黄柏进行定性鉴别;以全面确保壮药妇雅净颗粒的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 B3200S—T超声波清洗仪(北京BRANSON);BS224S电子天平(北京赛多利斯);Agilent 1100(DAD、VWD)高效液相色谱仪(美国安捷伦);快速水分测定仪(瑞士梅特勒托利多公司)。

1.2 试药 壮药妇雅净颗粒(广西中医药大学制剂工程中心研制，批号:110830，110831，110901);蛇床子素(1108022-200305)、虎杖苷(111575-200502)、槲皮素(100081-200406)、盐酸小檗碱(110713-200208)、大血藤、火炭母上述对照品和对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。实验用药材虎杖、蛇床子等，辅料糊精、硬脂酸镁质量符合《中国药典》2010年版标准。甲醇、乙腈为色谱纯;水为重纯化水;其他试剂为分析纯。

2 薄层鉴别

2.1 火炭母的薄层鉴别［2］取本品颗粒10 g，研细，过筛，加70%乙醇50 mL，盐酸3 mL，加热回流3 h，滤过，滤液做供试品溶液。精密称取槲皮素对照品，加乙醇制成每1 mL含0.5 mg槲皮素作为对照品溶液。另取处方中无火炭母的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录ⅥB)，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照在相应的位置上无斑点，展开系统的分离效果良好，结果见图1。

图1 火炭母薄层鉴别Fig.1 TLC chromatogram of Polygonum chinensis

2.2 大血藤的薄层鉴别［2］取本品颗粒10 g，研细，过筛，加50 mL甲醇超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2%氢氧化钠溶液100 mL使溶解，用盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取大血藤对照药材5 g同法制成对照药材溶液。按处方中称取无大血藤的药粉10 g，按供试品的制备方法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录ⅥB)吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶0.8)为展开剂。展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置显相同颜色的斑点。阴性对照在相应的位置上无斑点，结果见图2。

图2 大血藤薄层鉴别Fig.2 TLC chromatogram of Sargentodoxa cuneata

2.3 黄柏的薄层鉴别［2-3］取本品颗粒1 g，研细，过筛，加50 mL甲醇，加热回流30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。取黄柏对照药材50 mg，加甲醇5 mL，按供试品溶液的制备方法制备对照药材溶液。按处方中称取无黄柏的药粉0.5 g，同法制成阴性对照溶液。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇配制每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版中国药典一部附录ⅥB)，吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂。置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照在相应的位置上无荧光斑点，结果见图3。

图3 黄柏薄层鉴别Fig.3 TLC chromatogram of Phellodendri Cortex

3 定量测定

3.1 色谱条件 Waters色谱柱(250 mm×4.6 mm，4.5μm)，体积流量0.8 mL/min，柱温35.0℃，检测波长322 nm;以乙腈和水为流动相，梯度洗度，0～20 min(15%乙腈)，20～22 min(15% ～65%乙腈)，22～34 min(65%乙腈)。

3.2 对照品溶液制备 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的虎杖苷对照品适量，加50%乙醇制成每1 mL中含32μg虎杖苷的溶液，得虎杖苷对照品溶液。精密称取蛇床子素对照品适量，加50%乙醇制成每1 mL中含62μg蛇床子素的溶液，得蛇床子素对照品溶液。

3.3 供试品溶液制备 取妇雅净颗粒样品(110830)，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，加50%乙醇50 mL，称定质量，回流提取30 min，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀。滤过，取续滤液，即得。

3.4 阴性对照样品的制备 取缺虎杖和蛇床子的样品0.5 g，按供试品溶液的制备方法制备缺虎杖和蛇床子的阴性供试品溶液。

3.5 干扰性试验考察 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各5μL，依照上述色谱条件测定，记录色谱图，阴性供试品溶液在选定条件下，其图谱在虎杖苷和蛇床子素位置处无相应的色谱峰，且虎杖苷和蛇床子素的色谱峰能与其他组分的色谱峰达到基线分离，说明阴性无干扰，结果见图4。

