舒血宁注射液中5-羟甲基糠醛的含量测定*

苏雪清，黄燕萍

(1.广西北海市人民医院，北海 536000;2.广西北海市食品药品检验所，北海 536000)

舒血宁注射液为银杏叶经提取制成的灭菌水溶液，收载于中药成方制剂第十九册。该药具有扩张血管，改善微循环的功效，临床用于缺血性心脑血管疾病、冠心病、心绞痛、脑栓塞、脑血管痉挛等。近年来，中药注射剂的用药安全性引起了越来越多人的注意，5－羟甲基糠醛是葡萄糖或者果糖在高温或酸性等条件下脱水产生的一个醛类化合物。该化合物对人体横纹肌和内脏有损害。在《中国药典》2010年版中，多品种含葡萄糖的注射液中此类化合物是明确规定需要被限制的成分。从银杏叶中分离的化学成分已被证实有200多种，包括黄酮醇苷类、萜类内酯类、有机酸、甾醇类、生物碱类、单糖类、多糖类、氨基酸类以及微量元素等［1］。由于含有糖类，在生产和贮藏制剂时不可避免产生5－羟甲基糠醛。本实验参考有关文献［2－5］，建立了HPLC法测定舒血宁注射液中5－羟甲基糠醛的含量，以控制该制剂中有害杂质的量，降低该药的用药风险。方法简便，准确可靠，可作为该制剂的质量控制方法之一。

1 仪器与试药

Agilent 1200系列高效液相色谱仪，Agilent 1200 LC色谱工作站，G1322A(DEGASSER)溶剂脱气机，G1311A(Quat Pump)四元泵，G1329A(ALS)自动进样器，G1314B VWD紫外检测器，CP225D电子天平(德国赛多利斯)，Type HT－203A column HEATER(天津市恒奥科技发展有限公司)。

5－羟甲基糠醛对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号111626－200906，用归一化法测定其含量为99.11%);舒血宁注射液(河北神威药业有限公司，批号11110533、11112333;山西太原药业有限公司，批号111014);甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse XDB－C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相为甲醇 － 水(5∶95);流速:0.8 ml/min;检测波长:284 nm;柱温:30℃;进样量:10 μl。理论板数按5－羟甲基糠醛计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液的制备 精密称取5－羟甲基糠醛对照品适量，以水为溶剂，配制成含5－羟甲基糠醛0.1996 mg/ml的贮备液。

2.2.2 供试品溶液的制备 将舒血宁注射液摇匀后直接取样用微孔滤膜(0.45 μm)滤过即可。

2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液注入色谱仪，色谱图见图1。在该色谱条件下，5－羟甲基糠醛与相邻组分峰的分离度均大于1.5，理论板数按5－羟甲基糠醛峰计不低于3000。

图1 对照品(A)供试品(B)HPLC色谱图

2.4 线性关系考查 倍比稀释法配置成系列质量浓度的溶液。进样10 μl，测定峰面积。以浓度(C)为横坐标，相应峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程:A=94.178 C+4.7512(r=0.9999)，线性范围:0.099 80 ～49.902 μg/ml。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，按上述色谱条件进样，测定5－羟甲基糠醛的峰面积，重复进样6次，其RSD为0.16%。

2.6 重复性试验 取同一批样品6份，依“2.2.2”项下方法配制，按上述色谱条件进样分析，结果表明，重复性良好，其RSD为0.23%。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、1、2、4、6、8、10 和 12 h 时进样 10 μl，记录色谱峰面积，计算5－羟甲基糠醛的峰面积的RSD为0.95%。

2.8 加样回收率试验 精密量取已测定5－羟甲基糠醛含量的舒血宁注射液(批号11110533)样品6份各5 ml，置10 ml的量瓶中，每份分别精密加入一定量的5－羟甲基糠醛对照品，加水至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，进样测定，计算加样回收率。结果平均回收率为100.06%，RSD为0.45%。见表1。

表1 5－羟甲基糖醛加样回收试验结果(n=9)

2.9 样品测定 取不同批号的舒血宁注射液，按供试品溶液制备方法处理，进行HPLC分析，以外标一点法计算5－羟甲基糠醛的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 许多中药材都含有糖类，在提取过程中皂苷类等成分受热后苷键断裂，导致糖类成分的产生;也有可能某些生产企业利用添加葡萄糖来调节注射液的渗透压而导致注射液中葡萄糖含量的提高。过量的5－羟甲基糠醛会对人体产生毒性，因此在含葡萄糖或可以降解成葡萄糖的中成药注射液中，5－羟甲基糠醛应作为一个重要的有关物质加以控制，确保中成药注射液的用药安全。

3.2 本文建立了HPLC法测定舒血宁注射液中5－羟甲基糠醛含量的方法，供试品无需前处理，快速简便，准确可靠，为舒血宁注射液的质量控制提供了依据。

1 于清萍，宁营.银杏叶提取物的研究进展及市场概况［J］.上海医药，2010，31(8):342

2 谭俊杰，柴建国，张善飞，等.参麦注射液中5－羟甲基糠醛含量的高效液相色谱测定［J］.时珍国医国药，2011，21(7):1624

3 徐世霞.HPLC法测定生脉注射液中5－羟甲基糠醛的含量［J］.中国民族民间医药，2011，20(14):36

4 张科卫，吴皓.小半夏汤中5－羟甲基糠醛的含量测定［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(13):51

5 孙文，巢志茂，王淳，等.HPLC对市售瓜蒌中5－羟甲基糠醛的含量测定［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(18):73