清音丸改剂型前后对免疫低下模型小鼠作用的比较研究

北京市药品检验所（100035）李雪梅 周建平 胡宇驰

清音丸主要由诃子肉、川贝母、百药煎、乌梅肉、葛根、茯苓、甘草、天花粉以上入味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末用炼蜜40～50g加适量的水泛丸，干燥，制成水蜜丸；或加炼蜜110～130g制成大蜜丸，即得。具有清热利咽，生津润燥的功效，主要用于治疗肺热津亏导致的咽喉不利、口舌干燥、声哑失音。清音片是在清音丸原剂型—水蜜丸、大蜜丸的基础上改变剂型而成，产品提取率为2.5g生药/g清音片药粉，制成片剂。清音片拟定具有与原剂型清音丸相同的功能主治，其临床使用量与清音片相同（折合生药量）。我中心深入研究了清音丸、片对免疫系统功能的影响，现将结果报告如下。

1 材料

1.1 药品 本试验用清音片药粉（批号：100217，产品提取率为2.5g生药提取1g清音片）、清音丸蜜丸药粉（批号：100215）均由北京同仁堂股份有限公司科学研究所提供；参芪颗粒（批号：20100302)，江西山高制药有限公司；清喉利咽颗粒（批号：100902），天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂；布洛芬片（批号：20100106），北京太平洋药业有限公司。

1.2 动物 SD大鼠，ICR小鼠，均为SPF级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK（京）2009-0006号。

1.3 试剂 伊文思兰（批号：871225），中国医药公司北京采购供应站；丙酮（批号：20100615），北京化工厂；注射用环磷酰胺（批号：10070821），江苏恒瑞医药股份有限公司。

1.4 仪器 TU-1901双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

2 方法[1][2]

2.1 对免疫功能低下小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响（小鼠碳粒廓清法） ICR小鼠，雌雄各半，体重18～20g，按体重随机分成9组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、清音丸、清音片大、中、小剂量组（按生药量计，0.910g/kg，0.455g/kg，0.228g/kg），参芪颗粒阳性对照组（1g/kg），每天Ig给药，连续给药14d。除空白对照组外，其余各组分别于给药后第8d、10d给予每只小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，造成小鼠免疫功能低下模型，于末次给药后1h，给予每只小鼠尾静脉注射印度墨汁10mL/kg，注射后1min、5min分别从小鼠眼静脉丛取血20μL，溶于0.1%Na2CO3溶液中摇匀，在680nm处测定吸光度（A），最后将小鼠颈椎脱臼处死，分别称取肝脾重量。按下列公式计算廓清指数（K）和校正廓清指数（a），×体重/（肝重+脾重）。

2.2 对二硝基氯苯致小鼠迟发型超敏反应的影响试验 ICR小鼠96只，雌雄各半，体重18～20g，按体重随机分成8组，每组12只，分别为空白对照组，清音丸、清音片大、中、小剂量组（按生药量计，0.910g/kg，0.455g/kg，0.228g/kg），参芪颗粒阳性对照组（1g/kg）。试验前一天用刀片对小鼠腹部进行脱毛，第二天将50%DNCB丙酮溶液2μL/只涂于小鼠腹部脱毛区进行致敏，致敏后按20mL/kg开始给药，对照组给予同体积去离子水。连续给药12d后，于小鼠腹部脱毛区涂2.5%DNCB丙酮溶液20μL/只进行攻击。24h后，每鼠尾静脉注射1%伊文思兰10mL/kg。30min后处死小鼠，取下腹部蓝染皮肤，剪碎，置试管中，用1∶1丙酮生理盐水混合液4mL浸泡24h后，离心取上清液，于610nm处测定吸光度（A），各组进行比较。

2.3 对免疫功能低下小鼠血清溶血素形成的影响（溶血素法） ICR小鼠108只，雌雄各半，体重18～20g，按体重随机分成9组，每组12只，分别为空白对照组，模型对照组，清音丸、清音片大、中、小剂量组（按生药量计，0.910g/kg，0.455g/kg，0.228g/kg），参芪颗粒阳性对照组（1g/kg），按20mL/kg每天Ig给药，连续给药14d。给药后第7d，各组动物按0.2mL/只腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水混悬液进行免疫。除空白对照组外，其余各组分别于给药后第8d、10d，给每只小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，造成小鼠免疫功能低下模型。并于免疫后第6d，各组动物取血，将血清稀释1倍（稀释血清）。取稀释血清0.25mL，与5%鸡红细胞0.125mL、10%豚鼠血清（补体）0.125mL作用后，在37℃恒温箱中保温30min后，0℃冰箱终止反应后离心，取上清液于540nm处测定吸光度（A），各组进行比较。

3 结果

3.1 清音片对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响（小鼠碳粒廓清法） 对腹腔注射环磷酰胺造成免疫低下模型小鼠Ig清音片，在0.910g生药/kg剂量下，碳粒廓清指数与模型对照组比较有显著性意义，提示清音片能增强小鼠网状内皮系统单核巨噬细胞的吞噬功能，即能增强小鼠免疫功能[3]。而清音丸对小鼠廓清指数则未见明显影响，结果见附表1。

