牛血液采集及血清分离技术

李 强

（1.甘肃省张掖市甘州区动物疫病预防控制中心，甘肃 张掖 734000；2.国家肉牛产业技术体系张掖综合试验站，甘肃 张掖 734000）

近年来各级畜牧兽医部门，每年都需要对畜禽进行采血及血清分离的工作，数量逐年增多且日趋频繁，如血常规检查、血片制作、红细胞泥采集分离、病原学检查，尤其是一年数次的抗体（免疫抗体、感染抗体）监测及范围广泛的布鲁氏杆菌病检疫监测等。在工作中发现，有的技术人员在采血及分离血清时，时常有失败现象发生，如溶血、分离不出血清、血清如胶冻样物质及腐败等情况，这导致反复采血而引起养殖场户的反感、不配合甚至拒绝，也造成人财物的浪费，为此，笔者现将畜禽采血及血清分离技术等方面的一些做法与大家探讨。

1 材料准备

保定用牛缰绳、麻绳、牛鼻钳，医用镊子、止血钳、医用胶贴、医用止血带、剪毛剪，微量移液器、移液头，70%～75%酒精、5%～10%碘酊、灭菌干棉球，消毒18＃、16＃、12＃及9＃针头，采血管或洁净干燥的青霉素瓶、一次性静脉采血真空管及针头、一次性注射器，工作服、帽、口罩、一次性手套、胶鞋、鞋套，采血登记表（见表1）、记录用笔、玻璃铅笔及冷藏箱、消毒液（用于工作人员及器械消毒）等。

表1 采血登记表 年月 日

2 牛的采血技术

2.1 牛血液采集技术

2.1.1 颈静脉采血法 穿戴好工作服、帽、口罩、胶鞋及手套等，用缰绳保定好牛，如牛跳动不安，需要夹上牛鼻钳；采血部位：其解剖位置为牛颈静脉沟；采血部位先用剪毛剪剪毛后，用10%碘酊棉球消毒，再以75%酒精棉球脱碘消毒；如在颈部左侧采血（以左侧为例），用左手的食指、中指及无名指（或半握拳）压住采血部位稍下（向心）端的颈静脉，使静脉回流受阻，静脉怒张，这时用右手拇指、食指及中指持紧消毒后并干燥的18＃针头，用飞针方式扎入颈静脉（如用真空采血方法，因针头尖锐且较细，轻轻即可刺入颈静脉，当针头后方见血后，应迅速将连接针头的另一端插入真空管），血液便可从针头流出（或滴出），助手迅速递上已编号的采血管，接血时采血管应稍倾斜，使血液沿管壁徐徐流入采血管中，切勿使血液直接滴入采血管底部，以免产生气泡和因红细胞破裂而引起溶血。采够要求的血液量时，迅速拔出针头，立即用灭菌棉球按压止血5s左右，再用5%碘酊消毒伤口。采血完毕后，将采血管的管口盖紧并平放或斜置，待血液完全凝固后再放入冷藏箱。

2.1.2 牛尾中静脉采血法 首先将牛缰绳拴牢（应尽可能拴短一些，以减少牛的活动范围），采血者站在牛正后方，用左手将牛尾1／2处握紧并尽量举高，使牛尾从尾根处自然抬起，与背中线垂直，避免在中间形成弯曲或偏向一侧，防止牛会因疼痛而躁动不安，影响正常操作；右手持采血器（或一次性注射器，选用2.50～3.75cm 长的12＃针头为宜），在尾根中线腹侧，距肛门10cm 左右（采血部位的解剖位置是：第2 与第3 尾椎之间）的凹陷部正中处，先用10%碘酊消毒、再用75%酒精棉球脱碘消毒，在该处垂直于尾纵轴进针约1cm 左右，然后试着抽吸，若无回血，可将针头缓慢退出1～5mm，再抽吸即可采出血液。其它与牛颈静脉采血相同。