图4 虎杖苷和蛇床子素HPLC色谱图Fig.4 HPLC chromatograms of polydatin and osthole

3.6 线性关系考察 按3.1项色谱条件，分别吸取虎杖苷、蛇床子素对照品溶液2、5、10、15、20μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，分别得回归方程。结果见表1。

表1 线性回归方程(n=5)Tab.1 Equations of linear regression(n=5)

3.7 精密度试验 分别精密吸取虎杖苷和蛇床子素对照品溶液5μL，重复进样5次，测定峰面积，虎杖苷、蛇床子素峰面积的RSD分别为0.79%和0.83%(n=5)，表明仪器精密度良好。

3.8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液5μL，于0、1、2、3、5、12、24 h进样，记录每次进样的峰面积。结果虎杖苷、蛇床子素RSD分别为0.66%和1.05%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.9 重复性实验 精密称取同一批样品(110830)，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，按照3.1项色谱条件，测定峰面积，虎杖苷和蛇床子素的平均质量分数分别为3.45 mg/g和1.05 mg/g，RSD分别为0.35%和0.46%，表明该方法的重复性较好。

3.10 加样回收试验 精密称取己知含有量的样品(110830)6份，每份0.25 g，分别加虎杖苷对照品溶液5 mL，蛇床子素对照品溶液5 mL，加50%乙醇定容至50 mL。按成品供试液制备方法制备试液，依法测定各样品中虎杖苷和蛇床子素的量，计算回收率。结果见表2、表3。

表2 虎杖苷加样回收试验结果(n=6)Tab.2 Results of revovery tests for polydatin(n=6)

表3 蛇床子素加样回收试验结果(n=6)Tab.3 Results of revovery tests for osthole(n=6)

3.11 样品测定 取3批样品，研细，分别精密称取0.5 g，按供试品溶液的制备方法制备样品溶液。分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各5μL，按3.1项下色谱条件测定，结果见表4。

表4 样品测定结果(n=3)Tab.4 Results of sample determination(n=3)

4 讨论

4.1 实验前比较了两种不同展开系统在黄柏薄层色谱鉴别中展开效果，分别为乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)和石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)［4］，结果在与对照品色谱的相应位置处，均显相同颜色斑点，阴性均无干扰。但后者分离效果较差，且出现明显的拖尾现象，故选择前者作为黄柏薄层色谱中的展开系统。

4.2 虎杖苷为虎杖中的主要有效成分，具有祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰的功效，临床用于治疗慢性盆腔炎、高血脂症、上呼吸道感染等疾病［9-10］，壮医临床用于除湿毒、通龙路、清热毒、祛风毒。治疗蚌(黄疸)，京瑟(经闭)、发旺(风湿骨痛)、林得叮相(跌打损伤)、呗农(痈疮)、埃病(咳嗽);外治渗裆相(烧烫伤)［11］。蛇床子素是蛇床子的主要有效成分，具有温肾壮阳、燥湿、祛风、杀虫的功效，临床多复方形式用以治疗宫颈炎，外阴及肛门部瘙痒，湿疹，龟头包皮念珠菌病，滴虫等疾病［12-14］，壮医临床多用于除湿毒，祛风毒，补肾阳，杀虫毒，止瘙痒。治疗委约(阳痿)，腰痛，子宫寒冷不孕，隆白呆(带下)，歇唅(阴痒)，能唅能累(湿疹)［11］。

4.3 因虎杖苷与蛇床子数最大紫外吸收波长不同，UV光谱扫描虎杖苷最大吸收波长为306 nm、317 nm，蛇床子素的最大吸收波长为322 nm。经测定虎杖苷在306 nm、317 nm的吸光度与在322 nm的吸光度值相差不大，而蛇床子在306 nm的吸光度仅322 nm的吸光度值73.06%，为能在同一波长下同时测定两物质，因此选择322 nm为测定波长。

4.4 比较了超声提取30 min和热回流30 min提取方法两种提取方法，结果表明:热回流提取出的虎杖苷和蛇床子素的量较超声提取的高许多，因此，选择热回流提取方法进行提取。

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