HPLC法测定壮心口服液中柚皮苷和橙皮苷的含量

2013-10-17王希东李文俊王秀琴

实用医药杂志 2013年1期

王希东，李文俊，王秀琴

壮心口服液是371医院根据慢性心力衰竭发病机理及临床特点，采用辨病与辨证相结合，用药剂量与心衰程度相结合，组方采用君、臣、佐、使，研制出的一种口服液。壮心口服液重用人参补气回阳、莪术活血共为君，葶苈子消肿行水为臣，枳实消痞除积为佐，茯苓健脾祛湿利水为使。具有补气活血、祛湿利水之功，用于冠心病、高血压性心脏病、风湿性心脏病、肺原性心脏病及心肌病等引起的心功能不全。为有效控制药品质量，本试验参照相关文献，以枳实中的柚皮苷和橙皮苷为质控成分，采用HPLC法进行了含量测定方法的研究[1，2]。结果表明，该法操作简便、快速、重现性好，为壮心口服液的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

岛津-高效液相色谱仪，岛津LC-10ATVP泵，SPD-10A VP紫外检测器，77251自动进样器，N2000双通道色谱工作站；AS3120A超声波清洗器；AL104电子分析天平（瑞士梅特勒公司）。柚皮苷对照品（含量测定用，批号110722-200309）和橙皮苷对照品（含量测定用，批号110721-200512）由中国药品生物制品检定所提供；壮心口服液由解放军第371医院制剂室提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱C18（2）5μ 150×4.6 mm柱；流动相：乙腈-0.05%磷酸（20∶80）；流速：1.0 ml/min；检测波长：284 nm；柱温：35 ℃；进样量：20μl。

2.2 对照品溶液的制备分别取柚皮苷和橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇分别配制成含柚皮苷680μg/ml和橙皮苷 160 μg/ml的对照品母液。分别精密量取 1、3、5、7、9 ml对照品母液置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 68、204、340、476、612 μg/ml的柚皮苷对照品溶液和浓度为 16、48、80、112、144 μg/ml的橙皮苷对照品溶液。

2.3 线性关系的考察分别精密吸取上述稀释好的对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以测得的峰面积积分值为纵坐标、进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。柚皮苷回归方程：y=3E+06x-1E+06，r=0.9998线性范围为1.36～12.24μg；橙皮苷回归方程：y=6.48E+05x-2.97E+05，r=0.9997线性范围为 0.32～2.88μg，结果表明：柚皮苷和橙皮苷进样量与峰面积具有良好的线性关系。

2.4 供试品溶液的制备精密量取壮心口服液样品5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.5 阴性对照试验取去枳实的阴性制剂，按“2.4”项下方法制备供试液，按上述色谱条件测定。结果阴性对照溶液在与橙皮苷和柚皮苷相同保留时间处，无色谱峰出现。表明阴性样品无干扰，此方法具有专属性。色谱图见图1～4。

图 1 柚皮苷对照品图谱

图 2 橙皮苷对照品图谱

图 3 壮心口服液图谱

图 4 阴性样品图谱

2.6 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件重复进样5次，20μl/次，结果柚皮苷峰面积的RSD＝0.33%（n＝5），橙皮苷峰面积的 RSD＝0.27%（n＝5）。

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液分别在 0、2、4、6、8 h进样，测得柚皮苷峰面积的 RSD＝0.95%（n＝5），橙皮苷峰面积的 RSD＝1.34%（n＝5），结果表明在测定条件下，供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.8 重复性试验按上述“供试品溶液的制备”方法，对同一批样品分别制备5份供试品溶液，按 “样品含量测定”项下，各吸取20μl进样测定，结果柚皮苷平均含量为1.93 mg/ml，RSD为 1.18%；橙皮苷平均含量为 0.39 mg/ml，RSD为1.65%。

2.9 回收率试验精密量取已知含量的样品2.5 ml，6份分别精密加入柚皮苷对照品溶液（680 μg/ml）8.5、7、5.5 ml；另取6份分别精密加入橙皮苷对照品溶液（160μg/ml）7、6、5 ml。按上述“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，按“样品含量测定”项下，各吸取20μl进样测定，计算回收率，结果见表 1、2。