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止咳平喘合剂对哮喘大鼠气道炎症及细胞因子水平影响的实验研究

2013-09-26马红莺长江大学医学院湖北荆州434023

长江大学学报(自科版) 2013年33期
关键词:趋化因子平喘合剂

马红莺 (长江大学医学院,湖北 荆州 434023)

支气管哮喘作为临床常见呼吸系统慢性炎症,主要由多种炎症细胞及相关细胞因子介导[1]。患者临床表现多为咳嗽、胸闷、气急等,且有晨昏加重特点。哮喘患者气道高反应性基础为慢性炎症反应,其中嗜酸性粒细胞及Th1/Th2细胞因子水平稳态在气道慢性炎症发生、发展过程中发挥着关键作用[2-3]。本次实验研究通过空白对照组、哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组大鼠肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞数量,嗜酸性粒细胞趋化因子水平,血清Th1、Th2细胞因子水平等进行比较,探讨止咳平喘合剂对哮喘大鼠气道炎症及Th1/Th2细胞因子水平的影响及作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本次实验研究120只雄性SD大鼠由长江大学医学院实验动物中心提供,均为清洁级成年健康鼠。随机分为4组,即空白对照组、哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组,每组各30只。4组大鼠体质量、年龄组间比较无统计学差异 (P>0.05)。

1.2 动物模型建立及给药处理方法

哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组大鼠0.1%卵白蛋白及10%氢氧化铝多点注射造模,时间为2周,同期给予空白对照组大鼠相同剂量生理盐水注射;造模完成后,哮喘模型组大鼠给予10ml/kg生理盐水每天1次灌胃;激素治疗组大鼠给予 (强的松8mg+生理盐水10ml)/kg每天1次灌胃;而止咳平喘合剂组大鼠给予 (止咳平喘合剂20mg+生理盐水10ml)/kg每天1次灌胃,处理时间为4d。并于总实验时间第16、17、18天对哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组大鼠进行1%卵白蛋白超声雾化吸入25min以激发哮喘发作,空白对照组大鼠同期给予相同剂量生理盐水雾化吸入。

1.3 评价指标

1.3.1 肺泡灌洗液白细胞、嗜酸性粒细胞数量及嗜酸性粒细胞趋化因子水平测定 行支气管肺泡灌洗,收取灌洗液;白细胞计数:取150μl支气管灌洗液加入同等体积白细胞稀释液,光镜下计数;嗜酸性粒细胞计数:支气管灌洗液1200转/min离心8~10min,细胞涂片HE染色,连续计数600个细胞后进行嗜酸性粒细胞计数;嗜酸性粒细胞趋化因子水平测定:大鼠右肺中性福尔马林固定,石蜡包埋切片,免疫组化后进行阳性细胞积分光密度 (IOD)Eotaxin测定,采用Image-ProPlus软件。

1.3.2 血清Th1、Th2细胞因子水平测定 最后一次哮喘发作激发后进行大鼠下腔静脉采血,离心后取上清液ELISA测定IL-4、IFN-γ水平。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 4组大鼠肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞数量及嗜酸性粒细胞趋化因子水平比较

哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组肺泡灌洗液白细胞、嗜酸性粒细胞数量及嗜酸性粒细胞趋化因子水平均明显高于空白对照组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);哮喘模型组肺泡灌洗液白细胞、嗜酸性粒细胞数量及嗜酸性粒细胞趋化因子水平均明显高于空白对照组、激素治疗组及止咳平喘合剂组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);同时止咳平喘合剂组肺泡灌洗液白细胞、嗜酸性粒细胞数量及嗜酸性粒细胞趋化因子水平均明显高于激素治疗组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 4组大鼠肺泡灌洗液中白细胞、嗜酸性粒细胞数量及嗜酸性粒细胞趋化因子水平比较

2.24 组大鼠血清Th1、Th2细胞因子水平比较

哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组血清IL-4因子水平均明显高于空白对照组,而IFN-γ水平明显低于空白对照组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);哮喘模型组血清IL-4因子水平均明显高于空白对照组、激素治疗组及止咳平喘合剂组,而IFN-γ水平明显低于其他3组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);同时止咳平喘合剂组肺血清IL-4因子水平明显高于激素治疗组,而IFN-γ水平明显低于激素治疗组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05)。见表2。