3.2 清音片对二硝基氯苯致小鼠迟发型超敏反应的影响试验 试验结果表明：小鼠口服清音丸、清音片，对DNCB致小鼠迟发型超敏反应无明显影响作用。但从吸光度值上看，清音丸、清音片吸光度值较空白对照组较高，且清音丸组吸光度值较清音片组较高，由此推断如给药剂量增加，可能会增强细胞免疫的作用[3][4]，结果见附表2。

3.3 清音片对免疫低下小鼠血清溶血素形成的影响（溶血素法） 试验结果表明：给药14d后，在0.910g生药/kg剂量下，清音片能明显增加免疫低下模型小鼠血清抗原抗体反应量，其血清反应的吸光度值与模型对照组比较差异有显著性意义。由此可见，对腹腔注射环磷酰胺造成免疫低下模型小鼠，清音片对鸡红细胞所致小鼠特异性抗体生成有明显促进作用，反映清音片具有一定增强体液免疫的作用[3]，结果见附表3。

4 讨论

清音片是在清音丸的基础上改变剂型而成。本方中诃子肉敛肺，涩肠，下气。川贝母润肺散结，止咳化痰。百药煎润肺化痰，生津止渴。乌梅肉收敛生津，安蛔驱虫。葛根解表退热，生津透疹，升阳止泻。茯苓利水渗湿，健脾宁心。甘草补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和药性。天花粉清热生津，消肿排脓。多药并用，共奏清热利咽、生津润燥之效。现代临床主要用于治疗慢性咽炎[3]。

机体免疫系统是由非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫共同构成。机体免疫功能低下可致感染、肿瘤等多种疾病。文献报道，清音丸在2g/kg剂量时具有增强小鼠非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫，增强机体免疫功能对治疗慢性咽炎具有一定作用[3]。

附表1 清音片对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响（ ±s，n=10）

附表1 清音片对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响（ ±s，n=10）

注：与空白对照组比较，1）P＜0.05；与模型对照组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01。

组别 给药剂量（g/kg） 廓清指数（k） 校正廓清指数（a）空白对照 - 0.09±0.022) 6.36±0.88模型 - 0.05±0.02 5.94±1.39清音片0.910 0.09±0.022) 6.82±0.71 0.455 0.06±0.01 6.31±0.90 0.228 0.06±0.01 6.36±0.70 0.910 0.06±0.01 7.02±0.96 0.455 0.06±0.04 6.01±1.62 0.228 0.08±0.02 7.07±0.71参芪颗粒 1 0.09±0.032) 7.44±1.083)清音丸

附表2 清音片对DNCB致小鼠迟发型超敏反应的影响试验（ ±s，n=12）

附表2 清音片对DNCB致小鼠迟发型超敏反应的影响试验（ ±s，n=12）

注：与空白对照组比较， 1）P＜0.05；与模型对照组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01。

组别 给药剂量（g/kg） 吸光度值（Abs）空白对照 - 0.44±0.18清音片0.910 0.53±0.22 0.455 0.45±0.13 0.228 0.45±0.14 0.910 0.58±0.13 0.455 0.52±0.13 0.228 0.47±0.22参芪颗粒 1 0.66±0.191)清音丸

附表3 清音丸、清音片对小鼠血清溶血素形成的影响（ ±s，n=12）

附表3 清音丸、清音片对小鼠血清溶血素形成的影响（ ±s，n=12）

注：与空白对照组比较，1）P＜0.05；与模型对照组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01。

组别 给药剂量（g/kg） 吸光度值（Abs）空白对照 - 0.60±0.103)模型对照 - 0.36±0.08清音片0.910 0.51±0.102)0.455 0.41±0.11 0.228 0.30±0.11 0.910 0.49±0.122)0.455 0.38±0.17 0.228 0.36±0.11参芪颗粒 1 0.58±0.143)清音丸

本文主要从对免疫系统功能作用影响方面比较了清音片和清音丸的主要药效作用。对腹腔注射环磷酰胺造成免疫低下的小鼠，在非特异性免疫功能试验中，吞噬指数K反映网状内皮系统的吞噬功能，吞噬活性a则反映单核巨噬细胞的吞噬能力。

试验结果表明，清音片非特异性免疫功能作用效果优于清音丸；在二硝基氯苯致小鼠迟发型超敏反应试验中，二硝基氯苯是小分子半抗原，将其涂于皮肤上，可透过上皮与角质蛋白及胶原蛋白结合成全抗原，并刺激T淋巴细胞转化为致敏淋巴细胞，分布于全身皮肤内。以二硝基氯苯攻击，即可见攻击部位形成迟发型皮肤过敏反应。试验结果表明，清音片、清音丸没有增强细胞免疫的作用。血清溶血素的测定主要反映抗体形成的数量，也提示合成抗体的能力，是反映体液免疫的重要指标。在血清溶血素试验中，清音丸和清音片以0.910g/kg剂量下都有增强免疫的作用。

综上所述，清音丸由蜜丸改成片剂后，在本试验剂量和试验条件下具有增强体液免疫和非特异性免疫功能的作用。