2.1.3 牛乳静脉采血法 母牛乳房发育较好且乳静脉明显的，也可在乳房静脉采血；这时需要用结实的绳子，将牛两后肢分别拴牢（两后肢中间应有约20～30cm 左右的距离）的方法保定好；常规消毒后，用一次性注射器或真空采血管采血。

3 采集的血液保存及血清分离技术

采集的血液趁未凝固前将采血管平放或斜置，以增加血清析出面；在血液未完全凝固前，严禁晃动采血管，以防溶血；待血液完全凝固后，将采血管置于冷藏箱内，冬季置于较为温暖的地方，切忌冻结；夏季置于阴凉处，以防腐败。

采集的血液凝固后，在室温下一般12h内即可析出血清，在炎热的夏季，3～6h 即可充分析出血清，此时应及时将血清移出，以防腐败及因晃动采血管等因素而影响血清质量；有时血清析出量少或未析出血清的，可把凝固后12h以上的全血，置于离心机内（放置采血管时需要注意的是：离心机是否平衡，掌握好管的大小、长度和对侧放置的管内血液容量是否一致等），离心分离血清（3 000～4 000r／min，离心时间为2～3 min），使血清析出，待血清析出后，用移液器小心（移液头尖端部勿触及凝血块，以防影响血清质量）将血清移入另一洁净、干燥、无菌试管或小瓶中。分离后得到的血清，应尽快用冷藏或冷冻方法保存，及时送到实验室进行检验。

4 常见不良“采血法”导致的结果

1）不剪毛、不消毒，导致皮毛上的杂物及病原微生物等污染针头、掉入采血容器，影响血清质量，造成动物发生感染和养殖户的反感。

2）用自来水煮沸消毒的针头，不经干燥、不用力甩净针头内的水、或不用灭菌生理盐水冲洗，因为水与血液是不等渗的，采集的血液很容易出现溶血现象。

3）用1个针头采数头只牛，导致血清质量差及溶血，也会造成畜禽间的交叉感染，畜主也很反感。

4）用酒精浸泡后的针头直接采血，容易造成溶血。

5）个别人员专业技术素质差，采不出血就用采血管直接在出血的皮肤处接、或未剪毛时在毛尖上接血，更有甚者，将畜禽屠宰后用采血管接，这时的组织液、各种杂物随同血液进入采血管，这样的血液含有大量的微生物、杂质等，会导致血液受到污染、溶血，分离出的血清呈胶冻样，这样的“血清”当然是不能用的。

5 讨论与分析

1）采血人员要合理分工，如采血员、保定员、记录员、器械递送员等，不要慌乱，不可漏采和重复采，注意人畜安全。

2）采血时间应在，早晨喂饲前或停食（但要保证充足的饮水）后6h进行，以免出现血清混浊等质量问题。

3）使用一次性注射器、连试管式的真空采血器，避免因器械消毒不严，操作人员直接接触动物血液受到病原微生物感染及畜禽人为的疫病传播。

4）在采血和分离血清时做到①采血针头、瓶（管）洁净、干燥、无菌；②采血过程中确保人畜安全；③采血时按“畜（禽）采血登记表”逐一详细登记；④采血时必须无菌操作，不溶血、无污染、无腐败；⑤做到表、号、血、畜四统一，以防混淆。

5）牛尾中静脉采血法的优缺点 对牛应激反应微小，牛不需要特殊的保定，此种操作方法相对比较安全，不影响乳牛的产奶量；操作简便，采血人员容易掌握；具有单人即可操作、采血快速、保定简单、防止人畜受伤等优点。但不适用于犊牛的血液采集，以免造成犊牛尾部血管的永久性损伤。

笔者每年都要进行大量的牛采血、血清分离及实验室检验监测工作，每年采血少时上百头只，多时上千头只，通过20多年的经验总结，无感染、无溶血、无腐败及事故等等现象发生。