EDTA抗凝导致血小板假性减少的原因探讨

南京医科大学附属江宁医院（211100）徐勇

血小板具有维持血管内皮完整性的功能与黏附、聚集、释放、促凝和血块收缩的功能。血小板计数是测定全血中血小板的浓度，是止血凝血检查最常用的试验之一[1]。

正常状态下，血小板在血管内以单个形式循环，并不与其他细胞类型和其他血小板相互作用。当血小板数量、质量异常时可引起出血性疾病。数量减少常见于血小板减少性紫癜、脾功能亢进、再生障碍性贫血和白血病等。数量增多常见于原发性血小板增多、真性红细胞增多症、慢性粒细胞白血病等。

随着现代科学技术的发展，医院检验人员的主要工作是运用各种先进的仪器设备和熟练的检验技术，对各类标本进行正确的处理分析，为临床诊断和治疗提供准确有效的实验数据。对于血小板计数通常是利用各种先进的全自动血细胞分析仪快速高效提供实验数据为临床诊治服务。但在某些病理因素下，出现了仪器数据与临床病情不相符的情况。我科结合仪器分析、推片、染色、镜检，同时做末梢血人工血小板计数发现，其中的EDTA抗凝血可导致仪器血小板计数的假性减少的现象。

1 资料与方法

1.1 资料 病历摘要1：某女性患者，28岁，孕34周，入院待产。查体：T 37.0℃，P 80次/min，BP 110/65mmHg。彩超显示：BPD 9.5cm，FL 6.4cm，胎盘前壁0～2级，单胎头位。实验室检查：肝肾功能、凝血功能均正常。血常规：SYSMEX XT-2000i血球仪测得RBC 3.97×1012/L，Hb 118g/L，WBC 9.6×109/L，PLT 17×109/L。用迈瑞BC5300血球仪复查结果为RBC 3.88×1012/L，Hb 116g/L，WBC 9.9×109/L，PLT 20×109/L。检验结果报告发出后，临床医生认为与产妇症状不符，要求复查。

病历摘要2 ：某女性患者，68岁，白内障入院待手术。查体：T 37.2℃，P 70次/min，BP 135/85mmHg。实验室检查：肝肾功能、凝血功能均正常，但血糖15.2mmol/L；血常规：SYSMEX XT-2000i血球仪测得RBC 3.42×1012/L，Hb 108g/L，WBC 7.6×109/L，PLT 27×109/L。用迈瑞BC5300血球仪复查结果为RBC 3.48×1012/L，Hb 106g/L，WBC 7.9×109/L，PLT 32×109/L。检验结果报告发出后，临床医生认为与患者症状不符，要求复查。

鉴于上述情况的出现，我科检验人员遂自带EDTA-K2抗凝管、枸橼酸钠抗凝管和肝素锂抗凝管各一支，亲自到病房给这2例患者同时抽了三管加了不同抗凝剂的血，分别用两台血细胞分析仪作血细胞分析，同时推片、染色、镜检，同时采集患者末梢血进行人工血小板计数，以进一步确定产生上述情况的原因。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 迈瑞BC 5300五分类血细胞分析仪，SYSMEX-XT 2000i五分类血细胞分析仪及相关配套试剂。

1.2.2 显微镜、计数板、草酸铵稀释液（自配）、瑞氏染液（购买）。

1.3 方法 分析前各仪器的常规保养，质控在控，严格按操作规程测定。

2 结果

严格按照操作步骤，将EDTA-K2、枸橼酸钠和肝素锂抗凝血分别用SYSMEX XT-2000i和迈瑞BC5300全自动血细胞分析仪检测，检验测得其血小板结果见附表。由此可见，该病例是由EDTA抗凝剂导致血液中血小板发生聚集，所引起的EDTA依赖性血小板假性减少 （PTCP）。

