高效液相色谱法测定阿奇霉素片中阿奇霉素含量*

韩振爽，李玮玮

(天津怀仁制药有限公司，天津 300385)

阿奇霉素片抗嗜肺军团菌、流感嗜血杆菌，对革兰阴性菌具有更高的抗菌活性，对肺炎支原体的作用为大环内酯类中最强者，不良反应轻，轻、中度肝肾功能不良者可以应用。本实验采用高效液相色谱法测定阿奇霉素片的含量，结果准确，精密度高，重现性好。

1 仪器与试药

Waters 2690高效液相色谱仪(美国Waters公司)，Waters 2487紫外检测器(美国Waters公司)。KQ－100B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。阿奇霉素片(天津怀仁制药有限公司，批号110101、110102、110103)。乙腈为色谱纯，磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、盐酸与乙醇为分析纯，水为纯化水。阿奇霉素对照品(法国进口，批号CS30026－F67081)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱Thermo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相磷酸盐缓冲液(取0.05 mol/L 磷酸氢二钾溶液，用20%的磷酸溶液调节pH至8.2)－乙腈(45∶55)为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为210 nm，进样量为 50 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取阿奇霉素对照品适量，加乙腈溶解并定量稀释制成每1 m l中约含阿奇霉素1 mg的溶液，作为对照溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，研细粉，精密称取适量，加乙腈溶解并定量稀释制成每1 ml中约含阿奇霉素1 mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例和工艺制备不含阿奇霉素的阴性样品，并按供试品溶液的制法制成阴性对照溶液，备用。

2.3 专属性考查 在上述色谱条件下，精密吸取对照溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各50 μl注入液相色谱仪，阿奇霉素的保留时间为26.881 min，样品色谱图中，在与对照品溶液色谱图相应保留时间处，有相同色谱峰，而阴性样品在此处无干扰，色谱图见图1。

2.4 线性关系考查 精密称取阿奇霉素对照品适量，配成浓度为 0.60、0.80、1.0、1.2 和 1.4 mg/ml的系列溶液，分别精密吸取50 μl注入液相色谱仪，以浓度(C)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程 Y=2965.6 C+9005.9(r=0.9998)，结果表明阿奇霉素在0～1.4 mg/ml范围内线性关系良好。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.5 重复性试验 取同一对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样6次，RSD为0.58%(n=6)，结果表明方法的重现性良好。

2.6 溶液稳定性试验 取同一供试品溶液，在室温下放置，分别于0、2、4、6和8 h时分别按上述色谱条件测定，结果表明，供试品溶液在8h内稳定性良好，峰面积的RSD为1.40%。

2.7 加样回收率试验 精密称取空白混合辅料适量，加入阿奇霉素对照品分别做80%、100%和120%三个浓度的回收率，每个浓度做3份样品共9份，按上述色谱条件下测定含量，计算回收率，平均回收率为99.6%，RSD 为 0.56%(n=9)，结果见表 1。

表1 加样回收试验结果

2.8 样品测定 取3批样品按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取对照溶液和供试品溶液各50 μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图。用外标法计算样品的含量分别为 0.2455、0.2485 和 0.2465 mg/片。

3 讨论

3.1 适用性试验 取阿奇霉素系统适用性对照品适量，加乙腈溶解并稀释制成每1 ml中含10 mg的溶液，取50 μl注入液相色谱仪，色谱图与标准图谱一致。

3.2 耐用性试验 本方法采用［Thermo C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK MGⅡ C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、SMA C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)］不同型号色谱柱，测定同批样品(110101)含量，测定结果基本一致。本方法与抗生素微生物检定法相比专属性强，灵敏度高，准确度和重复性好，省时方便，可以作为控制阿奇霉素含量测定的有效手段。