高效液相色谱法测定益心舒胶囊中黄芪甲苷的含量
2013-10-19天津市宝坻区药品检验所301800杨小孟
天津市宝坻区药品检验所（301800）杨小孟
益心舒胶囊由人参、麦冬、五味子、黄芪、丹参、川芎、山楂7味中药组成，是目前十分有效的治疗冠心病心绞痛的药物。其质量标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十三册》中，无含量测定指标。黄芪为其主要成分，具有益气固表作用[1]。为能控制制剂质量，保证疗效，本文采用HPLC法测定了其黄芪甲苷的含量。
1 仪器与试药
岛津HPLC-2010AHT型高效液相色谱仪；梅特勒-托利多AG135型电子天平。黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110781-200613）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯；益心舒胶囊（贵州信邦制药有限公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（40∶60）；柱温：40℃；进样量：10μL；检测波长：205nm。理论塔板数按黄芪甲苷计算应不低于3000。
2.2 溶液制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含25μg的对照品溶液。取装量差异项下的样品内容物，研细，取约0.4g，精密称定，加入三氯甲烷提取3次，每次30mL，弃三氯甲烷液；残渣加水饱和的正丁醇提取5次（30，30，20，20，10mL）并合并，加氨水洗涤2次，每次50mL，弃氨水洗液，分取正丁醇液，水浴蒸干；残渣加乙醇5mL溶解，通过D101型大孔树脂柱（内径1.5cm，长12cm），50mL水洗脱，弃洗脱液，用80%乙醇70mL洗脱，收集洗脱液，蒸干；残渣用甲醇溶解并转移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。取益心舒胶囊的阴性样品，同法制备。
2.3 方法学考察
2.3.1 专属性试验 取2.2项下3种溶液，按拟订的色谱条件测定。结果表明阴性对照无干扰。
2.3.2 线性关系考察 精取黄芪甲苷对照品20.21mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，分别精密量取1.0，2.5，5.0，7.5，10.0mL，置20mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精取l0μL进样，以峰面积为纵坐标、对照品质量浓度（μg/mL）为横坐标进行线性回归，回归方程为Y=41.843X-4.2039，r=0.9999（n=5）。表明黄芪甲苷质量浓度在0.04042～0.4042mg/mL之间与峰面积有良好的线性关系。
2.3.3 精密度试验 取同一份对照品溶液，按上述条件连续进样测定黄芪甲苷峰面积得RSD为0.29%（n=6）。
2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，每隔一定时间进样1次，测定黄芪甲苷峰面积得RSD为2.11%（n=6），表明供试品溶液在8h内稳定。
2.3.5 重现性试验 取同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量。结果平均含量为2.37mg/粒，RSD为0.25%（n=6）。
附表 黄芪甲苷加样回收试验结果（n=6）
2.3.6 加样回收试验 分别称取已知含量的样品适量，精密加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量，计算回收率，见附表。
2.4 样品含量测定 取供试品溶液和对照品溶液，各进样10μL，以峰面积按外标法计算含量。结果分别为2.37、2.27、2.33mg/粒，平均2.32mg/粒。
3 讨论
比较了以甲醇-水（30∶70）、甲醇-水（40∶60）、乙腈-水（30∶70）、乙腈-水（40∶60）为流动相时的效果，发现后者为最佳流动相。试验结果显示，采用三氯甲烷处理样品时，杂质干扰少，分离效果好，便于测定黄芪甲苷含量。