在这2例患者中的推片、染色、镜检均可见血小板有成团聚集分布的情况，同时在这2例患者的血细胞分析仪的白细胞直方图上见不到小细胞的前半个峰，而只有后半个峰及大细胞群峰。笔者应用另一个血细胞分析仪复查结果显示与此无差异。但用枸橼酸钠和肝素锂抗凝的血液标本检测和末梢血血小板计数则未见减少，而临床病因也未提示有出血倾向。由此可见，这2例患者的血小板计数减少并不是真正的减少，而是由EDTA抗凝导致的血小板假性减少。两血细胞分析仪对各例检测对象的血小板计数无显著差异。但与用枸橼酸钠和肝素锂抗凝的血液用血细胞分析仪分析，以及末梢血人工血小板计数的方法对EDTA依赖性血小板聚集进行比较，则血小板计数测定结果有显著差异。

3 讨论

目前，国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐EDTA-K2作为血细胞计数的抗凝剂正是由于其具有红细胞、白细胞、血小板体积和形态不发生改变的优点，与此同时不再使用枸橼酸钠等抗凝剂。但某些患者体外的EDTA抗凝血在室温条件下，其血小板会发生EDTA依赖性凝集。血细胞自动分析仪对凝集体的结构、血小板数目不能确认，从而使仪器法血小板计数假性减少[2]。但它偶尔可导致血小板聚集，发生血小板假性减少。据报道PTCP的发生率约为0.05%[3]。附表中EDTA抗凝检验结果显著低于其他两种抗凝结果，而枸橼酸钠抗凝结果略低于肝素锂抗凝结果，可能与枸橼酸钠是1∶9抗凝，血液有所稀释有关。对于在这2例患者中，血小板计数减少这可能与血小板表面存在某些隐匿性抗原有关，由于EDTA的抗凝使血小板活化，形态发生改变，隐匿性抗原的表位构象也随之改变。这些活化的血小板与存在于血浆中的自身抗体结合后激活了细胞膜中的某些能活化血小板纤维蛋白原受体的活性物质，促使血小板与纤维蛋白原聚集成团，影响了血小板计数。而使用枸橼酸钠抗凝剂和肝素锂抗凝剂未能引起活化，因此未发生血小板聚集，计数也没有减少。

虽然EDTA依赖性血小板假性减少的现象并不多见，发生率很低，但是一旦发生，就会给患者增加一些临床不必要的检查，甚至出现误诊、误治现象。因此对于血小板计数低的样品，仪器计数可信度较差，应以改用枸橼酸钠和肝素锂抗凝血在血细胞分析仪上复查血小板，同时镜检片中血小板分布情况或末梢血手工法复查[4]。

同时值得注意的是采集血标本后应在放置10min内再测定，可有效防止血小板产生的可逆性聚集。待检血液不宜低温度贮存，并且时间也不宜超过4h。否则会因为血小板易粘附、聚集、破坏发生自溶变形，体积缩小，影响PLT和MPV值。因此采血后应在4h以内完成工作[5]。

研究资料表明，EDTA依赖性假性血小板减少症是由EDTA盐抗凝时可诱导血小板互相聚集，堆积发生卫星现象（血小板围绕在单核细胞或淋巴细胞周围呈现卫星现象）[6]，致使全自动血细胞分析仪不能确认血小板而计数偏低[7]。EDTA抗凝血引起的假性血小板减少可见于正常人，但多数情况下伴发某些疾病如癌症、自身免疫性疾病、传染性单核细胞增多症、肺心病、肝病及一些原因不明的病症[8]。

附表 同一份标本加不同抗凝剂在两种血细胞分析仪上检测的PLT结果（×109/L）

EDTA依赖性假性血小板减少现象应该受到重视，特别是住院患者的抗凝血样本。在临床工作中，对于出现的单纯血小板减少应结合患者的病情、体征、血凝分析等实验室检查综合分析，首先排除EDTA PTCT的可能，力求为临床提供最准确的信息。遇到类似现象，可采取相应的措施予以纠正，以获取准确的实验数据。如采用抽血后立即检测、手工计数血小板及血涂片镜检或采用其他种类抗凝剂来鉴别。有文献报道，当EDTA依赖性血小板减少时，可用其他抗凝剂作血小板计数，可避免血小板假性减少，如枸椽酸钠或NaF。