表2 4组大鼠肺泡血清Th1、Th2细胞因子水平比较

3 讨 论

国内外学者认为哮喘发生发展病理生理学基础为气道炎症细胞浸润导致的粘膜慢性非特异性炎症[4]。嗜酸性粒细胞是气道非特异性炎症发生发展过程中的关键效应细胞之一,已有研究证实[5-6],嗜酸性粒细胞水平降低对于改善哮喘症状具有重要意义。而Eotaxin则是活化嗜酸性粒细胞作用最强的一种细胞因子,其水平与哮喘症状严重程度密切相关。同时近年来研究证实Th1/Th2细胞因子水平稳态破坏亦是诱发、维持哮喘的重要因素[7];Th2细胞因子水平优势导致气道高反应性进展。其中IFN-γ和IL-4分别是Th1/Th2细胞因子代表类型;IL-4能够诱导B细胞增殖分化,促进IgE分泌,加重气道炎症;而IFN-γ则具有高效IgE分泌拮抗作用,可有效降低Th2型细胞因子水平。故本次试验中进行FN-γ和IL-4测定能够准确反映机体Th1/Th2细胞因子水平稳态改变情况。

中医认为哮喘因痰气相阻,气逆失降导致。病机为先天不足、脏腑失调、外泄入侵。治疗关键在于化痰降气、宣肺平喘。止咳平喘合剂是由全国名老中医王晖创立的中药方剂,主要组分为麻黄、生甘草、杏仁、枳壳、三叶青、广地龙、黄芩、桑白皮、羊乳、苏子、白芥子、莱菔子等。其中麻黄宣肺利气,杏仁降气肃肺,生甘草则起到调和二药,宣降肺气作用;枳壳理痰顺气;三叶青、广地龙、黄芩及桑白皮镇咳、平喘、解痉;羊乳润肺祛燥;苏子、白芥子及莱菔子则化痰利气。诸药合用共奏解表祛痰、止咳平喘、宣肺降气之功效。

本次研究显示,哮喘模型组、激素治疗组及止咳平喘合剂组肺泡灌洗液白细胞、嗜酸性粒细胞数量,嗜酸性粒细胞趋化因子及血清IL-4因子水平均明显高于空白对照组,而IFN-γ水平明显低于空白对照组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);哮喘模型组肺泡灌洗液白细胞、嗜酸性粒细胞数量,嗜酸性粒细胞趋化因子及血清IL-4因子水平均明显高于空白对照组、激素治疗组及止咳平喘合剂组,IFN-γ水平明显低于其他3组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05);同时止咳平喘合剂组白细胞、嗜酸性粒细胞数量,嗜酸性粒细胞趋化因子及血清IL-4因子水平均明显高于激素治疗组,而IFN-γ水平明显低于激素治疗组,组间比较差异有统计学意义 (P<0.05)。

综上所述,止咳平喘合剂对哮喘大鼠气道炎症具有确切抑制作用,能够有效调节Th1/Th2细胞因子水平,作用机制可能与下调嗜酸性粒细胞趋化因子水平有关。

[1]俞亚丽,王媛,周忠辉,等 .止咳平喘合剂对哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子影响的实验研究 [J].中华中医药学刊,2010,28(12):2578-2579.

[2]Carneiro ER,Xavier RA,De Castro MA,et al.Electroacupuncture promotes a decrease in IFNlammatory response associated with Th1/Th2cytokines,nitric oxide and leukotriene B4modulation in experimental asthma[J].Cytokine,2010,50 (3):335-40.

[3]王媛,周忠辉,俞亚丽,等 .止咳平喘合剂影响哮喘大鼠嗜酸粒细胞及Eotaxin表达的实验研究 [J].中华中医药学刊,2012,30(3):573-574.

[4]Kim YS,Choi SJ,Choi JP,et al.IL-12-STAT4-IFN -gamma axis is a key downstream pathway in the development of IL-13-mediated asthma phenotypes in a Th2type asthma model[J].Exp Mol Med,2010,42 (8):533-546.

[5]Ke X,Huang J,Chen Q,et al.Protective effects of combined Mycobacterium bovis BCG and interleukin-12vaccination on airway IFN-lammation in a murine model of allergic asthma [J].Clin Invest Med,2010,33 (3):196-202.

[6]王真,周忠辉,俞亚丽,等 .止咳平喘合剂干预哮喘大鼠气道炎症及IL-12、IL-13水平的实验研究 [J].中华中医药学刊,2012,30 (6):1278-1279.

[7]Hansbro PM,Kaiko GE,Foster PS.Cytokine/anti-cytokine therapy-novel treatments for asthma [J].Br J Pharmacol,2011,163(1):81-95.

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